反相高效液相色谱法测定心脉通分散片中葛根素的含量

心脉通分散片由当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、葛根、槐花、毛冬青、夏枯草、三七十味药组成，功能活血化瘀、通脉养心、降压降脂，用于高血压、高脂血症等。葛根为本品中主药之一，其所含葛根素具有降低血压、扩张冠脉、增加脑血流量及降低血管阻力等作用，因此我们采用高效液相色谱法测定本品中有效成分葛根素的含量，经方法学验证，表明本方法简便、快速、准确，可用于控制成品的质量。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪(包括SCL-10A VP控制器、LC-10AT VP泵、SPD-10A VP检测器、SIL-10AD VP自动进样器、DGU-14A脱气机、CTO-10AS VP柱温箱、CLASS-VP工作站)；KQ-250型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；Mettler M3电子天平；TG328A电光分析天平(上海天平仪器厂)；Lambda 12紫外分光光度计(美国P.E.公司)。

葛根素对照品(供含量测定用)，购于中国药品生物制品检定所，批号：752-200108。心脉通分散片，自制。甲醇为色谱纯，水为重蒸水。

2 方法与结果[1-5]

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C18 5 μm，ID 4.6 mm×200 mm；流动相：甲醇-水(23∶77)；流速1.0 ml/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃；进样量：5 μl。

2.2 对照品溶液的制备

取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含65 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)45分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线的绘制

取葛根素对照品约8.5 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，从中分别精密吸取5 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程为：y=20099+4758765x，r=0.9999。结果表明葛根素进样量在0.08528～0.5117 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取葛根素对照品5 μl注入液相色谱仪，记录峰面积，重复测定6次，结果RSD为0.31%。

2.6 供试品溶液稳定性试验

取供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、12小时分别精密吸取5 μl注入液相色谱仪，记录峰面积，结果表明样品溶液在12小时内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号样品6份，精密称定，依法平行测定，结果平均含量为 3.0741 mg/g，RSD为0.75%。

2.8 加样回收试验

取已知含量的样品6份，精密称定，分别精密加入一定量的葛根素对照品，依法测定，计算回收率，结果见表1。

2.9 阴性干扰试验

取阴性对照样品按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果在选定的色谱条件下，供试品中葛根素峰与其他组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照对测定无干扰。见图1～3。

2.10 样品测定

取样品3批，依法测定含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 样品前处理分别对不同提取溶剂及不同超声处理时间进行了比较，结果表明以甲醇为溶剂，超声处理45分钟即可基本提取完全。

3.2 本品为复方制剂，所含成分较复杂，对分离有一定影响，经实验，确定以甲醇-水(23∶77)作为流动相，能使葛根素达到基线分离，且其他成分对测定无干扰。

3.3 本法亦可用于葛根药材及其复方制剂的含量测定。

图1 葛根素对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照色谱图

表1 加样回收试验结果

编号称样量(g)样品中含葛根素的量(mg)加入对照品的量(mg)实测值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.50111.5401.6083.13098.8820.50501.5521.5363.089100.0730.50251.5451.4683.030101.1640.50131.5411.5393.05498.3199.570.9950.50801.5621.6303.18299.3960.50161.5421.5433.07999.61

表2 样品葛根素含量测定结果

注：表中数据为每片心脉通分散片中葛根素含量

[1]宿洁，杨晓云，吴爱英.HPLC测定天乐胶囊中葛根素含量[J]．中国临床药学杂志，2003，12(2)： 94-95.

[2]国家药典委员会.中国药典二部[S].北京：化学工业出版社，2005.

[3]廖丽云，徐小平，田晨旭，等.RP-HPLC测定单体绿原酸的含量[J].成都医学院学报，2007,2(2)：109-111.

[4]廖丽云，徐小平，任霞.高效液相测定心达康片的含量[J].成都医学院学报，2006,1(1)：48-51.

[5]刘凯，王清华．高效液相色谱法测定血能达含片中葛根素的含量[J].中国现代应用药学杂志，2003，20(1)：61-62.