6种血清的醋酸纤维素薄膜电泳分析

陈书明，曹新鹏，胡 军，常云花

（山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801）

醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法。由于它具有操作简单、快捷、价廉、对样品无吸附等优点，目前被广泛用于血清蛋白、脂蛋白、酶等物质的分离分析中。该方法已成为生物与医学研究及临床检验的常规技术，也是生物类及医学类专业学生必须掌握的一项技术。然而，因不同动物的血清蛋白组分与含量存在差别，所以不同血清的醋酸纤维素薄膜电泳效果存在很大差异。为了分析这一差异，并提高学生实验的效果，一些学者进行了研究。周丽亚等[1]用牛血清代替人血清进行醋酸纤维素薄膜电泳，实验结果较稳定，重复性较好；蔡杰等[2]用醋酸纤维素薄膜电泳法分离了鸡血清；陈巍等[3]采用醋酸纤维素薄膜电泳法分析了宁夏滩羊血清蛋白；刘建强等[4]采用醋酸纤维素薄膜电泳法对青海蟾蜍血清蛋白进行了分析。但尚未见相同实验条件下，用醋酸纤维素薄膜电泳法同时分析健康人和不同动物血清的报道。

本研究采用相同的电泳条件，对人、鸡、牛、兔、羊与猪6种血清的蛋白组分进行了醋酸纤维素薄膜电泳分析，从而比较不同血清蛋白组分之间的差异。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验样品 健康人血清由山西省晋中市第二人民医院提供；健康鸡、牛、兔、羊、猪血清由山西农业大学畜牧站提供。

1.1.2 材料、试剂与仪器 醋酸纤维素薄膜（2 cm×8 cm）由浙江台州市路桥四甲生化塑料厂生产；试剂均为国产分析纯；DYY-2型电泳仪为北京市六一仪器厂的产品。

1.2 实验方法

参考刘维全等[5]的方法进行。

1.2.1 准备和点样 将醋酸纤维素薄膜浸入巴比妥缓冲液中过夜[6]，用镊子轻轻取出薄膜，放在干净的滤纸上，轻轻吸去两面多余的缓冲液。用载玻片（去一角，使宽度为1.6 cm）侧面分别蘸取相同量的人、鸡、羊、兔、猪、牛血清，分别垂直印在6张浸泡过的醋酸纤维素薄膜上，点样线距膜边缘的距离为2.0 cm；待血清渗入膜内后，移去点样用载玻片；将点好样的薄膜紧贴在电泳槽中浸透缓冲液的滤纸桥上，点样端靠近负极。

1.2.2 电泳 电泳前平衡10min；然后用60 V电压电泳5min；再调到95 V电压，电泳55min。

1.2.3 染色、漂洗、透明与照相 电泳完毕后，立即取出薄膜，浸入染色液中染色6min；然后用漂洗液漂洗，每隔10min换1次漂洗液，连续换4次；随后用滤纸吸去薄膜上多余的溶液，用电吹风吹干；最后将吹干的薄膜浸入透明液甲中，2min后取出，再浸入透明液乙中，1min后迅速取出薄膜并紧贴于干净载玻片上，电泳条带清晰呈现出来，用数码相机拍照。

2 结果与分析

6 种血清的电泳图谱如图1～6所示，各图中的（+）代表正极，（-）代表负极。

由图1可知，鸡血清的电泳图谱为4条带，从正极到负极依次为清蛋白和α，β，γ球蛋白。其中，清蛋白含量最高，球蛋白含量高低顺序为：γ球蛋白＞β球蛋白＞α球蛋白。

由图2可知，牛血清的电泳图谱也是4条带，从正极到负极依次为清蛋白和α，β，γ球蛋白。其中，清蛋白含量也是最高，球蛋白含量高低顺序为：γ球蛋白＞β球蛋白＞α球蛋白。

由图3可知，人血清的电泳图谱为5条带，从正极到负极依次为清蛋白和α1，α2，β，γ球蛋白。其中，清蛋白含量最高，α1球蛋白含量最少，α2球蛋白与β球蛋白含量相当，γ球蛋白的含量略比α2球蛋白、β球蛋白高。

