炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响

张亚强　宋莎莎　彭修娟　崔九成

摘 要：目的：研究不同炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响。方法：采用HPLC法测定杜仲生品及6种不同炮制品中松脂醇二葡萄糖苷的含量。结果：不同炮制方法松脂醇二葡萄糖苷的含量不同，其中：盐制砂炒Ⅱ>盐蒸制>盐制砂炒Ⅰ>盐炒制Ⅱ>盐炒制Ⅰ>清炒>生品。结论：炮制方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量有显著影响，且以传统的杜仲盐制砂炒方法较为理想。

关键词：杜仲；炮制方法；松脂醇二葡萄糖苷

中图分类号：R283.3文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0049-02

杜仲为杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）的干燥树皮，为我国名贵药材，始载于《神农本草经》，列为上品，具有补肝肾、强筋骨、安胎［1］之功效。杜仲皮含有多种活性成分［2］，其中松脂醇二葡萄糖苷(Pinores inoldiglucoside，PDG)和绿原酸(Chlorogenic Acid)有降压作用 ［3，4］。盐制杜仲为2005版药典收载的炮制品，本篇以松脂醇二葡萄糖苷含量为指标，比较不同炮制方法对其含量的影响，为临床盐制杜仲提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Sartorius BP211D型电子分析天平（德国），FW177型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），Waters2690高效液相色谱仪，Waters996二极管阵列检测器，Millennium32色谱工作站，H66025T型超声清洗仪。

1.2 试药

杜仲原药材购自西安市药材市场，经生药教研室王继涛教授鉴定为杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）的干燥树皮。松脂醇二葡萄糖苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号111537-200501）。流动相所用甲醇为色谱纯，水为重蒸水(实验室自制)，盐水均为2％的食盐水溶液，磷酸等其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 不同炮制品的制备

杜仲生品的制备：将杜仲除去粗皮，洗净润透，用切药刀切成3～4㎜的横丝（垂直于胶丝的生长方向）。

不同炮制品的制备（所用盐水均为2％的食盐水溶液）：

（1）清炒法：取100g杜仲丝置炒制容器内，中火炒至颜色加深，有焦斑，丝易断时，取出晾凉。

（2）盐炒制Ⅰ：取100g杜仲丝，置容器内加盐水拌匀，加盖闷润。待盐水被吸尽后，置炒制容器内，中火炒至颜色加深，有焦斑，丝易断时，取出晾凉。

（3）盐炒制Ⅱ：取100g杜仲丝，置炒制容器内，中火炒至颜色加深，有焦斑，丝易断时，取出，喷淋盐水拌匀，再置炒制容器内炒干，取出晾凉。

（4）盐制砂炒Ⅰ：将河砂置锅内炒至灵活状态后，取用盐水闷润好的杜仲丝100g倾入锅内，中火反复翻炒20min，取出晾凉。

（5）盐制砂炒Ⅱ：将专用温度计置入锅内，放入适量细砂，将100g杜仲丝置入锅内，中火反复翻炒20min后取出，筛去细砂，喷淋盐水拌匀，再置炒制容器内炒干，取出晾凉。

（6）盐蒸制：取100g杜仲丝，置容器内加盐水拌匀，加盖闷润。待盐水被吸尽后，置锅内中火蒸制1h，取出晾凉。

2.2 色谱条件

色谱柱：Welch Materials C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4％磷酸溶液（25∶75）；柱温：25℃；检测波长： 277nm；流速：1mL•min-1；进样量：10μL。

2.3 对照品溶液的制备

取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，置于五氧化二磷减压干燥器中干燥12h，精密称定，加甲醇溶解、定容，制成每1mL含松脂醇二葡萄糖苷0.218mg的对照品溶液，备用。

2.4 供试品溶液的制备

取上述不同炮制品粉末各1g，精密称定，置于三角瓶内，精密加入甲醇25mL，称重，超声处理1h后，放凉，用甲醇补足缺失量，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.5 线性关系考察

精密吸取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液1、3、5、7、9μL，按2.2项下的色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=441480X-3092.9（r=0.9995）。结果显示，松脂醇二葡萄糖苷在0.218～1.962μg线性关系良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12h进样10μl，测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积，结果表明，该供试样品在12h内具有良好的稳定性，RSD为2.2%。

2.7 精密度试验

取同一供试品溶液10μL，连续进样5次，测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积。结果表明本法精密度较好，RSD为1.62%。

2.8 重复性实验

取同一样品共5份，照“供试品溶液制备”项下的方法制备供试品溶液，测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积，结果表明本法重复性良好，RSD为1.82%。

2.9 回收率试验

取已知含量的样品6份，精密加入一定量的松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液，照“供试品溶液制备”项下的方法制备供试品溶液，取10μL注入液相色谱仪，测定松脂醇二葡萄糖苷的峰面积，计算回收率，结果显示，松脂醇二葡萄糖苷的平均回收率为99.49%，RSD为1.81%(见表1)。

2.10 样品的含量测定

分别吸取各供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按2.2项下的色谱条件测定，记录峰面积，由回归方程计算松脂醇二葡萄糖苷的含量，结果见表2。松脂醇二葡萄糖苷对照品与样品色谱图见图1。

结果表明：采用不同炮制方法，松脂醇二葡萄糖苷含量不同，呈以下趋势：盐制砂炒Ⅱ>盐蒸制>盐制砂炒Ⅰ>盐炒制Ⅱ>盐炒制Ⅰ>清炒>生品。传统的杜仲盐制砂炒方法较为理想，松脂醇二葡萄糖苷的含量较高。

3 讨论

（1）在流动相的选择上，通过对乙腈-不同浓度磷酸溶液系统，及其乙腈-磷酸溶液不同比例的洗脱系统进行研究，最终选择甲醇－0.4％磷酸溶液（25∶75）出峰较为合适，可达到基线分离。

（2）本研究对于检测波长的选择，进行了全波长扫描，松脂醇二葡萄糖苷选用277nm，系统稳定性好，干扰小。

（3）通过对不同炮制方法对杜仲中有效成分的影响的实验研究，结果表明，生品的松脂醇二葡萄糖苷含量均明显低于各炮制品，这可能是由于生品杜仲中橡胶丝的作用使其有效成分难以溶出，这为传统的“炒断丝”炮制标准提供了理论依据。

（4）盐制杜仲中，松脂醇二葡萄糖苷含量大于清炒法和生品，这为盐制杜仲的传统方法提供了科学依据。

（5）通过对不同盐制杜仲方法的比较，结果表明，砂炒杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量高于不加砂的炮制方法，这可能是由于砂可以提高炒制温度，传热也比较均匀，进而提高了杜仲的断丝率所致。

（6）盐蒸制杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量最高，但是否优于传统的炒制法，还有待于进一步研究。

参考文献：

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京：化学工业出版社，2005.

［2］ 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草［M］.上册.上海:上海科学技术出版社，1996.

［3］ Charles J Sih， Ravikumar P， Huang Fuchin，et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive［J］. Am Chem Soc，1976，17:5412.

［4］ 李家实.杜仲皮与叶化学成分初步研究［J］.中药通报，1986，11(8):41.

［5］ 臧友维.杜仲化学成分研究进展［J］.中草药，1989，20(4):42-43.

（责任编辑：陈涌涛）