辽宁五味子种子带菌检测及药剂消毒处理研究

刘　博　傅俊范　周如军　严雪瑞

摘要采用PDA平板检测法对辽宁省6个地区的五味子种子进行带菌检测，并测定了6种杀菌剂对五味子种子的消毒效果。结果表明，五味子种子表面携带的主要真菌类群为曲霉属和青霉属，种子内部寄藏真菌主要包括曲霉属、青霉属、镰刀菌属、根霉属和链格孢属等。供试的6种杀菌剂对五味子种子均有一定的消毒效果，福美双对五味子种子消毒处理效果最显著。

关键词五味子；种子带菌；消毒处理

中图分类号S 435.67

五味子[Schisandra chinensis(Tuecz.)Baill.]为木兰科五味子属木质藤本植物，是辽宁名贵药材，在国内外久负盛名，素有“辽五味”之称。其果实入药，具有益气敛肺、滋肾、涩精、止泻敛汗等功能，果实还可加工成酒和饮料，具有较高的开发价值。近年来随着农业产业结构的调整以及市场需求的不断增加，五味子人工栽培面积不断扩大，种子产区间调运频繁，病害问题日益突出，极大地影响了五味子的生产。

五味子的主要病害包括叶枯病、茎基腐病、白粉病等，产前对种子进行健康检测和消毒处理是提高播种品质和防治五味子种苗病害最简单、经济有效的方法之一。本研究对辽宁省6个地区的五味子种子进行带菌检测和药剂消毒处理研究，旨在明确五味子种子带菌情况，筛选合适的种子处理药剂，为五味子种子产区间安全调运和病害防治提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

供试种子：2007年收获的五味子种子6份，分别来自辽宁省沈阳市东陵区、清原县大孤家乡、沈阳市于洪区、凤城市大梨树村、营口市黄土岭乡、新宾县木奇镇，由沈阳农业大学植物病害流行实验室提供。

供试杀菌剂：50％多菌灵(carbendazim)可湿性粉剂为江苏省江阴市农药二厂有限公司产品，50％福美双(thiram)可湿性粉剂为天津市捷康化学品有限公司产品，75％百菌清(chlorothalonil)可湿性粉剂为利民化工有限责任公司产品，70％甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)可湿性粉剂为日本曹达株式会社产品，80％代森锰锌(mancozeb)可湿性粉剂为南通德斯益农化工有限公司产品，25％甲霜·霜霉(15％甲霜灵metalaxy1+10％霜霉威propamocarb)可湿性粉剂为江苏宝灵化工股份有限公司产品，均为市售。

1.2研究方法

1.2.1种子外部带菌检测

每个品种随机选取100粒种子，放人灭菌的250mL三角瓶中，加25mL无菌水后充分振荡，吸取5mL悬浮液，2000r／min的转速离心10min，倒去上清液，加3mL无菌水均匀悬浮后用无菌水进行系列梯度稀释，每个稀释梯度孢子悬浮液吸取100μL涂抹到9cm直径PDA平板上，涂匀。相同条件下设无菌水空白对照。每个浓度涂5个平板，置于25℃恒温箱中黑暗条件下培养5d后观察菌落生长情况，记录种子外部携带的真菌种类及分离比例，计算种子外部携带真菌的孢子负荷量。

孢子负荷量=5皿菌落总数／0.5mL×稀释倍数×25mL／100粒；

分离比例=(某类真菌菌落个数／菌落总数)×100％。

1.2.2种子内部带菌检测

将不同来源的种子在5％次氯酸钠溶液中浸泡5min，然后用无菌水冲洗3遍，取50粒种子用灭菌的手术刀将种壳和种仁分开，将种仁在1％次氯酸钠溶液中浸泡2min，然后用无菌水冲洗3遍，将消毒后的种壳和种仁分别均匀摆放在9cm直径PDA平板上，每皿摆放10粒，每个处理5次重复，25℃恒温箱中光照、黑暗各12h交替培养5～7d后，记录种子带菌情况，不同部位真菌种类和分离频率。

种子带菌率=(带菌种子数／检测种子总数)×100％；

某菌的分离频率=(带某类菌种子数／带菌种子总数)×100％。

1.2.3真菌鉴定

将分离到的各种真菌进行纯化，转管保存后镜检。根据真菌培养性状和形态特征，参考有关工具书和文献鉴定到属。

1.2.4不同药剂对种子的消毒效果

将不同来源的五味子种子均分别用以下药剂处理：50％多菌灵可湿性粉剂、50％福美双可湿性粉剂、70％甲基硫菌灵可湿性粉剂按1:200药种比拌种，75％百菌清可湿性粉剂按1:120药种比拌种，80％代森锰锌可湿性粉剂按1:250药种比拌种，25％甲霜·霜霉可湿性粉剂按1:333药种比拌种，以不做任何处理的整粒种子做空白对照。各处理种子均匀摆放在直径9cmPDA平板上，每皿摆放10粒，每个处理4次重复，25℃恒温箱中黑暗条件下培养5～7d后，记录不同种子带菌情况，计算药剂消毒效果。

