肝癌组织IGFBP2、GRP94表达的病理意义

姚卫红

（长治市人民医院，山西 长治046000）

研究显示胰岛素样生长因子结合蛋白-2（insulin-like growth factor binding protein-2，IGFBP2）在肿瘤细胞形成、生长等过程中发挥着重要的作用，在许多肿瘤患者的血清、肿瘤组织和细胞株中都有IGFBP2的表达或表达水平升高［1］。糖调节蛋白-94（glucose-regulated protein，GRP94）在肿瘤免疫中的作用也已成为研究的热点，已经证实它具有良好的“分子伴侣”和免疫佐剂的效应，可在体内诱导特异性主动免疫［2］。IGFBP2和GRP94在肿瘤组织中如何表达且是否具有相关性，目前还没有文献报道。因此为探讨IGFBP2、GRP94与肝硬化和肝癌（hepatocelluar carcinoma，HCC）的关系，本研究检测了35例HCC患者的癌组织和相应的癌旁组织以及20例肝硬化患者肝组织中IGFBP2、GRP94蛋白的表达，探讨IGFBP2、GRP94蛋白与肝癌的关系及其他们之间的相关性，以探索IGFBP2、GRP94在肝硬化向肝癌发生发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料

35例HCC及相应癌旁组织标本 （肝癌组）、20例肝硬化组织标本 （肝硬化组）均来自2003年11月-2008年11月我院病理科。肝癌组中，男24例，女 11 例，年龄 38 岁～51 岁，平均（43.22±8.93）岁；肝硬化组中，男12例，女8例，年龄13岁～67岁，平均（43.83±14.44）岁；6例正常肝组织标本 （健康对照组）中，男 3例，女 3例，年龄 25岁～57岁，平均（45.33±5.35）岁。健康对照组为手术切除的肝血管瘤外正常肝组织。病理组织标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。肝癌组肿瘤病理分级按WHO标准分为，高分化（G1级）18 例、中分化（G2级）10 例、低分化（G3级）7 例［3］。 肝硬化组中，轻度腹水9例，中度腹水6例，重度腹水5例。

1.2方 法

HCC及相应癌旁组织标本、肝硬化标本、正常肝组织标本均行IGFBP2、GRP94（均为单抗，美国Santa Cruz公司产品）免疫组织化学染色，染色方法按SABC说明书步骤进行 （SABC试剂盒购自北京中山生物技术有限公司）。组织微波预处理，微波抗原修复液为pH6.0柠檬酸缓冲液，经DAB显色后，苏木素复染，中性树胶封片。同时设阴性对照，阴性对照采用磷酸盐缓冲液代替第一抗体。

1.3 结果判定

用Image-Pro Plus型全自动医学图象彩色分析系统进行图象半定量分析，每张切片随机选取5个视野（×400），测定肝组织中棕黄色阳性表达颗粒的积分吸光度值，该值越高表达越强。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 HE染色结果

HCC组中，28例呈梁索型，癌细胞排列成梁状或窦隙状结构；7例呈腺样型，癌细胞排列成假腺样及腺泡状结构。肝硬化组中，厚实、宽度不等的纤维间隔分割肝小叶形成大小不等、形态不整齐的假小叶。健康对照组中肝细胞排列整齐，肝小叶结构完整，仅见少许纤细纤维分布于血管壁。

2.2 免疫组织化学染色结果

2.2.1 IGFBP2在肝组织中的表达 健康对照组仅见少数肝细胞有阳性染色；在肝硬化组可见肝窦内和纤维间隔内的HSC、成纤维细胞、枯否细胞及纤维间隔周围的肝细胞有较强的阳性染色；在肝癌组，阳性定位于癌细胞胞质，呈灶性分布。图象分析结果表明：IGFBP2在肝癌组和肝硬化组肝组织的表达显著高于健康对照组，并且在肝癌组肝组织的表达显著高于肝硬化组肝组织。结果见表1。

2.2.2 GRP94蛋白在肝组织中的表达 35例肝癌组织中30例（85.0%）存在GRP94的表达，不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异，癌旁组织亦存在较弱的表达。人肝癌组织存在GRP94的表达异质性，呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异。结果见表1。

