天麻共生菌简易培养技术

谢学强

摘要介绍了利用居室一角、蒸煮食品用压力锅等家用设施设备,进行天麻共生萌发菌和共生蜜环菌的简易培养技术,以期为天麻的栽培提供参考。

关键词天麻;萌发菌;蜜环菌;简易培养技术

中图分类号Q93-335文献标识码B文章编号 1007-5739(2009)21-0104-02

天麻(Gastrodia elata Bl.)人工栽培有无性繁殖和有性繁殖2种方法。无性繁殖栽培是播种米麻、白麻生产天麻的方法,有性繁殖栽培是播种天麻种子生产天麻的方法。前者需要蜜环菌(Armillariella mellea)作为共生菌为天麻提供营养,后者先要萌发菌后要蜜环菌作为共生菌为天麻提供营养。培养这2种共生菌,常需要一些能保证无杂菌感染的专用设施设备,如高压蒸汽灭菌锅、接种室、超净工作台或接种箱等。现将天麻共生菌简易培养技术总结如下。

1袋装或瓶装共生菌培养

1.1培养基配制

1.1.1萌发菌培养基配制。主要配方为阔叶树树叶78%、麦麸20%、石膏1%、白糖1%。树叶以壳斗科的为好,如板栗、麻栎、青冈等。首先将树叶用水预湿,再将石膏、白糖溶于水中,加入麦麸搅拌均匀后浇入预湿的树叶中,充分拌匀,并调节含水量至60%~65%(用手抓一把并用力握捏,指缝有水溢出但不滴水即可)。培养基配制好以后,分装到菌袋或罐头瓶中。菌袋用耐高温的聚丙烯或低压聚乙烯塑料袋。装料时,用大拇指稍加按压,使培养基松紧适度,并用木锥从袋口或瓶口向里打一孔,扎紧袋口或用耐高温薄膜封瓶口。培养基装填不宜过少和过多,袋装以封口后料袋长15cm为宜,瓶装以装至瓶颈为宜。

1.1.2蜜环菌培养基配制。枝段准备:选用阔叶树尚未萌发的树枝,尤其是壳斗科、桦木科植物的树枝,如麻栎、槲栎、青冈、桦木等,其他如野樱桃、樗树等,这些植物呈灌丛样生长的,可进行择伐,乔木类可进行修剪,利用择伐株或修剪枝做枝段,可做到资源的永续利用。将直径1~2cm的树枝,斜砍成3cm长的小段,放入0.25%硝酸铵溶液中浸泡20min后,捞出装入罐头瓶,装填紧实。培养基主要配方:1号为去皮去芽眼马铃薯200g、白糖20g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾1g、琼脂16g,加水定容至1 000mL,pH值自然;2号为玉米粉20g代替马铃薯,其他成分同1号。培养基配制方法:对1号而言,先将马铃薯切成1cm3的小块,锑锅中加水煮沸20min后,用双层纱布过滤,取其滤液,加入琼脂,加热使琼脂溶化后再加入其他成分,充分搅匀定容后备用。对2号而言,将琼脂加入1 000mL水中熬煮溶化后,加入其他成分,充分搅匀后备用。将配制好的培养基趁热分装到枝段瓶中,使液面高出枝段1cm左右,用耐高温薄膜封口。

1.2培养基简易灭菌

用家庭用24cm或26cm压力锅来灭菌,每次可对6~7袋(瓶)培养基进行灭菌。在锅内加入5~6cm深的水,将需要灭菌的袋(瓶)料放在锅内蒸屉上,加盖后加热至出蒸汽,5~6min后盖上压阀,直至阀门冒出蒸汽时开始计时,再维持阀门冒出少量蒸汽的状态达1.0~1.5h,之后将锅搬离火炉,自然冷却后打开锅盖,取出袋(瓶)装培养基。也可用土蒸锅来灭菌。由于锅内温度最高为100℃,所以需维持8h以上才能达到灭菌目的。

1.3接种培养

1.3.1简易接种室准备。选干净房间一隅,用粗铁丝或木条搭成框架,四周及顶部套上塑料薄膜,注意让膜边相接处和膜边与地面相接处尽量不漏气,构成一个“密闭室”。“密闭室”长、宽、高均为2m左右。将需要接种的培养基及其他用具和材料搬入“密闭室”后,用甲醛熏蒸消毒。甲醛用量为10mL/m3,这个“密闭室”共用80mL甲醛。将甲醛倒入耐高温的容器如搪瓷碗中,放在酒精灯上加热熏蒸即可。

1.3.2菌种准备与接种。共生菌菌种可在市场上购买,可以购买试管母种或袋(瓶)料原种。萌发菌主要有小菇属(Mycena)的石斛小菇(M.dendrobii)、兰小菇(M.orchicola)、开唇兰小菇(M.anoectochila)、紫箕小菇(M.osmundicola)等,以石斛小菇最好。蜜环菌有许多菌株,各地出售的几乎都有差异。如果能自己分离纯化或提纯复壮2种共生菌更好。消毒后次日,换上干净衣服,戴上口罩,进入“密闭室”接种。将试管母种或袋(瓶)料原种用接种铲等工具挑起,迅速放入灭菌袋料上刚打出的孔中或放入刚揭开封口膜的瓶中,立即用透明胶封住孔口或用原封口膜封住瓶口。试管母种,1管可转接3~5袋(瓶)料;袋(瓶)料原种,1袋(瓶)可转接50~60袋(瓶)料。接种铲等工具可用粗钢丝打制而成。接种前及每隔一段时间,用75%酒精将双手消毒,并将接种工具在酒精灯火焰上灼烧消毒。最好2个人1组互相配合进行接种,一人打孔或揭封口膜和封口,一人挑菌和接种。打孔先用75%酒精涂抹打孔处消毒。全部操作应尽量在酒精灯边进行。

