热休克蛋白60在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系*

李桂青，李森林，赵景润

(1． 泰山医学院，山东 泰安 271000； 2．泰山医学院附属聊城医院消化内科，山东 聊城 252300)

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发生是一个多因素、多步骤、多阶段和多基因共同作用的结果,涉及到多种基因的异常改变。热休克蛋白(heat shock protein, HSP)是细胞受到各种刺激后产生的一类高度保守的蛋白质，主要是通过在应激状态下生成保护细胞生命活动所必需的蛋白质以维持细胞生存, 参与调节细胞的增殖、分化和细胞凋亡信号转导等重要的生物学功能[1]。近年来研究发现, 在许多肿瘤细胞中存在HSP高表达现象。有关HSP在胃癌中的表达文献中报道较少，本研究采用免疫组化方法检测HSP60在胃癌中的表达，分析其与胃癌生物学行为的关系，以探讨HSP60在临床治疗和判断预后中的应用前景。

1 资料和方法

1.1标本来源 组织标本均来自聊城市人民医院2008年1月1日至2009年2月1日手术切除的病理科胃癌存档蜡块48例，其中男性37例，女性11例，年龄范围30～75岁，中位59岁。术前未经任何抗肿瘤治疗。均经病理检查确诊。根据国际抗癌联盟 (UICC)的PTNM分期标准进行临床分期。正常胃黏膜组织14例作为对照组，取自胃癌手术切除标本的边缘正常组织。

1.2主要试剂 鼠抗人HSP60， Ki-67; SABC免疫组化试剂盒和DAB 显色剂均购自武汉博士德生物技术公司。

1.3免疫组织化学检测 常规石蜡包埋,连续切片，切片厚度 4 μm。免疫组化染色程序严格按照试剂盒规程操作。阴性对照以PBS 代替一抗; 阳性对照为公司提供已知阳性切片。HSP60阳性结果判断，细胞浆出现棕黄色为阳性细胞，计数20个高倍视野的阳性细胞，根据阳性细胞百分率分为阴性(-): 阳性细胞<5%; 弱阳性(+): 阳性细胞数6%～30%;中等强度阳性(++):阳性细胞数31%～60%;强阳性(+++):阳性细胞数>60%。以中等强度阳性和强阳性为过表达病例。增殖指数(porlierrationindex，Pl) 以Ki-67标记的肿瘤细胞胞核呈棕黄色为阳性。高倍镜下(×400)每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，共1000个。计算阳性肿瘤细胞所占的百分比即为增殖指数。以均数为界值分为低表达及高表达组。

1.4统计学处理 应用SPSS17.0统计软件进行卡方检验。P<0.05有统计学意义。

2 结 果

HSP60在胃癌中表达明显高于正常胃粘膜组织，阳性表达率为81.3%，HSP60表达与肿瘤分化程度和增殖指数有关，肿瘤分化程度越差，表达越高；与增殖指数呈正相关。

表1 HSP60在胃癌组织中表达情况

3 讨 论

热休克蛋白已被报道在多种肿瘤中过表达，与肿瘤细胞生长和分化、抵抗肿瘤细胞凋亡和不良预后有关。HSP60在胃癌中的表达文献中报道较少，有报道热休克蛋白在胃癌中高表达，促进肿瘤发展[2]。本研究进一步证实热休克蛋白在进展期胃癌中表达的临床意义，研究发现HSP60在胃癌中表达明显高于正常胃黏膜组织，提示HSP60可能参与胃癌的发生和发展，与文献报道一致[3，4]。有关HSP60在胃癌中过表达，可能由于肿瘤进展中的应激反应和细胞的自我保护，但具体机制目前仍不清楚[5]。

HSP60表达与胃癌分化程度有关，分化差者高于高分化者，具体机制不清楚，临床意义有待进一步研究。另外，Cappello等研究发现HSP60在进展期大肠癌中表达与淋巴结转移有关[6]。GiaginisC等研究发现HSP60在胃癌中表达与病人性别有关。

Ki-67增殖指数(PI)是一种反映癌细胞增殖状态的良好指标, 与恶性肿瘤的发生、发展 、转移和预后密切相关[7]。HSP60与Ki-67增殖指数呈正相关，提示HSP60促进肿瘤细胞增殖，可能在促进肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用。

HSP60作为分子伴侣能促进细胞生存，尤其在肿瘤细胞中，但这种机制仍不清楚。可能与半胱天冬酶依赖的凋亡途径有关[8]。HSP60抑制剂通过对肿瘤细胞的促凋亡作用，可能会成为一种新的抗癌剂。

[1]DidelotC,LanneauD,BrunetM,etal.Interactionofheat-shockprotein90betaisoform(HSP90beta)withcellularinhibitorofapoptosis1 (c-IAP1)isrequiredforcelldifferentiation[J].CellDeathDiffer, 2008, 15 (5) : 859-866.

[2]CioccaDR,CalderwoodSK.Heatshockproteinsincancers:diagnostic,prognostic,predictive,andtreatmentimplications[J].CellStressChaperones， 2005，10:86-103.

[3]GiaginisC,DaskalopulouSS,VgenopoulouS,etal.HeatShockProtein-27,-60and-90expressinoningastriccancer:associationwithclinicopathologicalvariablesandpatientsurvival[J].BMCGastroenterol，2009, 9(9):14.

[4]KapranosN,KomineaA,KonstantinopoulosPA,etal.Expressionofthe27-kDaheatshockprotein(HSP27)ingastriccarcinomasandadjacentnormal,metaplastic,anddysplasticgastricmucosa,anditsprognosticsignificance[J].JCancerResClinOncol，2002，128:426-432.

[5]HwangYJ,LeeSP,KimSY,etal.ExpressionofHeatShockProtein60kDaIsUpregulatedinCericalCancer[J].YonseiMedJ， 2009June30， 50(3): 399-406.

[6]CappelloF,DavidS,RappaF,etal.TheexpressionofHSP60andHSP10inlargebowelcarcinomaswithlymphnodemetastase[J].BMCCancer， 2005，5:139.

[7]GentileV,ViciniP,GiacomelliL,etal.DetectionofhumanpapillomavirusDNA，p53andki67expressioninpenilecarcinomas[J].IntJImmunopatholPharmacol, 2006, 19(1)：209-215.

[8]GhoshJC,DohiT,KangBH,etal.Hsp60RegulationofTumorCellApoptosis[J].JBioChem,2008,283(8):5188-5194.