重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗免疫肉鸭抗体水平监测

摘要：本试验通过对重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗在肉鸭上接种后产生抗体效价情况的研究，来评价重组禽流感病毒三价灭活疫苗对肉鸭预防高致病性禽流感疫病的效果。试验将90只21日龄健康肉鸭随机分成三组，设一免组、二免组和对照组，分别接种1～2次疫苗，检测免疫前和免疫后21 d、28 d、60 d鸭血清中特异性抗体水平，评估重组禽流感病毒三价灭活疫苗的免疫效果。结果显示：21日龄时母源抗体水平低于保护值，首免后抗体水平逐渐升高，且在免疫后21 d基本达到峰值，二免的抗体水平较一免升高速度更快且维持时间更长。本研究为制定和优化禽流感免疫程序提供依据。

关键词：禽流感；肉鸭；抗体；抗体效价

禽流感在中国被列为A类疫病[1]，该病由A型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起[2]。当前，高致病性禽流感属于禽类强制免疫病种，接种H5和H7亚型的高致病性禽流感疫苗是有效预防和控制禽流感的措施之一[3-4]。

为探究重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的免疫效果，本研究分别在21日龄（一免）、42日龄（二免）对不同组别的试验鸭免疫重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗，并在一免日、一免后21 d、一免后28 d以及一免后60 d分别采集血清样本，检测H5型（Re-13株+Re-14株）和H7型（Re-4株）禽流感抗体水平，观察疫苗的临床效果，以期制订更合理的免疫程序，为禽流感综合防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1试剂

重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N6 H5-Re 13株+H5N8 H5-Re 14株+H7N9 H7-Re 4株）来自肇庆大华农生物药品有限公司。

1.1.2 试验动物及

21日龄肉鸭90只。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组

试验肉鸭随机分成 3 组，分别为对照组、一免组、二免组，每组30只。根据农业农村部的推荐，一免组、二免组在试验肉鸭21日龄时皮下注射免疫重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗，二免组在42日龄时进行二免，首免剂量为0.5 mL/只，二免为1.0 mL/只，对照组不免疫。各组试验用鸭均在相同条件下饲养。

1.2.2 采样方案

不同组别试验肉鸭分别在21日龄（一免日）、42日龄（一免后21 d）、49日龄（一免后28 d）以及71日龄（一免后60 d）随机抽取15只，每只翅静脉采血2～3 mL，分离血清后放置于-20 ℃保存备用。

1.2.3 检测方法

血清样品应用血凝试验（Hemagglutination test，HA）和血凝抑制试验（Hemagglutination inhibition test，HI）进行H5亚型禽流感病毒抗体和 H7N9 亚型流感病毒抗体检测，HI≥4 log2判为免疫合格。

2 结果与分析

2.1 H5-Re13株疫苗检测结果与分析

结果（图一）显示，在21、42（一免后21 d）、49（一免后28 d）以及71日龄（一免后60 d），免疫组试验肉鸭禽流感H5-Re13平均抗体水平逐渐升高。其中，一免组各日龄的抗体滴度为3.47 log2、4.87 log2、5.40 log2、5.00 log2，二免组各日龄的抗体滴度为4.40 log2、6.13 log2、6.53 log2、5.87 log2，对照组的抗体滴度在不同日龄均低于保护临界值（4 log2）。21日龄时对照组和一免组的抗体合格率分别为46.7 %、66.6 %，低于国家要求的70 %以上。

2.2 H5-Re14株疫苗检测结果与分析

结果（图二）显示，AIV H5-Re14的抗体水平整体呈逐渐上升趋势，21日龄时，随着母源抗体水平下降，三个组的H5-Re14抗体水平均低于保护临界值。二免组的整体抗体水平高于一免组。其中，一免组各日龄的抗体滴度为3.53 log2、4.80 log2、5.33 log2、4.80 log2，二免组的抗体滴度为3.87 log2、6.33 log2、6.80 log2、5.93 log2，对照组的抗体水平均低于临界保护值。21日龄时抗体合格率分别为40 %、53.3 %和60 %，其他日龄抗体合格率除对照外均符合国家要求。

2.3 H7-Re4株疫苗检测结果与分析

结果（图三）显示，AIV H7-Re4在21日龄时抗体水平较高，二免后抗体效价逐渐升高。其中，一免组各日龄的抗体滴度为5.93 log2、4.13 log2、4.67 log2、5.40 log2，二免组的抗体滴度分别为6 log2、6.33 log2、6 log2、6.47 log2，对照组的抗体水平均低于临界保护值。抗体合格率在不同日龄均符合国家要求的70 %以上。

3 讨论

3.1 母源抗体的对免疫效果的影响

母源抗体的高低与疫苗免疫后的抗体效价的变化密切相关[5]，其对不同病毒的影响有所区别，对于禽流感而言，母源抗体水平越高，免疫后抗体效价下降幅度和持续时间越长，中和抗体效价上升越慢[6]。在本研究中，21日龄时禽流感H5母源抗体平均水平低于4 log2，免疫重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗后抗体水平持续上升并且在免疫后的21 d基本达到峰值；而禽流感H7的母源抗体水平在21日龄时仍处于较高水平，这可能也是导致后续免疫抗体水平升高不显著的原因之一。

3.2 免疫次数的选择

免疫程序的选择和优化对于禽流感的防控至关重要。本试验中选择21日龄进行首免，一免产生的抗体效价虽然能够有效保护鸭群，但是整体的抗体效价水平不高，若是6周龄左右出栏的肉鸭免疫一次即可，对于饲养周期较长的种鸭，可在一免后3～4周后进行二免，二免可以更快速提升鸭群的抗体效价，使鸭群的抗体效价在更长时间段保持在一个较高水平，能够更有效的保护鸭群，后期仍要重视抗体水平监测，及时补免。

3.3 加强饲养管理

牢固树立养重于防，防重于治的观念，做好日常的饲养管理。在本研究中发现，出现极个别试验鸭抗体效价不合格，可能与该鸭自身体质有关，也可能是对不良环境产生了应激反应引发，使得身体出现不适状况。饲养人员应在免疫后及时为鸭群提供所需摄入的营养成分，如维生素、蛋白质、微量元素等，缺乏相应的营养成分，可能会导致抗体合成受阻，造成免疫功能低下，最终导致免疫失败[7]。

参考文献

[1] XU H，ZHU S，GOVINDEN R，et al.Multiple Vaccines and Strategies for Pandemic Preparedness of Avian Influenza Virus [J].Viruses，2023，15（8）.

[2] 石瑜，王芳蕊，袁雪涛，杨爱华.近年高致病性禽流感流行特点及新型禽流感疫苗在天津地区的应用 [J].上海畜牧兽医通讯，2023，03.

[3] LEE D H，CRIADO M F，SWAYNE D E.Pathobiological Origins and Evolutionary History of Highly Pathogenic Avian Influenza Viruses [J].Cold Spring Harb Perspect Med，2021，11（2）.

[4] 陈建豪，买吾兰·孜克牙，杨夷平，等.重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗免疫抗体消长规律研究与应用.家禽科学.2023，45（04）.

[5] 蒋玲艳，彭健波，张在，等.母源抗体对禽流感-新城疫疫苗免疫后抗体效价的影响规律研究 [J].家禽科学，2024，46（09）.

[6] 孙艺学，丛彦龙，李佳新，等.H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的免疫效果 [J].中国兽医学报，2023，43（07）.

[7] 刘刚.重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的樱桃谷肉鸭免疫优化试验[J].中国动物检疫，2020，37（12）：124-127，140.