2结果与分析

2.1种子外部带菌检测结果

结果表明(表1)，五味子种子表面携带的优势菌群主要为曲霉属和青霉属。其中来自沈阳市东陵区的种子主要携带青霉属，分离比例达99.69％，其余的种子主要携带曲霉属，此外，营口市黄土岭乡和清原县大孤家乡的五味子种子还带有毛霉属，分离比例分别为19.51％和0.17％，营口市黄土岭乡的种子还带有镰刀菌属真菌，分离比例为2.44％，沈阳市东陵区的种子带有链格孢菌，清原县大孤家乡的种子带有根霉属真菌，凤城市大梨树村的种子带有木霉菌属真菌。

2.2种子内部带菌检测结果

结果表明(表2、表3)，沈阳市东陵区的种子种壳上仅分离到青霉属真菌，凤城市大梨树村和新宾县木奇镇的种壳上带有曲霉属真菌，分离频率分别为100.00％和87.10％，清原县大孤家乡的种壳上带有曲霉、青霉、毛霉、根霉和镰刀菌，沈阳市于洪区的种壳上带有根霉和镰刀菌，营口市黄土岭乡的种壳上带菌率仅为12.00％，主要有曲霉、青霉和木霉；种仁上曲霉属和青霉属分离频率较高，沈阳市东陵区的种子种仁上仅分离到青霉属真菌，凤城市大梨树村和新宾县木奇镇的种仁上带有曲霉属真菌，清原县大孤家乡的种仁上带有曲霉、青霉、根霉，沈阳市于洪区和新宾县木奇镇的种仁上分离到镰刀菌，分离频率分别为20.00％和2.78％，此外，沈阳市于洪区的种仁上还带有部分链格孢属真菌，营口市黄土岭乡的种仁上带菌率仅为8％，主要有曲霉、青霉和根霉。

2.3不同药剂对种子的消毒效果

由于不同来源的五味子种子外部和内部携带真菌种类及各供试杀菌剂的防治谱有一定差异，不同杀菌剂对不同来源五味子种子带菌消毒效果不同。结果表明(表4)，50％福美双可湿性粉剂对五味子种子消毒处理效果最显著，处理后五味子种子带菌率在20.00％以下；50％多菌灵可湿性粉剂处理的清原县大孤家乡种子主要带曲霉，分离频率为75.00％，50％多菌灵可湿性粉剂处理的沈阳市东陵区种子主要带青霉，分离频率为64.86％；70％甲基硫菌灵可湿性粉剂处理的清原县大孤家乡种子主要带根霉，分离频率为62.50％，70％甲基硫菌灵可湿性粉剂处理的营口市黄土岭乡种子主要带曲霉，分离频率为51.28％；35％甲霜·霜霉可湿性粉剂处理的沈阳市东陵区种子主要带青霉，分离频率为100.00％，25％甲霜·霜霉可湿性粉剂处理的清原县大孤家乡种子主要带根霉，分离频率为65.00％。

3结论与讨论

近年来对药用植物种子的带菌检测和药剂处理报道较多，但五味子种子方面在国内外尚未见报道。对辽宁省6个地区的五味子种子进行带菌检测，结果表明，五味子种子外部携带真菌主要是曲霉属和青霉属，种子内部寄藏真菌主要包括曲霉属、青霉属、镰刀菌属、根霉属和链格孢属。其中由镰刀菌引起的五味子茎基腐病和由链格孢菌引起的五味子叶枯病是目前五味子生产上危害最重的病害。因此，五味子种子带菌检测及消毒处理技术在五味子安全生产和病害防治中具有重要意义。

因不同地区的种子外部和内部带有的真菌种类不同，所以同一种药剂对不同地区种子的消毒处理效果不同。供试的6种杀菌剂对五味子种子均有一定的消毒效果，福美双对五味子种子消毒处理效果最显著，处理后五味子种子带菌率在20％以下。

本研究仅对辽宁省6个地区的五味子种子进行了带菌检测和药剂消毒处理研究，其他地区五味子种子的带菌情况，安全有效的种子处理药剂的筛选，还需进一步研究。