牛奶中硒含量测定方法的分析

吕战伟

（吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118）

硒是人和动物必需的微量元素之一，是机体红细胞谷胱甘肽过氧化物酶的组成成分。对人体的健康和生长发育有一定影响[1]。1988年，中国营养学会推荐7岁以上人群膳食硒的含量为50μg·d－1；2000年，美国医学研究所推荐成年人膳食硒的需要量为 60 μg·d－1，最大耐受量为 400 μg·d－1[2]。牛奶是人体消化吸收率最高的食品之一，随着我国人民生活水平的日益提高，牛奶已成为众多消费者的常规食品，许多人养成了定期定量食用牛奶的习惯。因此，对牛奶进行硒强化是一条补硒的捷径，既有利于人体吸收，也更易被消费者所接受[3]。测定奶中的硒含量，对评估人的硒摄入量，提高人们的健康水平有重要意义。本文依据近年来对血、水、毛发、尿、内脏组织、蔬菜粮食、人乳、奶粉、牛奶等生物样品中硒的测定方法，综述了牛奶中硒的分析方法，为研究者选择合适的检测方法提供参考。

1 样品的采集、贮藏及前处理

1.1 奶样的采集

奶样品必须通过机械泵收集，操作应符合规范。所用容器须先用洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净，30%硝酸浸泡48 h，然后用蒸馏水冲洗数次，最后再用超纯水浸泡24 h烘干备用。

1.2 贮藏

采集到的乳样品须经过冷冻干燥，用液氮成干冰立即处理，然后于-14、-18、-20、-70℃等温度下冷冻保存[4]。

1.3 前处理

目前，检测硒含量的预处理方法有许多种，见附表[5]。

附表 预处理方法优缺点比较

进行牛奶预处理时，必须根据硒的物理、化学性质以及实验条件来选择合适的方法。另外，无论采用何种处理方法，最好都要做空白和回收率实验，以便在数据分析时做对照参考。

2 分析测定

2.1 荧光分析法

荧光分析法是利用紫外线、红外线或波长较短的可见光照射某物质，产生荧光，利用荧光光谱、荧光强度、荧光寿命等特性及其相互关系进行分析。此法灵敏度、精密度及准确度高。顾俊等采用2,3-二氨基萘（DAN）荧光测定法测定母乳中硒，乳样经混合酸消化后，硒化合物转变成四价无机硒，与DAN反应生成4,5-苯丙苤硒脑绿色荧光物质，能被环己烷萃取，其荧光强度与硒的浓度在一定条件下成正比，相对标准偏差（RSD）为2.9%，加标回收率为92%～99%[6]。同时测定了5种品牌鲜牛奶的硒含量，结果为 14.2～21.3 μg·L－1，平均值为 19.1 μg·L－1，与王祥朴报道的 19.4 μg·kg－1相符[6-7]。胡小玲等利用优化选择的实验条件进行氢化物发生-原子荧光光度法测定水中硒，硒浓度在0～0.20 mg·L－1范围内有良好的线性关系，r=0.9997，检出限为 0.78 μg·L－1，RSD 为 2.3%～7.9%，回收率为96%～105%。此方法准确、灵敏、稳定[8]。

2.2 原子吸收光谱法

原子吸收光谱法是利用被测物质的基态原子选择性吸收辐射光的性质进行定量分析。为了获得足够的灵敏度，首先将待测物样品中的硒还原成挥发性氧化物。使其与共存离子分离，这就消除了由于分子吸收或光散射引起的非特征光线损失和某些共存元素的干扰。谭力红等研究用火焰原子吸收分光光度法间接地测定水中痕量硒，与直接法测定硒相比，这种间接测定硒的方法有效地克服了直接法测定硒过程中的干扰偏差，用该方法测定水样中的硒，回收率为 96%～104%，检出限为 0.038 μg·mL－1，RSD为3.8%[9]。李付江等用石墨炉原子吸收法测定牛奶中的硒，以钯和镁为基体改进剂，加入Triton X-100改善样液的表面张力，使硒的灰化温度提高到1 400℃，可提高测定的可靠性[10]。对多个牛奶样品测定，RSD＜10%，加标回收率为94%～104%，精密度和准确度均较好，测定方法简便、快捷。

2.3 电感耦合等离子体质谱法

电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）是一种用于超灵敏的多元素分析和同位素测量的现代分析技术，特别是在克服氩基离子干扰、提高灵敏度方面提供了有效途径，ICP-MS与各种在线分离技术的联用已广泛应用在硒形态分析中，高分辨（或碰撞室）MC-ICP-MS能够获得表面电离质谱（TIMS）相媲美的同位素丰度比测定结果，其灵敏度高、用样量少、测量时间短[11]。于振花等采用微波消解-电感耦合等离子体质谱对国家标准物质灌木枝叶和对虾及国际标准物质角鲨肉和龙虾肝胰脏进行分析，所得结果与其参考值吻合较好，硒元素的检出限为0.18 μg·L－1，3 次测定的 RSD＜5%。对市场上的富硒产品进行硒含量的检测，发现鸡蛋清中的硒含量10.4 mg·kg－1，高于鸡蛋黄中的硒含量 7.4 mg·kg－1。

2.4 其他方法

对于硒的测定方法，还有发射光谱法、色谱法、中子活化分析法和化学发光淬灭法等。联用技术将为人们对硒进行彻底地分析提供更方便、更快速的分析方法，尤其是色谱与原子光谱、荧光光谱、分光光度法和其他技术的联用。

3 小结

当前牛奶中微量硒的检测工作仍存在着诸多困难，因此在实际工作中，要根据样品的数量、性质、含硒量以及其他对测定的特殊要求，选择合适的分析方法。

[1] 孔祥瑞.必需微量元素的营养、生理及临床意义[M].合肥:安徽科学技术出版社,1982.

[2] 王加启,王连群,卜登攀,等.奶牛日粮中添加富硒酵母对乳硒和血清硒含量的影响[J].中国畜牧兽医,2008,35（4）:13-16.

[3] 孙微.富硒牛奶的生产工艺及其开发[J].中国食物与营养,2005（11）:45-46.

[4] 奚利群.牛乳中的硒及其分析方法[J].中国食物与营养,2001,（4）:33.

[5] J E坎特尔,Cantle J E编,黄德玲译.原子吸收光谱分析[M].北京:科学技术文献出版社,1990.

[6] 顾俊,王窕人.荧光分光光度法测定母乳中硒[J].中国公共卫生,2001,17（9）:830.

[7] 王祥朴.卫生学[M].北京:人民卫生出版社,1997.

[8] 胡小玲,陈剑刚,张瑰,等.氢化物原子荧光法测定水中硒优化条件选择[J].现代科学仪器,2003（5）:35-36.

[9] 谭力红,祝凤荣.火焰原子吸收法间接测定水中硒[J].华南师范大学学报（自然科学版）,2000（1）:77-81.

[10] 李付江,刘萍,刘岩.石墨炉原子吸收法直接测定牛奶中硒[J].环境监测管理与技术,2005,17（3）:35.

[11] 王军,刘丛强,王莹莹.电感耦合等离子体质谱测量硒的研究进展[J].质谱学报,2008,29（5）:311-317.