九江地区丙型肝炎病毒基因分型

桂亚萍，郑 惠，沃 琤，孔令和

(九江市第三人民医院，江西 九江 332000)

九江地区丙型肝炎病毒基因分型

桂亚萍，郑 惠，沃 琤，孔令和

(九江市第三人民医院，江西 九江 332000)

丙型肝炎病毒；反向点杂交；基因分型

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起输血后非甲非乙型肝炎的主要病原分子。HCV是小的有包膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎病毒属，颗粒大致呈球形，直径约50nm，基因全长约9400个核苷酸。由于RNA复制酶的低保真性和缺乏校正功能，使HCV呈高度异质性。根据HCV的核苷酸序列的差异，可将HCV分成1～6型及不同亚型(以a，b，c等表示)[1]。HCV的基因型及基因亚型的分布具有一定的区域性，不同的基因型及基因亚型所致肝病的严重程度以及对干扰素的治疗反应及用药疗程都不同[2，3]。因此，有必要在治疗前先给予HCV的基因分型检测，根据检测的结果制定治疗方案和疗程。本研究旨在了解九江地区HVCRNA阳性感染者的基因分型分布，以指导临床治疗及预后的判断。

1 材料与方法

1.1 一般资料 试验组为江西省九江市第三人民医院院门诊及住院患者，HCV-RNA均＞5.0×104拷贝/m l共55例，其中男41例，女14例，有输血史43例，年龄22～65岁(平均年龄42岁)。对照组10例，为健康体检者血清标本。

1.2 试剂HCV-RNA核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、丙型肝炎病毒基因分型反向点杂交(PCR-RDB)检测试剂盒：均由中山大学达安基因股份有限公司提供。自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇。

1.3 仪器 美国ABI-7300荧光定量PCR扩增仪，美国ABI2720型PCR定性扩增仪，美国BECKMAN COULTER 64R型低温高速离心机，DKZ-2型电热恒温振荡水槽，BENQ 5000S扫描仪等。

1.4 方法

1.4.1 HCV-RNA-PCR荧光定量检测 严格按照HCV-RNA核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒使用说明书进行操作，(1)RNA提取；(2)逆转录；(3)PCR扩增及荧光定量检测；(4)对HCV-RNA含量≥5×104拷贝/ml的阳性标本进行基因分型检测。

1.4.2 HCVRNA基因分型检测 按照丙型肝炎病毒基因分型反向点杂交检测严格按说明书进行操作：(1)RNA提取与逆转录；(2)PCR扩增；(3)扩增产物进行，反向点杂交与显色。

2 结果

HCV基因分型反向点杂交检测结果；对55例HCV-RNA含量≥5.0×104拷贝/m l的标本及10例健康体检者进行基因分型反向点杂交检测。荧光定量PCR检测HCV-RNA阳性的55例标本其不同基因分型具体检测结果见表1。

表1 HCV基因分型结果

3 讨论

HCV基因型别的分布与地域有很大关系。HCV1b和2a基因型在我国较为常见。其中以1b型为主，某些地区有1a、2b和3b型报道，6a型主要见于香港和澳门地区，在南方边境省份也可见基因6型[1]。本文检测55例HCV–RNA≥104拷贝/ml阳性标本结果显示HCV1b型35例占63.6%，2a型6例占10.9%，6a型12例占21.8%,另检出两例3b型。结果显示九江地区丙型肝炎基因型以1b为主，6a次之，并有少数的2a和3b型。

本文利用PCR反向点杂交法，检测荧光定量PCR HCV-RNA阳性的标本符合率为100%。10例健康体检者对照者血清HCV-RNA荧光定量及PCR HCV-RNA点反杂交检测结果均为阴性，阴性符合率为100%。说明PCR反向点杂交法检测HCV-RNA基因型结果可靠。具有准确性好、灵敏度高、特异性强的特点,而且简便、快速，不需荧光标记和专用的荧光扫描仪。

HCV是一种全球性传染的、给人类健康带来极大威胁的病原体，是引起人类慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一[4]。HCV基因分型对于流行病学调查和临床诊断、治疗方案的选择和预后的判断以及丙型肝炎发病机制的研究都有重要意义。国内外研究表明，HCV不同的基因型对肝脏损伤的程度不同，1b型对肝脏的损伤要比其他型严重得多[5]。HCV对干扰素的应答率也不同，Kandi等[6]报道HCV1b型感染多为慢性活动性肝炎，易进展至肝硬化甚至肝癌，对干扰素治疗应答率低疗程要足够长，2a型等比1b型对干扰素敏感。综上所述，HCV基因型与肝病的严重程度有着密切关系，并且影响着干扰素的抗病毒治疗的疗效，HCV基因分型检测可为临床诊断和治疗提供重要的依据，因此，对慢性丙型肝炎患者在抗病毒治疗前有必要先进行基因分型的检测，以指导临床医师制定用药疗程方案及预测疗效。

[1]丙型肝炎防治指南.中华医学会肝病分会、中华医学会传染病与寄生虫病学分会,2004:3.

[2]唐小平,吴婉芬,袁小珍.丙型肝炎病毒基因分型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系 [J].中华微生物学和免疫学杂志, 1999,22:8-11.

[3]苏英豪.丙型肝炎病毒基因分型及其意义[J].国外医学微生物学分册,1999,17:92-95.

[4]庄 辉.重视丙型肝炎的研究[J].中华肝脏病杂志,2004,12(2):65.

[5]蒋伟伦,顾士民,胡芸文,等.上海地区丙型肝炎病毒基因分型的研究[J].中华肝脏病杂志,1999,7:115.

[6]Kandi K,Kako M,Okamoto H.HCV genotypes in chronic hepatitis C and response[J].Lancet,1992,339:1543.

R373.2,R512.6+3,Q754

B

1674-1129(2010)05-0514-01

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.05.042