乙肝病毒DNA检验中实时荧光PCR技术的应用价值

【摘要】 目的 分析在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA检测中实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术的应用价值。方法 纳入2020年1月—2023年12月东莞市松山湖中心医院收治的160例疑似HBV患者作为研究对象，检测其乙型肝炎病毒DNA（hepatitis B virus-DNA，HBV-DNA）含量。使用实时荧光PCR技术和酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），以电化学发光法检测结果为标准，对比2种方法的诊断结果及其效能，并分析不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果 在160例疑似HBV患者中，电化学发光法检测阳性77例、阴性83例；实时荧光PCR技术检测阳性82例、阴性78例；ELISA检测阳性46例、阴性114例。实时荧光PCR技术检测准确度、灵敏度和特异度均高于ELISA（P＜0.05）。小三阳与急慢性感染期HBV-DNA含量低于大三阳（P＜0.05）。结论 实时荧光PCR技术在HBV-DNA检测中具有较高的诊断效能和价值，能够有效判断患者病情严重程度，有助于医生制定针对性治疗方案。

【关键词】 乙型肝炎病毒；酶联免疫吸附法；实时荧光聚合酶链式反应

文章编号：1672-1721（2025）01-0040-04" " "文献标志码：A" " "中国图书分类号：R512.6+2

临床上，HBV会引起慢性乙型肝炎，临床表现有多种，其中包括腹胀、乏力等，伴随病情的不断变化和发展，致使患者的肝功能代谢能力下降，严重者引起肝硬化或其他疾病，不利于患者的正常生活[1]。上述结论可以说明，对于慢性乙型肝炎患者来说，早期诊断和治疗不仅可以缓解病情发展，还可以提高患者的生活质量，促进预后[2]。电化学发光法检测是诊断慢性HBV的标准之一，但是这一检测方法容易发生钩状效应，且如果稀释倍数过于高，对于临床则失去了意义。与此同时，反复使用流动池会发生重复污染的情况；冲洗气泡直接影响测定结果，漫长的冲洗过程会导致检测效率减慢，并且仪器成本和维护费用高。ELISA是临床诊断HBV感染的一种常用手段，其特点是价格低、快速、方便、简单等，但受多种因素的影响，比如病毒滴度低、病毒变异等，致使漏诊、误诊发生[3]。近些年，随着医学水平的不断提高，实时荧光PCR技术在临床广泛应用，它可以精准检测HBV-DNA的含量，能够直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标，通过HBV-DNA含量能直接反映病毒在体内存在的数量、是否传染、传染性强度，具有一定的临床应用价值[4]。鉴于此，本研究以东莞市松山湖中心医院收治的160例疑似HBV患者作为研究对象，对实时荧光PCR在HBV-DNA检验中的应用效果及价值展开分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1月—2023年12月东莞市松山湖中心医院收治的160例疑似HBV患者作为研究对象，其中男性79例，女性81例；年龄34～72岁，平均年龄（54.16±1.38）岁；病程1～7 年，平均病程（4.39±0.18）年。

纳入标准：年龄34～72岁；积极配合研究者；可接受本研究检测方法者；患者及其家属知晓本研究。

排除标准：伴有语言功能严重障碍或精神疾病；由于个人原因无法配合检测；伴有心、肾等器官严重功能障碍；研究期间主动退出者。

1.2 方法

所有患者取清晨空腹静脉血4 mL，以3 000 r/min转速、10 cm半径离心15 min，采用ELISA法检测血液标本的乙肝e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）性质与状态，以上操作均按照说明书内容严格执行。HBeAg水平正常数值为＜0.5 ng/mL。采用实时荧光PCR技术对HBV-DNA水平进行定量检测，随后按照检测结果进行阳性、阴性的判定，HBV-DNA定量检测水平≥100 copies/mL为阳性，HBV-DNA定量检测水平＜100 copies/mL为阴性。

1.3 观察指标

（1）诊断结果。以电化学发光法检测结果为标准，对比实时荧光PCR技术和ELISA的诊断结果。（2）分析对比实时荧光PCR技术、ELISA的诊断效能（灵敏度，特异度，准确度）。（3）对比分析不同HBV感染状态下的HBV-DNA含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0统计学软件对本研究数据进行分析，计数资料以百分比表示，行χ2检验，计量资料以x±s表示，行t检验、F检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果

在160例疑似HBV患者中，电化学发光法检测阳性77例、阴性83例；实时荧光PCR技术检测阳性82例、阴性78例；ELISA检测阳性46例、阴性114例，见表1。

