β-人绒毛膜促性腺激素在牙龈癌中的表达

陈勇 李浩渤 闫威 马超

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin，hCG)是由胎盘所分泌的糖蛋白激素。与靶细胞膜上的受体结合，主要通过腺苷酸环化酶系统刺激甾体类激素的生成，从而对性细胞成熟、受精卵着床及妊娠的维持等生理过程起重要的调节作用。近年来有研究表明，人绒毛膜促性腺激素α、β两亚基在非生殖系统恶性肿瘤中存在表达，且hCG亚基可能与多种肿瘤的发生、发展有关。α亚单位为hCG非特异的组分，难以作为肿瘤的标记物，其主要与激素的信号转导有关。β亚基主要和激素与受体的结合有关，且与恶性肿瘤自我生长的调控功能、肿瘤的转移特性和分化程度、以及与肿瘤微环境和免疫耐受的形成等都具有密切关系[1]。为探讨牙龈癌中β-HCG亚基的表达，我们采用免疫组化方法检测 β-HCG亚基在牙龈癌变中的表达情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 试验组:收集河北医科大学第二医院及沧州中心医院 2000至 2005年牙龈癌蜡块标本 46例(所有患者在取标本前未经任何治疗)，其中高分化 15例，中分化 14例，低分化 17例。每例标本均进行HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊。其中男 25例，女 21例;年龄 40～75岁，平均年龄62.5岁。对照组:正常牙龈组织 22例，其中男 14例，女 8例;年龄 23～56岁，平均年龄 42.72岁。每例均进行 HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊。

1.2 主要试剂与仪器 试剂:兔抗人 β-HCG浓缩液，使用浓度 1∶75，β-HCG及二抗 SP免疫组化试剂盒，DAB显色剂，多聚赖氨酸(Poly-L-lysine)防脱片剂购于河北博海生物工程有限公司。仪器:LEICA石蜡切片机，ZHPY-型恒温式附贴切片展片仪(河北医科大学)，PGB/20-002台式保温培育箱，(中华人民共和国重庆实验设备厂)，ZD-Ⅲb快速生物试验用微波炉(上海中达医学医用研究所)，Olympus PM-10ADS型双目显微镜。

1.3 对照实验 用已知 β-HCG阳性的绒癌切片作为阳性对照;以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 实验方法 采用免疫组织化学SP法(过氧化物酶标记的链酶卵白素法)。所有标本均经 10%甲醛固定，石蜡重新包埋后，将每个蜡块切为 4～5μm的切片，共切 3张，1张 HE染色，1张作为阴性对照，1张行β-HCG染色。

1.5 实验结果判定 β-HCG阳性结果判定:以细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，以组织中无明显阳性反应细胞为阴性。结果评定参照 Lorenzolomuzio标准，每个视野计数 100个细胞，观察阳性细胞数。计数 10个高倍视野中阳性细胞的百分比，依此将阳性表达又分为:弱阳性(+)，阳性细胞数 ＜10%;阳性(++)，阳性细胞数为 10% ～50%;强阳性(+++)，阳性细胞数 ＞50%。

1.6 统计学分析 应用SPSS 11.5统计软件，计数资料采用χ2检验，出现小值频数时，采用 Fisher精确概率法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 在正常牙龈组织中，β-HCG未见表达(图 1、2)。在牙龈癌组织中，β-HCG的阳性染色主要位于细胞的胞浆内，呈棕黄色颗粒染色(图 3、4)。β-HCG在牙龈癌组织中的阳性表达率为 67.39%，在对照组的阳性表达率为 0，与对照组相比，试验组的阳性表达率明显增高，二者的阳性表达率之间差异有统计学意义(P＜ 0.05)。见表 1。

2.2 β-HCG的阳性表达与牙龈癌的分化程度相关，分化程度越低，β-HCG的表达越明显(P＜ 0.05)。与患者的性别、年龄无明显的相关性(P＞0.05)。见表 2、3。

