2株鸭源肠球菌对小白鼠的致病性

韩梅红 (长江大学动物科学学院，湖北 荆州 434025)

谷长勤 (华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070)

2株鸭源肠球菌对小白鼠的致病性

韩梅红 (长江大学动物科学学院，湖北 荆州 434025)

谷长勤 (华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070)

以临床分离得到的2株鸭(Anasdomestica)源肠球菌(Enterococcas)分别接种小白鼠，观察感染后小白鼠的主要临床症状和病变特点，测定感染小白鼠的发病率、死亡率及半数致死量，并制作切片，光镜下观察各组织病变，以探讨这2个菌株对小白鼠的致病性。结果表明，2株肠球菌均能造成小白鼠发病，其中北京株致病性较强。该病原主要侵害小白鼠肝脏、脾脏和肾脏，最明显的病变特征为脾肿大、淤血，镜下见脾脏淋巴细胞明显减少、脾巨细胞增多、脾小体萎缩等；肝脏淤血、出血，甚至坏死，镜下见肝窦状隙扩张，聚集有细菌团块或淋巴细胞，窦上皮细胞肿胀；肾间质血管淤血，肾小管上皮细胞变性、坏死以及肾小管的蛋白管型等。揭示肠球菌可引起小鼠感染发病并导致组织病变而死亡。

肠球菌(Enterococcas)；鸭(Anasdomestica)；小白鼠；致病性

家禽的急性肠球菌(原属于链球菌属D群)感染最初见于1902年Moore等报道的鸡类中风样败血症，1932年Vaillancourt等首次报道火鸡的链球菌病，1927年Katanbaf 等首次报告与链球菌有关的细菌性或赘生性心内膜炎[1]。

禽类链球菌感染虽不常见，但却呈世界范围分布[2,3]。该病引起的急、慢性感染造成的损失可达50%。该病急性感染时，主要造成全身败血性变化，并以发病快、死亡率高为特点[2,3]。目前国内外尚未见肠球菌感染小白鼠的病理学研究的详细报道。本研究初步探讨了肠球菌(Enterococcas)对小白鼠的致病性和病变特点，以期为全面认识鸭(Anasdomestica)源链球菌的致病机理提供可借鉴的资料。

1 材料与方法

1.1 材料

供试菌株为鸭源肠球菌临床分离株郑3株和北京株，由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所提供，分离于自然感染发病濒死期和已死亡鸭的肝脏、心腔血和脑组织液。供试小白鼠为体重16～18 g的清洁级昆明系小白鼠(雌雄各半)共110只，购自湖北省预防医学科学院实验动物中心，常规饲养。

1.2 试验方法

(1)菌液的制备 利用平板菌落计数法将供试菌株进行活菌计数，并分别稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5cfu/mL 5个稀释度的菌悬液。

(2)感染小白鼠发病、死亡规律及LD50测定 先通过预试测出最小致死剂量和最大存活剂量，在此基础上进行正式试验。将110只小白鼠随机等分成11个组，第1～5组小白鼠分别经腹腔注射郑3株10-1、10-2、10-3、10-4、10-5cfu/mL 5个稀释度的菌悬液0.2 mL/只，第6～10组小白鼠分别经腹腔注射北京株10-1、10-2、10-3、10-4、10-5cfu/mL 5个稀释度的菌悬液0.2 mL/只，第11组小白鼠腹腔注射无菌PBS 0.2 mL/只作对照。

接种后观察其发病、死亡情况，包括小白鼠精神、食欲、被毛光泽度、体格状况、警觉性以及躲避捕捉的能力等，每天观察3～4次，连续观察14 d，做好记录。

采用简化寇氏法按下式分别计算各菌株对小白鼠的半数致死量。

lgLD50=Xm-d(∑P-0.5)

式中，Xm为最大剂量的对数；d为组距；∑P为各组死亡率之和。

(3)细菌学检查及病理学观察 对死亡小白鼠及时尸检，无菌条件下取肝脏、心血等病料进行细菌学检查；观察心、肝、脾、肺、肾、十二直肠、胰脏、脑等组织器官的大体病变，并取病变组织于10%中性福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋，制作切片，H·E染色，光镜下观察各组织病变。未死亡的小白鼠于接种后14 d用断椎法处死，同上进行细菌学检查及病理学观察。

2 结果与分析

2.1 感染小白鼠发病、死亡情况及半数致死量

在接种不同菌株不同剂量的菌液后，接种郑3株的试验小白鼠最早于感染后24 h开始出现临床症状，之后高剂量组小白鼠开始出现死亡，4 d后半数以上小白鼠表现临床症状，死亡高峰集中在5～7 d，9 d后停止死亡。各剂量组小白鼠共死亡24只，总死亡率为48%，LD50为1015.71。

接种北京株的试验小白鼠最早于感染后24 h即表现临床症状，并且10-1cfu/mL剂量组小白鼠最先开始死亡，3 d内半数以上小白鼠表现临床症状，死亡高峰集中于4～6 d，8 d后停止死亡，各剂量组小白鼠共死亡26只，总死亡率为52%，LD50为1013.61。

表1 小白鼠死亡情况及半数致死量(n=10)Table 1 Deaths and LD50 of laboratory mice(n=10)

