黄精炭疽病病原鉴定及药剂筛选

桑维钧　宋宝安　练启仙　李小霞　熊继文　曾令祥

摘要根据病原菌形态特征和致病性等特点，黄精炭疽病的病原菌鉴定为半知菌亚门刺盘孢属的Colletotrichumclrczl'lan~(Perk．)Vogl。供试的5种杀菌剂对病原菌菌丝的抑制作用结果表明，64％(口恶)霜·锰锌WP、75％代森锰锌WP浓度为800μg／mL以上时抑菌率达100％；90％三乙膦酸铝WP浓度为1125μg／mL时的抑菌率为96．3％，15％三唑酮WP浓度为188μg/mL时抑菌率为85．2％，69％烯酰吗啉WP浓度为l 380μg/mL时抑菌率为51．9％，863．g／mL时抑菌率仅35．2％。

关键词黄精炭疽病；病原鉴定；药剂筛选

中图分类号S 435．672

近年来贵州省重点发展的地产中药材主要有石斛、半夏、天冬、黄精、淫羊藿、草乌、白术、白芍、玉竹、吴茱萸等。黄精(Polygonatumsibiricum Red．)是百合科(Liliaceae)多年生草本植物，在贵州俗称“老虎姜”，兴义称为“观音台”，解放前均为自产自销，由于品质优良，解放后远销江苏、浙江等地。黄精具有提高免疫力、降血脂、降血糖、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等作用，在研制新药和开发保健品方面有广泛发展前景。由于野生黄精产量低，近年来又被大量采挖，不能满足市场需要，目前在贵州凤岗、湄潭、兴义、大方等地有大面积栽培。然而，随着栽培面积的不断增加，病虫害发生逐年加重。调查发现，炭疽病是黄精上的一种重要病害，主要危害叶片及茎杆，病重时造成全株枯死，地下部分腐烂，严重影响了黄精的生产，但对该病的研究尚无系统的报道。2003—2005年，从基地采集病株标样分离、鉴定，并进行了杀菌剂的室内筛选试验，现将结果报道如下。

1材料与方法

1．1病害发生特点调查

调查并采集贵州省凤岗县、湄潭县、大方县、兴义市等中药材基地的黄精炭疽病的典型症状标本，记录发病特点和病株率、病叶率等。

1．2病原菌鉴定

1．2．1分离培养

在对自然发病组织上的病菌镜检观察的基础上进行组织分离。剪取病健交界处约5 mm的组织，先在70％的酒精中浸几秒钟，再用0．1％的升汞灭菌2min，用无菌水洗3次，然后置于PDA上培养，长出菌丝后，取菌落边缘菌丝再转置PDA上培养。在显微镜下观察菌丝、产孢结构等形态，并测其大小。

1．2．2致病性测定

将分离纯化的病菌配成悬浮液，用喷雾法接种黄精新叶，接种后用塑料薄膜保湿48h，用无菌水作为对照，定期观察发病情况。发病后从病组织上取子实体镜检，描述病原菌形态特征，测其大小。将自然发病与接种发病的病原菌进行形态比较，参考有关文献确定病原菌的种类。

1．3药剂对病菌菌丝生长的抑制作用

1．3．1供试药剂

供试药剂有90％三乙膦酸铝可湿性粉剂(fos—etyl-aluminium，夏邑华泰化工有限公司)；69％烯酰吗啉可湿性粉剂(dimethomorph，青岛东生药业公司)；64％(口恶)霜·锰锌可湿性粉剂(hymexazol+man—cozeb，西安近代农药科技股份有限公司)；75％代森锰锌可湿性粉剂(mancozeb，杜邦中国有限公司)；15％三唑酮可湿性粉剂(triadimefon，四川国光农化有限公司)。

1．3．2抑菌试验

将待测菌株接种在PDA平板上25℃恒温培养4 d，用90％三乙膦酸铝可湿性粉剂，69％烯酰吗啉可湿性粉剂，64％霜·锰锌可湿性粉剂，15％三唑酮可湿性粉剂，75％代森猛锌可湿性粉剂配制成不同浓度PDA平板，将已培养好的病菌用打孔器的把菌落打成直径5 mm的菌饼，然后移到含药PDA平板上，另设清水空白对照。每个处理重复3次，恒温培养后，测量菌落直径，计算抑菌率。计算公式如下：

抑菌率＝[(对照菌落直径一5)－(处理菌落直径一5)]／(对照菌落直径一5)X100％。

2结果与分析

2．1危害特点

调查发现，黄精炭疽病主要危害叶片和茎杆，发病轻的田块，株发病率达13％，叶发病率达20％～30％，发病严重的田块，株发病率达20％，叶发病率达50％以上。该病在叶片上或叶尖或叶缘产生圆形、半圆形、椭圆形或不规则形病斑；直径为0．5～2．0 cm，多数为1 cm左右。病斑初期褪绿，后期整个病斑中央变为黄白色，病斑外围呈黄褐色，湿度大时，病斑扩展迅速，严重时造成叶片大量枯死。茎部受害后形成褐色稍凹陷的病斑，其上产生大量黑色小点，后期茎杆枯死。

2．2病原菌鉴定

2．2．1病原菌的致病性测定

试验结果表明，接种发病植株的症状与田间植株症状相同；取病部组织分离，在PDA上培养，镜检病原菌，其分生孢子盘和分生孢子的形态特征和田间病株上的病原菌一致。

2．2．2病原菌的形态及鉴定

镜检病原菌，分生孢子盘为浅褐色，直径170μm左右；产生大量刚毛，刚毛深褐色，具隔，表面光滑，顶端尖，长为90—295 pm，放射状排列于分生孢子盘上；分生孢子梗棒形或圆柱形，密生于分生孢子盘上；分生孢子镰刀形，无色，单胞，两端略尖，大小为(17．3～27．6)pmX(2．4～3．6)pm，内含颗粒状物质，有油球。纯化的菌株在PDA上，菌落边缘整齐，菌丝体较发达，毛绒状，初期白色，后期基质变为黑褐色。根据病原菌的形态特征、培养特性和致病性测定结果，参考有关文献，确定引起该病的病原菌为Colletotrichumcircinans(Berk．)Vogl．。

2．3药剂对病菌菌丝生长的抑制作用

由表1可以看出，对黄精炭疽病菌菌丝生长有较强抑制作用的杀菌剂有64％(口恶)霜·锰锌可湿性粉剂和75％代森猛锌可湿性粉剂，在两种浓度下对病菌的抑菌率均达100％；90％三乙膦酸铝可湿性粉剂为85％以上，15％三唑酮可湿性粉剂和69％烯酰吗啉的抑菌率相对较低。

3结论与讨论

由于省内各药材基地的中药材栽培大都是单一品种成片种植，随着栽培时间的延长，一旦有侵染性病害发生，条件具备时往往会逐年加重，造成大面积感病。因此，针对我省黄精炭疽病的发生特点，在进行杀菌剂的室内筛选试验的基础上，有待在病区进行防治试验以验证试验结果，并结合其他防治技术的应用，提前预防，以减轻该病的危害。