1.3.3培养。接种完毕后,将袋(瓶)料放在洁净、干燥、光线暗淡、温度稳定在20~25℃的房间中培养。要保持温度,可用电炉或电热丝通电加温,也可在安装了烟囱、火道及火墙的房间外燃烧炭、秸秆等燃料来加温。萌发菌接种培养1~2个月后,菌丝即可长满整袋(瓶)的树叶,看上去好象是树叶长满了白色霉层一样,此即菌叶。天麻有性繁殖栽培时,即用菌叶来伴播天麻种子(将粉尘样的天麻种子均匀撒播在菌叶上),借以提高天麻种子的发芽率。天麻种子在4~8月播种,萌发菌需在2~6月接种培养。蜜环菌接种培养20~45d后,菌索即长满菌瓶,看上去像每条枝段上长出了许多棕色或浅棕色根系一样。瓶装菌枝可用于无性繁殖时伴播米麻、白麻,也可用于有性繁殖时与萌发菌一起伴播天麻种子,还可用于进一步培养菌棒。为了保证米麻、白麻、天麻种子的适期播种和满足生产上培养菌棒的需要,瓶装菌枝应在前一年12月至当年4月接种培养。

2蜜环菌土培菌枝的培养

2.1枝段和基础培养料制备

2.1.1枝段制备。与瓶装菌枝的基本相同,但直径可以大些,两端斜砍成10cm长,并斜砍3~4个鱼鳞口。

2.1.2基础培养料制备。一是山林中的天然腐殖土,拣去粗石块和活草根即可。二是半腐熟落叶加砂,晚秋收集阔叶树落叶,堆放在坑中,加水湿透,盖膜使之腐熟,翌年春天,用腐叶5份加高粱粒大小的砂子1份,拌合均匀即成。三是阔叶树粗锯末2份或3份加高粱粒大小的沙子1份,拌合均匀即成。调节各种基础培养料含水量至60%~65%后备用。

2.2培养方法

2.2.1地下坑培法。挖一土坑,长、宽各60cm,深30cm,挖松坑底,整平后铺1层阔叶树湿树叶(压实后厚1.5cm即可,下同)。树叶上摆1层枝段,各枝段相互平行靠紧。在枝段层上前后左右每隔10cm摆一枝瓶装菌枝。接着再摆1层枝段。最后,撒上1层基础培养料,不宜过厚,以填满枝段缝隙并盖住枝段为度。如此,便做完了第1层菌枝。照此法,在第1层菌枝上还可依次往上再做5~6层。最顶1层,盖基础培养料后再盖砂土5~6cm厚,并铺上1层树叶保温保湿。培养50d左右,蜜环菌长满枝段,即可用于伴播米麻、白麻、天麻种子或用于培养菌棒。

2.2.2箱培法。是用纸箱、木箱或竹筐等透气透水容器来代替土坑培养菌枝的方法。在箱底钻若干通气排水小孔,铺1层小石头,小石头上撒砂土2~3cm厚,再按地下坑培法的样子进行菌枝培养即可。

3蜜环菌菌棒的培养

菌棒是长有蜜环菌菌索的粗树棒,也叫菌材。它可用于天麻有性繁殖栽培,但更主要的是用于天麻无性繁殖栽培和生产蜜环菌菇体(出菇),因此菌棒生产的意义很重要。培养菌棒,所用的树种和基础培养料均与土培菌枝的相同,培养方法也与之大同小异。但应注意以下几点。

3.1场地选择和准备

菌棒生产场地要靠近树林或天麻栽培地,最好选在天麻栽培地的中心;场地坡度不得大于30°;高海拔地区选阳山,低海拔地区选阴山;场地土壤土层深厚,上层砂土下层黏土,土质弱酸性;不选熟地或荒地而选荒山或树林。场地选好后,应除草、平地或改成小梯田。

3.2菌种准备

选用无杂菌感染,表面有菌索,菌索细嫩、棕红色且有白色生长点的土培菌枝作菌种,也可用瓶装菌枝作菌种。

3.3培养方法

与土培菌枝的基本相同,但有以下区别:生产菌棒的土坑应长些,长为90cm;所用树棒同样要新鲜,要砍好鱼鳞口,但与枝段相比应粗些和长些,长为30cm;每层菌枝实际上包含2层枝段,每坑可培育12~13层菌枝,而每层菌棒只有1层树棒,每坑可培育5~6层菌棒。

3.4培养时间

菌棒培养需1~2个月才成,因此当米麻、白麻、天麻种子在4~8月播种时,菌棒应在2~6月接种培养。

3.5蜜环菌更新或更换

同一菌株的蜜环菌,连续使用4~5代后就出现退化现象,引起2种栽培方式的天麻产量降低,品质变劣,因此应及时用新菌株或用老菌株提纯复壮的菌株进行蜜环菌的更新或更换。要求每隔4~5年,从母种的分离纯化开始,重新生产蜜环菌的各级菌种。萌发菌也有同样的现象发生。

4参考文献

[1] 徐锦堂.中国天麻栽培学(第一版)[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1993.

[2] 王秋颖,郭顺星.天麻人工栽培技术[M].北京:中国农业出版社,2002.

[3] 黄柱,陈能刚.林间天麻栽培技术[J].现代农业科技,2007(14):38.

[4] 董光月,黄昌豹,刘海燕,等.天麻栽培技术[J].山东林业科技,2006(4):73.