对照组小白鼠接种后仅出现一过性精神沉郁症状，随后即恢复试验前状态，接种后14 d内无死亡情况，死亡率为0。各组小白鼠死亡情况及半数致死量测定结果详见表1。

以上结果显示，小白鼠在接种不同剂量2菌株后24～48 h陆续发病死亡，死亡高峰集中在4～7 d。但北京株对小白鼠的LD50较郑3株低。

2.2 感染小白鼠临床症状与病理学变化

接种不同剂量2菌株后各组小白鼠均明显可见精神萎靡不振，闭目缩颈、背毛逆立、腹部抖动。随着病程的延长可见病鼠消瘦，死亡与存活小白鼠肝脏中都可分离到较纯的原接种菌。对照组小白鼠未见异常，剖检无明显病变，从心血、肝脏中亦未分离到细菌。

各组小白鼠腹腔注射不同株的菌液后均导致心、肝、脾、肺、肾、肠等器官不同程度的损伤。眼观主要表现为心、肝、脾肿大，尤以脾肿大最为严重；肝、脾等脏器表面附着有大量纤维素性渗出物，心、肝、脾、肺、胃、十二指肠、脑等组织器官均见有不同程度的淤血、出血和坏死。另外，多数感染小白鼠肝脏呈灰白色或暗红色坏死灶，少数见胸腔积液。

其组织病理学变化表现为：

接种郑3株的小白鼠表现为局部出血、淤血，聚集有细菌团块；接种北京株的小白鼠表现为淤血，肝窦内皮细胞肿胀，散在分布有多核巨细胞，中央静脉扩张，聚集成团分布的淋巴细胞，有的肝细胞坏死，细胞核浓缩。

从脾脏来看，接种郑3株的小白鼠表现为组织结构疏松，脾小体体积缩小、数量变少，淋巴细胞减少，脾巨细胞大量增多；接种北京株的小白鼠表现为脾窦和脾静脉淤血，白髓体积增大，淋巴细胞减少，脾巨细胞增多。

从肺脏来看，接种2菌株的小白鼠均见肺泡腔内有少量水肿液，接种北京株的小白鼠肺泡壁毛细血管充血，肺泡腔内有红细胞聚集。

从肾脏来看，接种2菌株的小白鼠均见肾间质轻微淤血，肾小管上皮细胞变性坏死、细胞核固缩，接种北京株的多数小白鼠肾小管腔或小动脉血管内有粉染物质。

从胃和十二指肠来看，接种2菌株后有的小白鼠胃和十二指肠轻微出血、炎性细胞浸润；

从心脏来看，接种2菌株后的小白鼠病变都不十分显著，仅见接种北京株的小白鼠心肌轻微出血，少数见心肌细胞坏死。

从脑来看，接种2菌株后的小白鼠均见脑膜轻微充血、出血。

以上结果显示，接种2菌株后各组小白鼠组织病理学变化主要集中在肝脏和脾脏，表现为肝脏淤血、出血，淋巴细胞聚集；脾脏淤血，脾小体萎缩，白髓内淋巴细胞减少等。比较发现，接种北京株的小白鼠病变较接种郑3株的严重。

3 讨论

肠球菌病是一种主要侵害机体实质器官的急性败血性疾病[4]。本研究结果揭示，该病的发病机理可能是病原菌侵入机体后，在感染局部引起炎症反应，表现为炎性肿胀和纤维素性炎性渗出；此时机体可能调动起全身的免疫器官，用以抵制病原菌的侵害作用，病理表现为脾脏的多核巨细胞和网状细胞大量增生；在机体损伤与抗损伤的斗争过程中，免疫器官可能也遭到损伤，病理表现为脾脏淋巴细胞的减少；此时病原菌乘虚而入，从感染灶不断侵入血液，经血液扩散全身，从而引起全身性败血症变化，最后机体常因多器官功能衰竭而死亡。

本研究中不同菌株对雏鸭的发病率、死亡率和各组织样品的细菌分离率是判断致病力强弱的重要指标。Vanrobaeys等[5]认为，链球菌发病率低于15%者视为低致病力菌株，高于65%者视为高致病力菌株，15%～65%者视为中等致病力菌株。本研究中，2株肠球菌对小白鼠均有致病性，且北京株毒力较强。

从感染小白鼠的病理变化来看，该病原主要侵害小白鼠肝脏、脾脏和肾脏，最明显的病变特征为脾肿大、淤血，镜下见脾脏淋巴细胞明显减少，脾巨细胞增多，局部有细菌堆积，脾小体萎缩等；肝脏淤血、出血、甚至坏死，镜下见肝窦状隙扩张，聚集有细菌团块或淋巴细胞，窦上皮细胞肿胀；肾间质血管淤血，肾小管上皮细胞变性、坏死以及肾小管的蛋白管型等。综合以上分析，2个菌株均能引起小鼠感染发病并导致组织病变而死亡。

[1]Saif Y M(苏敬良,高 福,索 勋，译).禽病学(第11版)[M].北京:中国农业出版社,2005.917～926.

[2]卡尔尼克B W (高 福，苏敬良，译)．禽病学[M]．北京：中国农业科技出版社，1999.377～383.

[3]杨劲松，包幼迪．肠球菌致病性初探[J]．中国人兽共患病杂志， 1997，13(6)：33～35.

[4]李光辉．肠球菌感染研究进展[J]．国外医学内科学分册，1999，26(11)：471～474.

[5]Vanrobaeys M,De Herdt P,Ducatelle R,etal. Extracellular proteins and virulence instreptococcusbovisisolates from pigeons[J].Vet Microbiol,1997,59: 59～66.

2008-06-30

韩梅红(1979-)，女，河南汝州人，农学硕士，助教，主要从事免疫病理学研究.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2009.01.010

S852.61+1

A

1673-1409(2009)01-S030-03