微柱凝胶法在交叉配血试验中弱阳性结果的分析

张宝艳

准确的交叉配血是临床安全输血的重要保证。以往的盐水配血法只能检测出血清中的完全抗体,微柱凝胶技术可检测出血清中的不完全抗体,有标本用量少、灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可长期保存等优点[1]。由于灵敏度高,因此在配血过程中常出现弱阳性结果,若不能快速作出准确的判断,则会影响临床输血的及时性和安全性。我们将 2008年采用微柱凝胶技术配血过程中遇到的弱阳性结果的判定报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2008年 1月至 12月在本院需要输血的住院或门诊患者 6668例次,均为恶性肿瘤患者。

1.2 材料 血型不完全抗体检测卡由长春博讯生物技术有限责任公司提供,孵育器、专用离心机由长春博研科学仪器有限责任公司提供,0.9%氯化钠溶液由中国大塚制药有限公司提供,低离子溶液由珠海贝索生物技术有限公司提供。

1.3 标本处理 血液标本常规 EDTA抗凝血(抗凝剂与血液比例为 1∶9),血液加入试管后注意及时混匀。离心后与血细胞分离清楚,血浆高度≥1.5cm,不能溶血。

1.4 方法与原理 制备受、供者血浆和 0.5%～0.8%红细胞悬液,标记配血卡。主侧加入供血者红细胞悬液和受血者血浆各 50μl,次侧加入受血者红细胞悬液和供血者血浆各 50μl,然后在 37℃孵育器中孵育 15m in,再使用专用离心机离心5min,900 r/min,2min,1500 r/min,3min,取出肉眼观察结果。此方法是通过调节凝胶的浓度来控制凝胶间隙的大小,使其间隙只能允许游离的红细胞通过,从而使游离的红细胞和聚集的红细胞分离。当抗原、抗体反应,抗人球蛋白试验时,血细胞发生凝集、离心时,凝集块不能通过凝胶间隙,而留在凝胶孔的上层,呈阳性反应,根据微柱上面的凝块或颗粒的多少、散布的程度来判断阳性的强弱,未凝集的血细胞离心时可通过凝胶间隙,而沉积在凝胶孔的底部,则呈阴性反应。

2 结果

在 6668例次微柱凝胶法配血结果中,纤维蛋白含量过高影响判定结果的 58例;冷凝集素影响交叉配血的 5例,这 5例中主、次侧微柱均出现不同程度的弱凝集把这些卡放在 37℃孵育器孵育 15min后离心,凝集有不同程度的减弱。对这些病例测定冷凝集素效价均在 1∶512以上,从而证实这 5例交叉配血困难均由于冷凝集素的影响;自身凝集造成微柱次侧弱凝集 54例,这些病例主侧大多为阴性,而次侧均呈现不同程度的弱凝集,凝集颗粒散布在微柱的中下部,而不是在微柱的顶端呈一线状沉淀,不规则抗体筛查试验均为阴性,自身对照均出现弱阳性,冷凝集素效价均在 1∶128以下;药物影响判定结果的 4例,均为次侧出现弱阳性;陈旧血标本影响判定结果 10例,均为次侧出现弱阳性。

3 讨论

纤维蛋白含量过高影响配血结果,是由于患者血液标本抗凝效果不佳,内含不易察觉的纤维蛋白出现细胞凝块,这种假凝集程度一般较弱,黏附一定量红细胞的纤维蛋白大多聚集在微柱的最上层,但颜色较淡,而大部分红细胞则沉积到微柱的底端,这种情况一般不难判断[2]。因此为了防止血液凝固给试验带来不良影响,患者血液抽出后应立即注入抗凝管,并充分摇匀。

冷凝集素综合征患者应尽量避免输血,可输可不输者尽量不输,必须输时,可输入同型的洗涤红细胞,并在室温放置复温后再输注,输时应缓慢,在输血过程中应密切注意观察[3]。

自身凝集的患者一般是由于多次输血的患者和肿瘤患者,54例均为肿瘤患者,其本身易产生高效价的冷凝集素,且红细胞上 T、Tn类抗原易暴露,纤维蛋白易升高;反复多次输血的患者由于输注大量异体血液制品而产生红细胞及白细胞抗体。这些抗体易吸附在患者的红细胞上,故主要出现微柱次侧的凝集。这类患者应尽量减少输血,必须输血时,可输少量浓缩红细胞或洗涤红细胞。洗涤患者红细胞后重新配血均呈阴性结果。

10例由陈旧血样造成配血弱阳性的患者均重取血样,重新配血后均呈阴性。一般陈旧血标本放入 4～10℃冰箱保存后,在体外致敏造成假阳性结果。笔者在工作中还发现快过期的配血卡也容易造成弱阳性结果,应注意辨别,亦应合理调配配血卡,以免造成配血困难。

1 舒象武.应用微柱凝胶抗球蛋白技术进行交叉配血.中国现代医学杂志,2003,13:116-118.

2 陈静,马涛.微柱疑胶技术筛选及鉴定不规则抗体的临床应用.河北医药,2008,30:1233-1234.

3 王静,沈立松,沈霞.冷凝集素综合症引起交叉配血困难 1例报告.临床输血与检验,2001,3:57.