云南西双版纳地区橡胶炭疽病病原鉴定

张春霞　何明霞　李加智　蔡志英　王进强

摘要：对来自西双版纳11个橡胶炭疽病菌菌株进行了鉴定。结果表明，引起西双版纳橡胶炭疽病的病原有2种，分别为：胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和尖孢炭疽菌(C.acutatum)。2个种的区别主要在于分生孢子的形态，菌落正反面的颜色，菌落的生长速度及对农药的敏感性等。

关键词：橡胶；炭疽病；鉴定

中图分类号：S 763．13；S 431．191

橡胶树炭疽病是橡胶树上的一种重要病害，可以危害苗圃小苗、大田幼树直至成龄开割胶树，侵染嫩叶、叶柄、嫩梢和果实等部位，引起嫩叶脱落、嫩梢回枯和果实腐烂，甚至形成僵果悬挂在树上。严重时会引起胶树的重复落叶和嫩梢回枯，推迟开割时间。本病于1906年在斯里兰卡首次发现，目前在亚非橡胶种植国家广泛发生，其中马来西亚、斯里兰卡、印度、泰国、中国和西非等国家发病较严重。

两双版纳是一个典型的山地种植橡胶地区，种植面积在全省最大，与我国海南在气候类型上有着明显的不同，且炭疽病近年来在西双版纳胶园呈越来越严重的危害趋势。在勐满农场、花卉园及部分民营胶园嫩叶或老叶上发生了一种与传统炭疽病明显不同的现象，受害叶片上凸成圆锥状，严重时可看到整个叶片布满上凸的小点，后期形成穿孔，造成大量胶树落叶和部分病株减产或停割。在已开割胶树老叶上如此严重发生炭疽病，实为罕见。因而，目前有必要对云南省植胶垦区危害橡胶树的炭疽病菌的种类进行研究，掌握西双版纳胶园橡胶炭疽菌种群分布，确定致病优势种，以便为研究大田橡胶炭疽病病害流行规律、大田病害防治提供理论支撑和科学依据。

1材料和方法

1．1供试材料

橡胶炭疽病叶、病枝采自西双版纳勐养橡胶分公司，黎明橡胶分公司(勐满)，勐腊橡胶分公司，云南省热作所江南试验队，花卉园等地。

1．2病原菌的分离和纯化

采集到的病害标本按组织分离法进行分离培养。并用柯赫氏法则进行确定。单孢分离采用琼胶平板表面单孢子挑取法，获得的纯菌种保存待用。

1．3病原菌的鉴定

1．3．1培养性状及附着胞的观察

将各菌株分别接种于PDA平板中央，置于(25±1)℃光照培养箱中培养。逐天观察、记录菌落形状、颜色、孢子产生情况。分生孢子附着胞采用PDA平板上产生的新鲜分生孢子悬浮于自来水中，25℃培养24～48 h获得。同时观察孢子和附着胞的形状，每个菌株测量50个分生孢子并计算其平均大小。

1．3．2菌落生长速度的测定

在各菌株长满PDA菌落的平板上，选生长旺盛的边缘部位用直径为5 mm的打孔器打取新鲜菌丝块，挑入PDA平板中央，使菌株菌丝面贴于基质表面，分别置于(25±1)℃光照培养箱中培养，每个菌株设3个重复。第3天开始测量菌落直径，以后每天测量。

1．3．3对农药的敏感性测定

供试菌株为胶孢炭疽和尖孢炭疽；供试药剂为SDS Biotech K.K.制造厂生产的75％百菌清可湿性粉剂，日本曹达株式会社产的70％甲基托布津。将供试农药加入PDA培养基中，配置成含农药浓度为0.1、1、10、100mg／L和1 000 mg／L的PDA培养基，用直径为5 mm的打孔器取HH4(尖孢炭疽菌)和HH3(胶孢炭疽菌)的PDA平板培养物菌块接种于含上述两种药剂的PDA平板中央，每处理重复3次，对照接种不含药剂的PDA平板七。置于(25±1)℃培养箱中培养7 d后，测量菌落直径，用统计软件DPS分析各菌株对农药的敏感性。

