山东滨州羊布鲁氏菌的实验室检测及防治措施

摘要：对滨州市6家有规模的养殖场采集羊耳静脉血离心血清进行试剂检测，对滨州羊布鲁氏菌病的防控提供了有力支持。随着抗生素的滥用和耐药菌株的出现，动物和人的健康也深受其害。布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的，羊、牛、猪、人等均可感染。可引起怀孕母畜死胎或流产、公畜睾丸炎。导致人间歇性发热、失眠、全身无力、肌肉酸疼、颈腹部淋巴结肿大，睾丸肿大。可导致女性发生卵巢炎、乳腺炎、子宫内膜炎、孕妇发生流产。

关键词：羊；布鲁氏菌；实验室检测；防治措施

1 材料与方法

1.1 调查内容

采集羊血清样品进行布鲁氏菌病检测。

1.2 虎红平板凝集试验

虎红平板凝集实验的原理是用已知的抗原来检测液体中未知的抗体，抗原抗体在体外发生特异性结合呈现可见的凝集反应。具体步骤：将采取的血液用离心机4 000 r/min离心5 min，用移液抢加25 μL被检血清于洁净玻片上，虎红抗原试剂用前摇匀，然后加入25 μL 的虎红平板抗原，用棉签充分摇匀，在5 min内判定结果。结果判定标准：呈现均匀粉红色，没有凝集块，为阴性（图1），有明显的凝集块现象，为阳性（图2）。

1.3试管凝集试验

1）稀释被检血清

稀释液配制：用石炭酸和氯化钠溶液配制成0.5%石炭酸生理盐水。

①每份被检血清用4支试管，标记编号，第1管加入1.15mL稀释液，在2～4管分别加入0.5 mL稀释液。

②从第1管中吸取0.5 mL加入第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5 mL加入第3管中，如此倍比稀释到第4管，从第4管中吸取0.5 mL 弃去，稀释完毕。

③稀释完毕后从第1管至第4管的血清稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1：50、1∶100。

2）反应

试管充分振荡后，放置于37 ℃恒温培养箱反应20 h，出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价，血清凝集效价在1∶50以上为阳性[1]。

1.4 免疫胶体金法

样品稀释液，10～20 min内观察结果，20 min后检验结果无效。

1）阳性：在T（检测线）和C（质控线）各出现一条红色线。

2）阴性：在T（检测线）出现一条红色线，C（质控线）不显色。

3）无效：在T（检测线）和C（质控线）都不显色。

2 结果分析

虎红平板试验检测出20份阳性样品；用胶体金法检测出阳性18份；符合率90%。虎红平板阴性试验检测出的80份阴性样品，胶体金法检测出80份阴性，符合率100%。试管凝集法实验检出的18份阳性样品，胶体金法检出阳性18份，符合率100%。

3 三种检验方法区别

通过对三种试验方法比较，胶体金法和试管凝集结果相同，虎红平板实验和胶体金法结果接近。虎红平板实验操作简单而且价格便宜、能快速检测，适用于大群体的检疫。试管凝集实验是较常用的血清学诊断方法之一，其敏感性、特异性高，但操作步骤烦琐。并且试管凝集实验和虎红平板实验不能现场检测，而胶体金法可以现场检测，节省了时间，提高了检测效率。并且具有良好的特异性、稳定性、敏感性等优点[2]。

4 细菌微生物检验

4.1 细菌分离培养

抽取虎红平板试验和胶体金法试验都呈现阳性的血液15 mL血液培养瓶在血培养分析仪中培养，血培养分析仪报警表示血液中有细菌存在，将血液接种在血琼脂平板放于CO2培养箱中培养48 h，可形成灰色圆形、微小凸起的光滑型菌落。

4.2 革兰染色及油镜镜检

取一滴生理盐水于洁净载玻片上，然后取单个菌落于载玻片涂抹成约蚕豆大菌膜，用手试热烤干并固定，滴加结晶紫染色一分钟水洗，卢戈氏碘媒染一分钟水洗，95%乙醇脱色30 s水洗，稀释复红复染一分钟水洗[3]，干燥后镜检，布氏杆菌呈现红色革兰阴性球杆菌，其他细菌呈现蓝色。

5 预防措施

1）疫苗接种使用布鲁氏菌活疫苗进行预防免疫，如S2株、M5株或BA0711株，可通过注射或口服方式进行免疫接种，提高羊群的整体免疫力。免疫计划应当根据疫情风险、地区政策和羊群状况制定，确保免疫密度和持续时间的有效性[4]。

2）检疫与监测定期对羊群进行布鲁氏菌病的检疫检查，发现阳性个体后及时剔除。引入羊群需确保来自无疫区，且经过严格的检疫和隔离观察才能混入羊群中。

3）饲养管理加强饲养环境卫生，定期消毒，避免水源和饲料受到污染。规范挤奶流程，严禁食用未经巴氏消毒的生鲜奶产品。减少人员与病羊接触，若必须接触则需采取防护措施。

6 治疗措施

目前布鲁氏菌病在羊群中并无特效治疗方法，一旦羊只感染，因其难以根治且有较强的传染性，常常采取淘汰和扑杀病羊的方式，而非药物治疗。在某些情况下，对于珍贵品种或特殊情况下的个体，可尝试使用抗生素治疗，但疗效有限且须遵守严格的法规要求。

7 抗菌疗法

如果确有必要进行治疗，可使用的抗生素包括多西环素、庆大霉素、链霉素等，但需遵照兽医指导，并配合监控药物敏感性测试的结果，确保治疗的有效性。抗生素治疗主要用于减少体内布鲁氏菌的数量，但不能保证彻底清除，也无法防止再次感染或消除病羊的传染性[5]。

8 总结

综上所述，对于羊布鲁氏菌病，重点在于预防为主，通过疫苗接种、检疫监测、改善饲养环境和规范管理等手段，降低感染的发生和传播风险。对于已感染的羊只，主要依靠扑杀和淘汰策略，辅以必要时的抗生素治疗，并严格按照政府和兽医部门的要求执行各项防控措施。■

参考文献：

[1] 张新华.一起羊布鲁氏菌病的诊断及防控措施[J].福建畜牧兽医，2015，37（6）：66-67.

[2] 吴清民.动物布鲁氏菌病防控技术研究对策[J].兽医导刊，2010（3）：21-23.

[3] 何彦春，李克生，贺奋义，等.胶体金法和平板及试管凝集检测羊布鲁氏菌病的比较[J].畜牧兽医杂志，2016，35（5）：100-101.

[4] 郑风英.山东沾化多个中型养羊场布鲁杆菌的分离鉴定与耐药性分析[J].黑龙江畜牧兽医，2014（12）：99-100.

[5] 王俊江，张岚.当前奶牛布氏杆菌病防控工作存在的问题及对策[J].中国畜牧兽医，2007（3）：109.