数码成像技术在ABO血型检测中应用

彭继红，钱 榕，方昌志，熊丽红

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

ABO定型的方法有纸片法、试管离心法、U型微板法、梯形微板法、微柱凝胶法。经典的试管离心方法目前仍被认为是最可信赖的ABO定型方法[1]，但同纸片法一样不适合血站系统大批量的结果处理，不仅费时，而且易出现人为因素所致的差错事故。微柱凝胶法由于利用了分子筛凝胶技术将凝集和游离的红细胞完全隔离开来，操作简单且可标准化操作，结果清晰可靠，便于保存，适合临床推广使用，但不适合于血站大批量检测。U型微板法使用较为广泛，相比过去的手工检测法，已向前迈了一大步，但我们在使用过程中发现该方法的检测有一定的局限性。本中心新引进Xantus加样器与Poseidon数字血型仪联合组成的一体机，利用梯形微板法血型检测系统(采用数码成像技术)，不仅能完成ABO正反定型，且检测反定型弱凝集状态样本的灵敏度较高，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2010年1月～2010年6月的无偿献血者全血标本27882人份，采用EDTA-Na2抗凝。

1.2 试剂和设备 标准抗A、抗B血清 (批号为200903035、200911148)和标准 A、B、O 红细胞(浓度为 2 ～5% ， 批 号 为 201001014、201002031、201003036、201003054、201004058、201006103、201007111、201008124)均由北京金豪生物技术有限公司生产。Xantus加样器与Poseidon数字血型仪一体机(深圳爱康公司)。

1.3 方法 用全自动加样系统将标准红细胞和待检血浆分别加入梯形微板中，振荡混匀，静置反应后，用数字血型分析仪读板。分析反应图像，根据ABO血型定型原则判定反定型结果。

根据血型判读仪已设定的凝集与非凝集临界值，随机选用常规A、B、O、AB型血样各15份，5ml/份，对标本红细胞稀释浓度、标准血清稀释度、红细胞与血浆加样比例、反应静置时间采用正交实验优化试验参数，记录在各种参数条件下正确判读血型的血样数，再通过综合分析得出试验最佳条件。

1.3.1 反定型试验条件 加样比例，标准红细胞37μl和标本血浆13μl、标准红细胞30μl和标本血浆 20μl、标准红细胞 25μl和标本血浆 25μl；震荡后在室温(18～25℃)分别静置 45、60、75min。

1.3.2 正定型试验条件 应正、反定型试验在同一块微板上试验，所以静置时间定为1h，考虑以下因素对试验的影响。标本红细胞稀释浓度设为2%、2.5%、3.0%；标准血清稀释度为 1:7、1:10、1:13；加样比例，标本红细胞37μl和标本血浆13μl、标准红细胞 30μl和标本血浆 20μl、标准红细胞 25μl和标本血浆 25μl。

2 结果

2.1 试验条件 标准红细胞 37μl和标本血浆13μl静置60分钟为正定型最佳条件；2%标本红细胞稀释浓度、1:10标准血清稀释度、加样比例标准红细胞25μl和标本血浆25μl为反定型最佳条件。

2.2 准确率 采用上述最佳试验条件进行正反定型，27882人份一次判读中有15例血型正反定结果出现异常，1例为冷凝集、2例为溶血、12例为重度脂肪血，准确率为99.94%。

2.3 可重复性 随机选用常规A、B、O、AB型血样各15份，5ml/份，重复加样检测3次，每次所有标本均能一次性判读正确，具有良好的可重复性。

3 讨论

目前血站常用的批量检测ABO血型方法为U型微板法、梯形微板法。梯形微板技术是利用孔壁呈梯状的特殊V字型微孔板(10×12孔)，当相应的抗原、抗体发生凝集时，会均匀分布于孔壁，未发生抗原抗体反应的红细胞则沿阶梯滚落于孔底中央，形成圆点，Poseidon软件将每个反应孔分解成6300个像素点，并且按其白度、灰度和黑度3个区域进行分类，分别计算出相关区域的像素数量，再运用模糊数学的方法分析判断，经CCD系统图像数字化处理后,即数码成像后得出血型鉴定结果。U型微板法运用酶标仪仅在微孔直径1个方向上读取30～40个值，再计算相对透光率判断血型结果。比较而言，梯型微板法的判读方式更为完善准确,其准确性也优于U型微板法。从本中心的实验结果看，梯形微板法的准确率达99.94%与有关报道相符[2]；具有良好的可重复性。从引起血型误判的因素分析，溶血和脂肪血仍是影响血型检测准确率的重要因素，为保证血型的准确性，对标本的接收和处理过程至关重要。除溶血和脂肪血影响血型检测外，加样仪吸取的血浆样本量少，堵针或血液样本中纤维蛋白析出均会导致吸样不成功而造成假阴性结果，因此应做好加样仪的日常维护与保养工作，并在加样时注意观察，防止漏加，梯形微板法操作简单，且更节约成本，如抗血清仅需U型微板法的1/10，加之其检测采用自然沉降反应，无需离心和反复振荡，使凝集反应在静置状态完成，反应时间更充裕，从而提高了弱凝集样本的检出率。由于正反定型在一块梯形板上批量完成，实现了正反定型自动校正，防止了错判和误判。检测结果数码成像并数字化处理，原始数据以图象的形式的保存并可打印，从而使血型检测具有长期的可追溯性。

[1]高 峰主编.输血与输血技术[M].人民卫生出版社,2003:90-91.

[2]王福成,施之雍,蔡隽等.梯形微板技术在ABO血型检测中的应用[J].中国输血杂志,2007,20(1):53-55.