2结果与分析

2．1病原菌的分离

从感病的橡胶叶片或枝条上共获得11个菌株，分别编号为HH1、HH2、HH3、HH4、MYl、MY2、MY3、MY4、MM1、JN1、ML1。

2．2病原菌的鉴定结果

2．2．1培养性状的观察

各菌株在PDA上的培养性状见表1。可以看出，采白花卉园和勐满的HH4、MM1菌落正反面颜色均为橘黄色，和其他菌落明显不同。其孢子形状也和其他差别很大，为纺锤形或梭形。其余9个菌株的孢子均为圆柱形。

2．2．2孢子及附着胞大小

在显微镜下测量其大小，拍摄显微形态图，结果见表1及图1、2。可以看出，各个菌株的孢子大小差别不大。除了HH4、MM1外，孢子都产生附着胞。

2．2．3生长速度

菌株的生长速率直接与生产实践紧密相关，本次共测定了11个菌株在PDA平板上的生长速率，HH4、MM1的菌落直径显著低于其他菌株，生长缓慢，培养4 d仪38.1、37.5 mm。

2．2．4对农药的敏感性

从农药试验测出：百菌清和甲基托布津对尖孢炭疽菌HH4的EC₅₀均比胶孢炭疽菌HH3的高(表3)。尖孢炭疽菌HH4和胶孢炭疽菌HH3对甲基托布津的敏感性差异显著，HH4有较强的耐药性。此结论与C.K.Jaysinghe报道的结果相一致。DPS分析结果显示供试农药问的抑菌差异也显著，甲基托布津的抑菌效果高于百菌清(表4)。

3结论与讨论

根据相关参考资料，对从感病橡胶叶片或枝条分离到的11个菌株进行了鉴定。结果表明：引起西双版纳橡胶炭疽的病原优势种为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、其次为尖孢炭疽菌(C.acutatum)。两个种的主要区别在于分生孢子形态、菌丝生长速率、菌落颜色以及对农药的敏感性。与C.K.Jayasinghe的描述相同。

从本次研究可以看出，两个种有明显的不同。外观症状橡胶叶片有上凸小点的为尖孢炭疽菌，有典型炭疽症状的为传统的胶孢炭疽菌。培养性状显示：尖孢炭疽菌的菌落颜色鲜艳，为橘黄色，到培养后期，产生典型的纺锤形分生孢子；而胶孢炭疽菌产生圆柱形，两端圆的分生孢子，菌落颜色偏灰色。从菌丝生长速率来看，生长缓慢的为尖孢炭疽菌，生长较快的为胶孢炭疽菌。对农药的敏感性结果表明，胶孢炭疽菌较尖孢炭疽菌敏感。但经DPS统计软件分析，HH4和HH3对百菌清的敏感差异不明显。鉴于此现象，两小种对农药的敏感性有必要做更深的研究，增加供试农药的种类。胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌对农药的敏感性是否会因林间用药而发生变化，都值得进一步的探索。

在西双版纳，橡胶炭疽病是目前橡胶生产上仅次于橡胶白粉病的又一重要病害，以前胶孢炭疽菌为此病害的唯一病原，这次在西双版纳植胶区发现的尖孢炭疽菌是首次报道。尖孢炭疽菌原来被描述作为果实采后的一种病害，最近发现在橡胶生产上也引起了严重损失。可能是由于生物多样性的破坏，一些弱寄生的菌上升为强寄生菌，造成了橡胶生产上的危害。从大田病害发展及室内农药毒力测定结果来看，随着橡胶产业的不断发展及环境条件的逐渐变化，尖孢炭疽菌引起的病害有逐渐加重的趋势，这为生产上防治病害带来了更大的困难，本文仅对橡胶炭疽病进行了初步的鉴定，今后有必要开展其生物学特性及大田病害防治技术研究方面的工作，为生产上有效防治病害提供技术支撑。