邢台地区蛋鸡养殖场中禽白血病病毒的检测与分析

摘要：为了了解邢台地区不同蛋鸡养殖场中禽白血病病毒（ALV）感染情况及禽白血病病亚群的流行情况。本试验于2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪（雏鸡）及肛拭子病料组织检测样本共计1 244份，采用酶联免疫吸附试验（EILSA）检测样品中禽白血病病毒感染情况及亚群的流行情况。结果显示，不同蛋鸡养殖场中的ALV p27抗原总阳性率分别为20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清样品中的ALV p27抗原阳性率均高于血清和胎粪，且呈现逐年下降的趋势，ALV p27抗原阳性样本中分别检出A/B亚群、J亚群、E亚群3种亚群，以ALV -J亚群流行为主，ALV-E亚群检测率呈现逐年升高的趋势。为进一步研究蛋鸡养殖场中ALV流行病调查与净化提供参考依据。

关键词：蛋鸡；禽白血病病毒；p27抗原；酶联免疫吸附试验（EILSA）

禽白血病（avian leukosis，AL）是危害禽类养殖业主要的病毒性疾病之一，该病主要由禽白血病不同亚群病毒（avian leukosis virus，ALV）引起禽类的禽骨髓细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、成髓细胞性白血病和成红细胞性白血病等多种肿瘤疾病的总称[1]。禽白血病主要的传染源是病鸡和带毒鸡，尤其是带毒鸡不表现明显临床症状容易被忽视，同时该病可垂直传播，也是导致该病在我国养殖场流行的主要因素之一，临床以引起禽类肿瘤疾病、免疫抑制及生产性能下降等为常见，严重者可以导致死亡，严重危害我国养鸡业发展[2-4]。ALV根据感染宿主范围、结构抗原差异性及囊膜特性可以分为11个亚群（A、B、C、D、J 、K、E、F、G、H 和 I），我国养禽业以ALV-A、B 和 J 为主，其中ALV-J 在我国各地区不同类型种鸡群中的流行最为严重，鸡群感染ALV-J日益增加并形成地区性流行[5-7]。因此，对鸡群中ALV-J净化具有重要的意义。为进一步分析ALV在邢台地区不同蛋鸡养殖场中感染情况和亚群的流行情况，本研究针对邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡中的ALV-J进行了检测和分析其亚群的流行情况，为进一步研究蛋鸡养殖场中ALV-J流行病调查与净化提供参考依据。

1 材料与方法

1.1病料来源

2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪（雏鸡）及肛拭子病料检测样本共计1 244份，其中2022年采集的病料组织样本456份，2023年采集的病料组织检测样本478份，2024年1月—3月份采集病料组织检测样本310份。

1.2 主要试剂

禽白血病P27抗原ELISA检测试剂盒、ALV亚群（A、B、C、D、E、J）ELISA检测试剂盒，均购自北京天之泰生物科技有限公司；样品采集管、采血针、采血管，均购石家庄丰悦生生物科技有限公司。

1.3 病料组织样品的处理

将采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的病料检测样本共计1 244进行处理，对采集血液离心（2 500 r/min，5 min）制备血浆样本，4 ℃保存备检；蛋清样本（500倍稀释）和胎粪样本（PBS处理）等，在-80 ℃条件下反复冻融3次后备检，将采集的病料组织样本进行编号，分装及在-80 ℃低温冰箱中保存备用。

1.4 ALVp27抗原的ELISA检测

取1.3中处理好的肛拭子、血清、蛋清及胎粪病理组织样本，参照ALVp 27抗原ELISA检测试剂盒的说明书对上述样品检测结果判定，分析邢台地区不同蛋鸡养殖场中蛋鸡ALV的阳性率，阳性率计算公式如下，阳性率=检出阳性样本/检查样本总数×100%。

1.5 ALV亚群检测

取1.4中ALVp 27抗原ELISA检测阳性的样品，按照EILSA检测ALV亚群（A、B、C、D、E、J）试剂盒说明书对ALV亚群进行检测，并参照试剂盒说明书进行结果判定，并分析的邢台地区不同蛋鸡养殖场中蛋鸡ALV亚群携带情况。

2 结果

2.1 ALV-p27抗原ELISA检测结果

2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪（雏鸡）及肛拭子病料检测样本共计1 244份，采用参照ALVp 27抗原ELISA检测试剂盒EILSA 进行样品中ALV p27抗原检测。结果由表2可知，2022年1月—2024年3月不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的ALV p27抗原总阳性率分别为20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清检测样品中的ALV p27抗原阳性率均高于血清和胎粪，且呈现逐年下降的趋势。

2.2 ALV亚群的检测结果

2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪（雏鸡）及肛拭子病料检测样本中分别检测出95份、70份、44份ALV p27抗原阳性样品，分别对ALV p27抗原阳性样品进行ALV亚群的测定，并统计在（肛拭子、血清、蛋清及胎粪）样品中的分布情况。 结果由表3可知，2022年1月-2024年3月邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡中ALV亚群流行情况有A/B亚群、J亚群、E亚群3个亚群，以ALV -J亚群流行为主，经过统计2022年1月-2024年3月邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡中ALV-E亚群检测率出现逐年升高的趋势。

3 讨论

禽白血病（ALV）是一种危害养禽业免疫抑制性传染病，该病原具有11个亚群，其中J 亚群对禽类的致病力最强其威胁最大，ALV-J 首次在英国发现的新型外源性病毒，该病毒初期主要感染肉用型种鸡，随着养鸡业的发展蛋用型种鸡感染率也呈现日趋升高，甚至造成地区性流行[8-9]。近几年，国内关于地方品种鸡感染ALV-J报道逐渐增多。ALV-J对肉用、蛋用型鸡及其他相关品种的鸡均具有较强的致病性和传染性，对养鸡业危害较大[2]。因此，对不同品种的种鸡进行ALV-J净化，对减少禽白血病的垂直传播具有重要的意义。本试验研究表明，2022年1月—2024年3月不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的ALV p27抗原总阳性率分别为20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清检测样品中的ALV p27抗原阳性率均高于血清和胎粪，且呈现逐年下降的趋势。说明该地区规模化蛋鸡场中存在ALV流行情况，应该对蛋鸡进行ALV检测并进行淘汰阳性蛋鸡，建立有效的综合防控措施，进行有效的综合防控。国内相关研究表明在蛋鸡场中以ALV以J亚群流行比较多[10]，为主，本试验通对ALV p27抗原阳性样本进行ALV亚群的检测，共检测出 3种亚群，以ALV -J亚群流行为主，与上述报道的一致。相关研究表明ALV-E亚群一般属于内源性感染，但是在蛋鸡也存在一定的致病性[11-12]，但是同时检测出ALV-E亚群，呈现逐年升高的趋势，应该引起重视，在蛋鸡养殖过程中应该对ALV-E进行检测与净化，淘汰阳性的鸡群。因此，禽白血病目前没有有效的疫苗进行预防，在蛋鸡养殖过程中应该进行定期检测，尤其是种鸡的检测，淘汰阳性种鸡，净化种群。■

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