由图4可知，兔血清的电泳图谱也为5条带，从正极到负极依次为清蛋白和α1，α2，β，γ球蛋白。其中，清蛋白含量也是最高，α1，α2，β球蛋白含量大致相当，γ球蛋白含量略低。

由图5可见，羊血清的电泳图谱为4条带，从正极到负极依次为清蛋白和α，β，γ球蛋白。其中，清蛋白含量最高，球蛋白含量高低顺序为：γ球蛋白＞α球蛋白＞β球蛋白。该结果与文献[3]相一致。

由图6可知，猪血清的电泳图谱为3条带，从正极到负极依次为清蛋白，α与β球蛋白混合带，γ球蛋白。α球蛋白与β球蛋白混合带的蛋白含量最高，γ球蛋白的含量与清蛋白的含量相当。

综上所述，在各种血清中，清蛋白的含量都是最高的；其他各种球蛋白的种类与含量随血清的种类不同而存在差异。而本研究仅是定性分析，各种蛋白组分的定量关系尚需进一步研究。

3 讨论

用醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的主要原理是：血清中的各种蛋白组分分子量不同，以及在同一缓冲体系下所带净电荷也存在差异，在同一电场下其泳动速率就不同，从而使血清中的各种蛋白组分得以分离。但要想取得好的实验结果，还应当注意以下几个方面。

3.1 醋酸纤维素薄膜的选择与预处理

薄膜是电泳的支持物，薄膜的质量好坏会直接影响到电泳效果。薄膜应质地均匀、无斑点，可先将挑选好的薄膜的无光泽面用铅笔标号，再浸入电极缓冲液中过夜，使其完全浸透，以达到平衡状态。

3.2 点样

它是血清蛋白电泳的关键步骤，也是最容易出问题的环节。若点样量过小，电泳图谱的显色就不明显；点样量过大，电泳条带会变宽，使电泳条带不易清晰分离。应根据实验条件不同，摸索出一个合适的点样量。点样时应注意用镊子从缓冲液中轻轻取出浸泡好的醋酸纤维素薄膜，要置于洁净的滤纸上轻轻吸去多余的水分（切勿用力挤压），以使薄膜保持湿润状态。如果这时看到薄膜表面有白斑，说明该薄膜质地不均匀，会影响电泳效果，应弃之。

3.3 电泳

将点好样的薄膜的点样端平贴在电泳槽阴极端的滤纸桥上，薄膜的另一端平贴在电泳槽阳极端的滤纸桥上。点样线不能与滤纸桥接触，以防止样品扩散，影响实验效果。薄膜与滤纸桥接触处应贴紧，二者之间不能有气泡残留。薄膜应悬空绷直，中间不能下垂。电泳前需平衡10min左右，其目的是使缓冲液完全浸润薄膜，以达到平衡状态。电泳刚开始时，电压选择应稍微低一点，本研究选用60 V电压电泳5min，然后再将电压调高到95 V，再电泳55min。

3.4 染色

用氨基黑10 B-甲醇溶液染色，染色时间以薄膜内呈现清晰蛋白条带时为准，适宜5～8min（若染色时间过长，薄膜底色不易脱去；染色时间过短，着色浅，不易观察与拍照）。将染好色的薄膜放入漂洗液中反复漂洗，使其背景色基本脱掉。但要特别注意用过的漂洗液不可倒掉，可经过活性炭吸附有机色素后循环使用，这样可以节约大量试剂，大大降低实验成本。

［1］ 周丽亚，高静，吴兆亮，等.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的改进[J].生物学杂志，2008，25（2）：67-68.

［2］ 蔡杰，刘芸.醋酸纤维薄膜电泳法分离测定鸡血清蛋白质[J].贵州大学学报，2005，2（7）：125-128.

［3］ 陈巍，龚伟宏.宁夏滩羊血清蛋白组分含量的研究[J].中国草食动物，2003（专辑）：70-71.

［4］ 刘建强，孟青妹.青海蟾蜍血清蛋白质成分的电泳分析[J].中国兽医科技，2003，33（10）：64-65.

［5］ 刘维全，高士争，刘芃芃，等.动物生物化学实验指导（3版）[M].北京：中国农业出版社，2008：95-97.

［6］ 廖飞，王咏梅，左渝萍，等.点样位置对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳行为的改变[J].实验室研究与探索，2004，23（4）：17-23.