图 1，2 β-HCG在正常黏膜中的阴性表达

图 3，4 β-HCG在牙龈癌中的阴性表达

表 1 β-HCG在正常黏膜和牙龈癌组织中的阴性表达 例

表 2 β-HCG的阳性表达与牙龈癌分化程度的关系 例

表 3 β-HCG的阳性表达与患者性别、年龄的关系 例

3 讨论

β-HCG是一种糖蛋白激素。在妊娠期主要由胎盘合体滋养层细胞分泌产生，在非妊娠情况下，机体内含量极微。活性β-HCG在维持早孕女性的黄体功能以促使妊娠继续进行、胎儿性别的分化以及防止母体排斥妊娠产物等方面具有重要的生理功能。自报道滋养层癌细胞和非滋养层恶性肿瘤细胞可异位表达 β-HCG以来，恶性肿瘤细胞表达的异位 β-HCG一直受到人们的关注。目前发现，β-HCG在非生殖系统恶性肿瘤中存在表达，且对免疫系统及肿瘤的发生、发展、浸润转移、分化程度等都有重要作用[2]。恶性肿瘤表达的异位 β-HCG和正常 β-HCG具有相似或相同的分子特征。正常β-HCG由α和β两个不同的亚单位以非共价键连结成二聚体。研究表明，β亚基主要和激素与受体的结合有关，且与恶性肿瘤自我生长的调控功能、肿瘤的转移特性和分化程度、以及与肿瘤微环境和免疫耐受的形成等都具有密切关系。现已公认 β-HCG是一种肿瘤标志物(tumormarker)。这些肿瘤主要有子宫内膜癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤等[3]。本研究即通过检测 β-HCG在牙龈癌中的表达，探讨了 β-HCG与牙龈癌发生发展的相关性，本研究结果显示在牙龈癌组织中，β-HCG的阳性染色主要位于细胞的胞浆内，呈棕黄色颗粒染色。β-HCG的表达率为 67.39%。在正常牙龈组织中，β-HCG未见表达，与对照组相比，试验组的阳性率明显增高，二者的阳性表达率之间有显著性差异(P＜ 0.05)。该结果显示牙龈癌细胞表达 β-HCG，可作为牙龈癌的标志物，但其机制需要进一步研究。

大量研究证实 β-HCG在滋养细胞来源的恶性肿瘤侵润、转移中的作用与其在非滋养细胞来源的恶性肿瘤侵润、转移中的作用并不一致[1]。β-HCG对某些非滋养层细胞源性的恶性肿瘤的浸润转移具有促进作用，而对滋养细胞来源的肿瘤的浸润转移则有抑制作用，其原因及作用机制尚不完全明确。在非滋养细胞来源的肿瘤中，近几年国内外学者已相继发现β-HCG在膀胱、肺、胃、结肠、食管等肿瘤中表达，并与肿瘤的浸润转移有关[3]。遗憾的是，本实验没有研究 β-HCG与牙龈癌淋巴结转移的关系，今后需进一步探讨。

有学者证实非滋养细胞肿瘤产生异位hHCG对肿瘤患者的治疗和预后的判断可能有益，提出非滋养细胞肿瘤细胞分泌异位 HCG是肿瘤细胞幼稚的表现，并发现分泌异位 HCG的大肠癌和乳腺癌的侵袭力强，恶性程度较高，且化疗不甚敏感或缓解期短，肿瘤容易复发，因而预后较差[4]。本研究中显示 β-HCG的表达与患者的性别、年龄以无明显的相关性(P＞0.05)，而与牙龈癌的分化程度相关，分化程度越低恶性度越高，β-HCG的表达越明显。因此，预测 β-HCG可能是判断牙龈癌预后的一个指标。

总之，正常细胞的增殖分化在体内生长因子、激素及环境等多种信号的调控影响下是一个严格控制和高度稳定的复杂过程。牙龈癌中由正常上皮转化为肿瘤细胞并生长浸润的复杂过程，显然不能用单一因素完全解释。HCG及其亚基作为多种非生殖系统肿瘤的生物学标记物，β-HCG与恶性肿瘤生长的自我调控能力、肿瘤的形成发展以及浸润转移和免疫耐受的形成都有一定的关系。本研究中，我们从恶性肿瘤异位产生 β-HCG的角度探讨了牙龈癌的发生发展机制，这有助于我们进一步了解 β-HCG的生理功能及其与在人类肿瘤发生中的机制，为我们设计新的药物和有效的治疗方法提供了新思路。但 β-HCG对牙龈癌发生的作用大小，所处的地位及与其它致癌因素的复杂关系等尚不完全清楚，还有待于进一步研究。

1 何柯，徐建设，宋丽萍.恶性肿瘤异位人绒毛膜促性腺激素表达的研究.国外医学妇幼保健分册，2005，16:420-422.

2 人绒毛膜促性腺激素在非生殖系统肿瘤中的表达及其临床病理意义.诊断病理学杂志，1998，5:231-232.

3 Acevedo HF，Krichevsky A，Campbell-Acevedo EA，et al.Flow cytometrymethod for the analysis ofmembrane-associated human chorionic gonadotropin，its subunits，and fragments on human cancer cells.Cancer，1992，69:1818.

4 汪万英，张世馥，姚敏，等.胃肠道癌产生异位 HCG的研究.蚌埠医学院报，1994，19:166-167.