2.2 诊断效能

实时荧光PCR技术的检测准确度、灵敏度和特异度均高于ELISA（P＜0.05），见表2。

2.3 HBV-DNA含量

大三阳HBV-DNA含量高于小三阳和急慢性感染期（P＜0.05），见表3。

3 讨论

乙型肝炎是一种病毒性传染病，传染性和发病率高，传播途径（例如血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液和阴道分泌物等）有多种，应避免与他人共用餐具、毛巾、剃须刀、牙具、注射器和取血针等。乙型肝炎通常可见于乙型肝炎患者的急性期、慢性期、潜伏期末，亦可见于乙型肝炎病毒的无症状携带者。如果患者长时间身体素质差、处于病理状态，那么很容易出现并发症（比如肝硬化、肝衰竭等），生活质量下降，生命安全受到严重威胁[5-6]。因此，给予患者早期诊断具有重要意义。准确的诊断方式有助于医生早期制定有效、合理的治疗方案，控制疾病发展，保障患者的生命安全[7]。临床对于乙型肝炎的诊断以ELISA为主要诊断方法，这是病毒进入人体时免疫状态的一种及时反映，属于免疫学检测方式的一种，乙型肝炎检出率较高。但是，ELISA不能评估病情进展，而且无法判断实际病毒载量，同时，若操作不得当，可能直接影响检测结果。另外，ELISA对危险（病毒复制，感染，病毒传染）的敏感性十分低，这对疾病的早期诊断和治疗方法的制定不利。截至目前，诊断HBV常用化学发光检测法或者电化学发光检测法。这些方法的优点是特异度高、灵敏度高，但容易发生钩状效应，且如果稀释倍数过于高，反而有可能在倍比稀释的时候因为系统误差导致结果更加不准，故应用效果并不理想。与此同时，磁性、非磁性微粒的使用会导致散射吸收的强烈性进一步降低。化学发光检测法可准确检测出HBV感染，但是对于乙型肝炎患者来说，发病时期不同，HBV-DNA含量也不同[8]，无法判断患者的病情严重程度，临床诊断价值不高。

随着医学水平的不断进步与发展，在乙型肝炎诊断中，临床广泛应用实时荧光PCR技术检测。本研究以化学发光检测结果为标准，发现实时荧光PCR技术检测的准确度、灵敏度和特异度均高于ELISA（P＜0.05），进一步证实在HBV-DNA检验中，实时荧光PCR技术的诊断效能较高，可以更好地检测HBV疾病，降低漏诊、误诊的概率，及时、准确评估和判断患者病情严重程度，为预后治疗方案的制定提供数据支持。在乙型肝炎的临床诊断中，ELISA的优点是操作简单、灵敏度高、成本低。这一检测手段通过血清中特异性抗原与抗体联合进行检测，从而有效判断患者体内是否存在HBV[9]。但是，这一检测手段受多种因素的影响，例如血清指标浓度不同，致使假阴性、假阳性结果出现，误诊、漏诊率较高。与此同时，ELISA对自身检测要求十分高，反复洗板或孔间污染等因素会对检测结果产生不利影响，导致诊断准确度相对下降。采用实时荧光PCR技术检测的误诊、漏诊率低，可以根据检测结果形成检测报告，对于血液标本的检测准确度高，是通过每毫升拷贝数定量结果而决定的，临床优势、优点较多，检测结果准确，可以及时反馈HBV-DNA水平，为临床治疗提供可靠依据。从本研究结果中发现，不同HBV感染状态中，大三阳HBV-DNA含量高于小三阳和急慢性感染期（P＜0.05），说明伴随病情的加重，乙型肝炎患者血液中HBV-DNA含量也越高，定量检测结果可以为病情严重程度的综合判断提供参考。但ELISA和电化学发光检测法无法对HBV-DNA含量进行定量分析，ELISA只能进行广泛筛查，不能深入筛查。实时荧光PCR技术可以准确判断乙型肝炎疾病，通过HBV-DNA含量检测对患者的病情严重程度进行综合评估，促进预后。除此之外，实时荧光PCR技术的应用还能够进一步缩短患者的治疗时间，应用价值较高[10]。

