丙型肝炎病毒核心抗原检测在血液筛查中应用

胡晓静

【摘要】 目的 应用丙型病毒性肝炎核心抗原(HCV 2cA g) EL ISA 检测试剂, 用于诊断早期丙型肝炎(HCV ) 病毒标志物。方法 78份怀疑为HCV 感染患者血清中采用EL ISA 法检测的HCV 核心抗原,并以HCV RNA PCR 法和抗- HCV 检测结果作为比较。结果 78份样本中,PCR法测HCV RNA,阳性36例,阴性42例,EL ISA法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44例,RT 2PCR荧光定量法测抗-HCV,阳性29例,阴性49例;结论 以PCR 法测HCV RNA与多种方法检测丙型肝炎病毒核心抗原的临床价值。

【关键词】 HCV 核心抗原; HCV - RNA ; 抗- HCV ; HCV RT2PCR

输血和注射是我国丙型肝炎病毒重要的传播途径,目前采用抗- HCV 抗体检测对血液进行筛查和疾病的诊断,使输血后丙型肝炎的发生率大大降低。但是在HCV 感染后至抗-HCV 抗体产生之前有一段长约40～70 d 的窗口期,此时已具有传染性, 尽管使用的抗2HCVEL ISA 试剂盒均为国家“批批检”合格产品,但由于厂家之间使用HCV 基因重组抗原质量及各抗原片段包被比例的不同, 各厂家试剂间的灵敏度和特异性存在着一定差异, 从而导致抗2HCV 检测结果不一致,易产生假阳性或漏检等情况。由于在HCV 感染后2～5 周HCV RNA 即可出现在感染者的外周血中 ,被视为HCV 病毒复制的直接标志,可以缩短感染后血清阳转前的检测窗口期,以实现HCV 感染的早期诊断。本实验采用EL ISA 法检测HCV 核心抗原, 并分别与HCVRNA PCR 法测抗- HCV 检测结果相比较;评估HCV 核心抗原检测技术的临床应用价值。现对河南省安阳市中心血站怀疑HCV78份病例进行检测分析报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 怀疑HCV 感染的门诊及住院患者血清标本78份。

1.2 试剂 HCV 核心抗原检测丙型肝炎病毒核心抗原试剂盒，HCV RNA 检测HCVRNA 荧光定量检测试剂盒。抗- HCV 检测丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒。

1.3 主要仪器 洗板机(ST236W )和酶标仪(ST2360)均为上海科华实业有限公司生产。PCR 扩增仪(L igh t Cycler L)

1.4 方法 78份血清标本分别用HCV 2cA g EL ISA 试剂和HCV RNA 荧光定量RT 2PCR 试剂检测, 对其余血清标本仅行荧光定量RT 2PCR 试剂检测。各种操作方法, 结果判断严格按说明书要求。

2 结果

78份样本中,PCR 法测HCV RNA ,阳性36例,阴性42 例,EL ISA 法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44 例, RT 2PCR 荧光定量法测抗- HCV ,阳性29例,阴性49例; HCV RNA PCR、HCV 核心抗原、抗-HCV 阳性率分别为46. 15 %、43.58%、37.17%。同HCV RNA PCR 检测结果比较:HCV 核心抗原检测符合率90. 08 %、假阳性率3. 31 %、假阴性率6. 61 %;抗- HCV 检测符合率81. 81 %、假阳性率4. 13 %、假阴性率14. 05 %。

3 讨论

PCR 法检测的影响因素较多,在样本收集、储存和检测方面都有严格的要求。而且要求昂贵精密的仪器、较高的实验技艺,试剂也比较昂贵,又容易出现交叉污染导致假阳性结果,使得PCR 技术的推广受到了极大的限制。目前对丙肝的检测主要为检测抗2HCV 和HCV RNA。RT2PCR 可定性和定量检测出的HCVRNA , HCV 感染后1～ 13 d, 应用HCVRNA 和RT 2PCR 即可检测到HCV RNA , 2周后可检出HCV 2cA g, 比抗体检出平均约早30 d。所以上述两种方法对HCV 感染的早期诊断价值相类似。建立早期简便、敏感、特异的检测丙肝抗原试剂, 缩短感染的“窗口期”是降低丙型肝炎感染的有效途径。如果单用第三代抗2HCV 试剂A 或试剂B 检测的阳性标本, 再用HCV RNA 荧光定量RT 2PCR 检测阳性率分别为43.58% 和37.1% , 其中就可能存在漏检或假阳性。其特异性和灵敏度都比较高,但由于各厂商所用抗原质量和各抗原片段包被比例的不同,因此生产的试剂在灵敏度和特异性方面存在一定差异,从而导致抗2HCV 结果的不一致,易产生漏检和假阳性等情况。我国研制抗HCV不同基因区抗体报道较多,亦有实验室对制备的抗体进行双抗体夹心检测HCV 抗原 。国内外近几年来探索应用HCV 2cA g 检测HCV 的报道较多。结果显示,抗原检测阳性率比文献报道的在抗2HCV 阳性标本中HCV 2cA g 阳性率(34. 48% )明显要高。比较而言, HCV 2cA g EL ISA 法快速、便捷,较适用于安全输血中献血者的血液筛检。HCV 核心抗原检测技术反映了HCV 复制的间接指标,且实验方法简便、快捷、价廉,可以在3 h 内完成,所需设备简单,可进行批量检测。HCV 2cA g EL ISA 技术与抗2HCV 有互补作用,二者同时检测能提高HCV 检出结果的准确性, 可明显降低抗2HCV 检测的假阳性, 减少血液资源的浪费,当然这还有待进一步研究。 由于HCV RNA RT 2PCR 测定方法操作复杂、技术要求高、费用高, 不能作为普查或常规应用。

丙型肝炎病毒核心抗原检测检出率不高的原因笔者认为①丙肝病毒增殖未达到高峰, 抗原在血清中未达到检出水准。②在血流中形成免疫复合物状态。③检测方法的敏感度不够灵敏。为提高检出的准确性,有必要寻找一种快速、便捷的辅助确证诊断技术。

参 考 文 献

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