表1 IGFBP2与GRP94在肝组织中表达的定量分析结果 （±s）

表1 IGFBP2与GRP94在肝组织中表达的定量分析结果 （±s）

注：与健康对照组比较，1）P<0.05；与肝硬化组比较，2）P<0.05

组别 例数 IGFBP2 GRP94蛋白健康对照组 6 580.2±83.5 152.6±41.3肝硬化组 20 8475.6±1556.41） 802.6±389.91）肝癌组 35 17731.2±1932.51）2） 3015.4±1851.11）2）

2.2.3 相关性分析 肝组织IGFBP2的表达与肝组织GRP94的表达呈正相关，相关系数r值为0.625。

3 讨 论

IGFBP是能与胰岛素样生长因子 （insulin-like growth factor，IGF）结合的调节蛋白，调节 IGF与其受体的结合能力，从而影响胰岛素样生长因子受体（insulin-like growth factor receptor，IGFR） 下游的信号转导。体外研究显示，IGFBP可通过IGF依赖性和非IGF依赖性两种作用方式，对细胞的生长、分化和存活发挥作用［3-4］。有研究显示，肝癌组血清IGFBP-2水平明显高于肝硬化组和健康对照组［5］。本实验结果显示，在肝硬化、肝癌和正常肝组织的免疫组化中，IGFBP2在健康对照组正常肝组织微弱表达，在肝硬化组和肝癌组肝组织的表达明显增强；在肝癌组织及同一肝癌组织的不同癌细胞表达强度和分布部位存在一定的差异，癌组织比邻近的正常组织表达水平显著升高；肝硬化的病例相差较悬殊，有的病例染色程度及范围与肝癌病例相似；有的病例染色程度与正常肝组织相似，呈低水平表达。如果以上结论成立，那么我们可以推测肝硬化病例相差悬殊的染色程度其实可能显示癌变可能性的大小或者说标志着癌变的进程。

正常细胞生长发育分化过程中，GRP94的少量表达和分布受到细胞周期的严格调控，而肿瘤细胞中由于突变或癌蛋白的存在刺激GRP94的合成，使其呈现持续的高诱导表达［6］。本实验免疫组化染色结果显示，GRP94蛋白在肝癌组肝组织的表达显著高于肝硬化组和健康对照组肝组织的表达。说明GRP94蛋白在肝硬化向肝癌的发展中可能起重要作用，与以往报道相似。本研究结果也显示了肝组织IGFBP2的表达与肝组织GRP94的表达呈正相关，推测IGFBP2和GRP94可能协同发挥作用。IGFBP2、GRP94在肝癌组肝组织表达水平显著高于肝硬化组，在肝硬化组中表现形式的多样性，说明它可能是参与肝硬化向肝癌发展的因素。目前有关它们相互作用的机制还不清楚，有待于今后进一步研究。

［1］邓星辉，杨竹林.胰岛素样生长因子结合蛋白2与肿瘤发生［J］.国外医学·内分泌分册，2003，24（1）：5.

［2］王小平，刘国贞，宋爱利，等.人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义［J］.肿瘤防治杂志，2004，11（11）：1166-1167.

［3］Wolf E，Schneider M R，Zhou R，et al.Functional consequences of IGFBP excess-lessons from transgenic mice ［J］.Pediatr Nephrol，2005，20（3）：269-278.

［4］Ranke M B，Maier K P，Schweizer R，et al.Pilot study of elevated levels of insulin-like growth factor-binding protein-2 as indicators of hepatocellular carcinoma［J］.Horm Res，2003，60（4）：174-180.

［5］杨帆.胰岛素样生长因子结合蛋白-2水平与肝癌关系的研究［J］.临床外科杂志，2007，15（7）：7.

［6］Lim S O，Park S G，Yoo J H，et al.Expression of heat shock proteins （HSP27，HSP60，HSP70，HSP90，GRP78，GRP94）in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinomas and dysplastic nodules［J］.World J Gastroenterol，2005，11（14）：2072-2079.