在机体出现乙型肝炎病毒表面抗体（hepatitis B surface antibody，HbsAb）后，依然可以发现患者血清中HBV-DNA复制情况，尽管HbsAb阳性，但血清标本中仍然能够检测到HBV，其不断进行DNA复制。与此同时，伴随时间的延长，HBV-DNA阳性检出率进一步下降，分析原因，实时荧光PCR技术具有一定的精准性，可及时准确测定患者血清中病毒DNA的拷贝数，从而为评估病毒复制情况、判断病情分期、观察病情变化、调整治疗方案提供依据。这一技术是乙型肝炎治疗终点的一种综合评估技术，通过对乙型肝炎病毒变异株的及时、综合检测，可以有效判断患者的传染性情况。ELISA作为临床检测乙型肝炎疾病的传统方法之一，主要根据患者的病情严重程度反馈机体病情信息，可以对患者进行定性检验，但是无法进行病毒载量、定量的综合评估。在乙型肝炎抗原抗体检测中，实时荧光PCR技术在常规染色方式的基础上添加了荧光染料，表现能力较强，可以有效收集荧光探针反应信号，实时检测乙型肝炎抗体载量目标完成情况[11]。除此之外，如果患者无法使用ELISA检测，而且处于发病初期，实时荧光PCR技术可对其进行针对性检测，并且诊断特异度和准确度较高。这一检测方法与ELISA相比，可将HBV复制状况准确反映出来，还能充分体现出HBV数量。但是，实时荧光PCR技术检验也存在一定的缺陷，这一般体现在肝功能基本恢复正常患者中，因为患者体内HBV-DNA水平不断下降时，其表达也可能受人体免疫因素等多种因素的影响，促使实时荧光PCR技术在检验期间精准测定乙肝类型，同时检测出HBV载量，但无法检测出恢复中的HBV，也可能受到自身状况的影响，导致检验结果存在偏倚。因此，需要根据患者的具体状况选择合理的检测方式，以进一步提高检测准确性。对于乙型肝炎患者，治疗的关键在于进一步抑制病毒的复制，避免疾病发展。在乙型肝炎抗病毒治疗过程中，采用实时荧光PCR技术评估疗效，有利于综合判断治疗效果。此外，HBV-DNA定量检测结果可为联合用药、用药时间和用药剂量提供准确数据和支持。在HBV-DNA检验中，实时荧光PCR技术可将病毒复制活跃度、机体免疫应答水平反映出来，以便为临床检测提供依据，增强患者的治疗信心，改善治疗效果和患者依从性。实时荧光PCR技术较ELISA效果显著，可为医生提供更精准的检测数据，为乙型肝炎准确诊断提供数据支持。与此同时，通过对HBV-DNA含量的准确和定量分析，可根据检测结果对患者病情严重程度进行综合评估与分析，为预后治疗提供依据，改善预后。林艳等[12]认为，在HBV血清学检验中应用化学发光免疫分析技术的效果优于ELISA，可以显著提高乙型肝炎病毒阳性检出率和临床疗效预测价值，为预后治疗提供科学依据，这一研究结果与本研究结果相似。但此研究结果受研究时间短、样本量少等因素的影响，结果存在偏倚，在今后的研究中需加大样本量，延长研究时间，进一步深入探究实时荧光PCR技术的应用价值，为临床提供可靠依据。

综上所述，在HBV-DNA检测中，实时荧光PCR技术具有一定的诊断价值，其检测的准确度、灵敏度和特异度较高，并且在HBV-DNA定量检测中可准确评估患者的病情严重程度，为预后治疗提供参考。

参考文献

[1] 芦晶，商永超，史晶晶，等.利什曼原虫实时荧光定量PCR方法建立与应用[J].中国卫生检验杂志，2022，32（10）：1158-1161.

[2] 吴劲璋，覃丽娜.探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值[J].黑龙江医药，2023，36（5）：1174-1176.

[3] 王芳芳.实时荧光PCR检验用于乙肝病毒DNA检测的临床价值[J].中外女性健康研究，2022（21）：191-192.

[4] 谢金花.化学发光法与酶联免疫法在乙肝病毒血清学检验中的临床对比研究[J].基层医学论坛，2024，28（10）：105-107.

[5] 李书轻，刘丹，王亚，等.实时荧光定量聚合酶链反应对乙型肝炎病毒DNA的检验效果[J].实用检验医师杂志，2023，15（2）：159-162.

[6] 张刚.酶联免疫吸附法与RT-PCR法对血液标本内乙肝病毒的检验价值比较[J].云南医药，2021，42（2）：179-181.

[7] 岳庆阳.酶联免疫吸附法与光激化学发光法检测乙肝病毒的临床价值对比[J].中国现代药物应用，2022，16（6）：66-68.

[8] 吴福斌，李国栋.化学发光免疫法和酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒血清学检验中的应用效果[J].大医生，2021，6（5）：123-124.

[9] 凡俊丽.CLIA法与实时荧光定量PCR技术在乙肝患者中的应用价值[J].医药论坛杂志，2021，42（4）：108-111.

[10] 许娇.FQ-PCR和ELISA联合检测用于乙型肝炎的临床价值[J].中国医药指南，2021，19（2）：119-121.

[11] 孟磊俊，于方圆，王洁，等.血浆和外周血单个核细胞中EBV DNA载量在儿童EBV感染相关疾病中的临床意义[J].中华预防医学杂志，2021，55（9）：1083-1088.

[12] 林艳，周鹏，付安.化学发光免疫分析技术与酶联免疫吸附检验在乙肝病毒血清学检验中的检测效果[J].当代医学，2023，29（2）：151-153.

（编辑：肖宇琦）