水产品微生物实验室质量控制探讨

黄玉柳,陈 静,黎小正

(广西水产研究所,广西南宁 530021)

目前,无论是发达国家,还是发展中国家,食品卫生问题都面临着严峻的挑战。水产品作为食品的一部分,也面临着巨大的挑战。水产品微生物检验是水产品安全监测的重要组成部分,它存在一些比较特别的问题,诸如分析标准、已知加入量、参比样品等,通常都不具备或不知道,因此个人判断常常显得更为必要。一个有效的质量保证程序必须能控制从采样到报告数据过程中所有足以影响检验结果的因素,这些因素包括工作人员、实验设备与器材、采样技术、材料供应的品质、培养基、分析测试步骤等等。本文对这些因素进行探讨,并在本中心微生物实验室实施,确保检测结果和数据的客观性和公正性,为水产生产部门、管理部门提供科学、准确的数据。

1 检验人员的质量控制

检验人员应执行上岗前培训制度,上岗前培训合格方能上岗操作,还要主动参加学习、培训、讲座,学习新技术,掌握国家食品卫生微生物学检验方法、标准及相关法律法规;参与编写测试程序及仪器操作程序。学习质量保证体系知识和计量学基本知识,参加各类水平测试和盲样测试,提高检测水平和分析问题、解决问题的能力;食品微生物学实验室主管人员应定期对检验人员进行专业知识和操作熟练程度的考核,提高检验人员的素质。

2 常用仪器设备的质量控制

大型水产品微生物实验室的主要仪器及设备包括：无菌室、微生物自动鉴定仪、显微镜、菌落计数器、高压灭菌器、干热灭菌器、离心机、培养箱、厌氧箱、水浴箱、冰箱、超净工作台、酶标仪、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等等。要求所有的仪器和设备均应按照生产厂家提供的方法和有关规定正确使用。需要强制性定期检测的仪器和设备,经符合资历的计量部门校准合格后方可使用。

3 检验所用培养基、生化试剂、诊断血清的质量控制

检验所用培养基、生化试剂、诊断血清必须由专业厂家生产,产品质量必须符合有关的质量标准。试剂购置培养基和试剂使用前首先通过外观、批号、pH值、灭菌要求、选择性等进行初步评估,还要用阳性对照菌株做质控,按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件进行保存,不同批号的培养基和试剂不要混合使用。做好培养基制备记录,注明培养基原料收到日期、开封日期、贮存条件及有效期。在配制每批培养基时应有配制记录,包括培养基的名称、配制量、配方、配制日期、有效期、灭菌、分装、贴标签等。

无菌试验凡以无菌手续分装的培养基均应置35℃培养24 h,无菌生长方可使用。经过压力蒸汽灭菌后的培养基可随机抽样检查,经35℃培养24 h后,无菌生长可作为合格。试剂监控染色液及抗血清应定期用标准菌株进行监控,注意有效期和效价。

4 样品采集、接收和预处理的质量控制

整批水产品的微生物学卫生状况是通过对检样的微生物学检验来评价的,因此,采样十分重要,稍有不慎必将引起严重后果。一般样品应就地采集并及时送检,若现场离实验室远,则所采集的样品必须妥善保存,往往采用适当的保存液和保存条件(如保温、冷藏、厌氧或接种人培养基),以避免标品腐败变质;标品运送应有专人负责。

当接收样品为自送样时,样品送达实验室时,应检查样品标记是否与样品相符,样品包装状况是否正常。水产品微生物学实验室在收到样品后,必须及时准备条件、组织力量进行检验。送检的样品,一般需保持在0～4℃的环境中,对于冷冻食品应保持在冷冻状态直到检验为止。冻藏的样品应尽快放在冷藏的温度下解冻(亦可放在适宜温度,如37℃下15 min使其解冻),但温度必须较低,以防止病原菌死亡。冻结样品化冻时,必须放置于细菌生长温度之下以免使细菌繁殖。

5 检验过程的质量控制

样品处理与检验样品的保存要严格遵守有关规定,防止污染,避免造成结果不准确。不同的样品要采用不同的处理方法。检验方法优先采用国家规定的标准检验方法或国际标准。

微生物检验中首先要严格按照无菌操作,操作必须规范,日期、编号标记清楚,不能混淆。检验人员必须做到加液准确,结果观察及时,菌落计数准确。在活菌计数技术测定中,注意选择适宜稀释度,振摇要用力均匀;倾注琼脂平板要厚薄均匀一致,温度不可太高;控制好培养温度和时间;每次实验要进行误差率计算,把误差控制到最底限度。在检验过程中还要注意3点：①做平行样,以保证结果的可靠性;②设立空白对照,以防止其他污染而导致的结果不准确;③设计合适的质控频率,进行质控试验。

6 参考菌株的质量控制

参考菌株可以从国际菌种保存中心如ATCC或室间质控活动中获得,准确鉴定过的分离株也可使用。实验室要准备好足够种类和数量的参考菌株,满足培养基、试剂盒和试剂质量测试的需要。保存菌株要定期传代,注意无菌操作,使菌株不受污染、不死亡、不丢失。菌株应设专人妥善保管,菌株保存箱应加锁并放置适宜环境,取出使用应有登记记录。保存菌株应建册登记,基本项目应包括菌种名称、菌株来源、分离日期、传代日期、保存方法、主要性状、保管者、领用者等。对保存菌种,经传代数次后应进行一次系统生化反应、血清学特性等生物学性状观察,检查菌株是否发生变异。

7 检验报告及结果的质量控制

对原始数据进行整理用回归分析法和方差分析法进行处理,去除不必要的误差,获得准确的数据,编制微生物检验报告要考虑引入不确定度概念。微生物学检验报告必须经过规定的手续进行复查,并对照各类标准对水产品的微生物学质量进行全面准确的评价和作出合理的解释。有关人员签字后,加盖检验单位印章,以示生效。这样才使检验结果既有法律依据又有学术依据。

8 结 语

总之,水产品微生物实验室质量控制包括以上因素,实验室应制定一套科学、完整、高标准的管理制度并严格执行,要求科室成员熟悉自己的职责和任务,并做好各种仪器、药品的管理与使用以及各种试剂、培养基的配制与使用,掌握各项目检验步骤、操作方法及原始记录的填写、检验报告的发放和质量控制的措施等。

[1] 雷质文.食品微生物实验室质量管理手册[M].北京：中国标准出版社,2006.

[2] 李谨,刘振,何艳玲.微生物干粉培养基质控图解手册[M].北京：科学技术出版社,2007.

[3] 中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会.食品卫生微生物检验[S].北京：中国标准出版社,2004-01-01.