柴芍口服液对肉鸡霉变饲料造成肝损伤的保护效果研究

摘要：为了研究新兽药柴芍口服液对肉鸡肝脏保护的效果，试验采用霉变饲料建立肉鸡肝损伤模型，分别用不同剂量的柴芍口服液对肝损伤肉鸡进行治疗，观察用药后的临床表现，计算总有效率，测定各组肉鸡血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、胆碱酯酶（CHE）活性及增重情况。结果表明：霉变的饲料可以造成肉鸡肝脏损伤，死淘率增加，血清中AST、ALT、ALP活性极显著升高（P<0.01）， CHE活性极显著降低（P<0.01）；在饮水中添加2.5 mL/L的柴芍口服液，能够降低霉变饲料造成的死淘率，显著抑制霉变饲料造成的血清中AST、ALT、ALP活性的升高（P<0.05），显著提高血清CHE的活性（P<0.05），促进肝损伤模型肉鸡的增重（P<0.05）。说明柴芍口服液对霉变饲料造成的肉鸡肝损伤具有很好的治疗效果。

关键词：柴芍口服液；肉鸡；霉变饲料；肝损伤；生化指标

柴芍口服液是在张仲景的《伤寒论》中的传统方剂四逆散的基础上，经提取等工艺制得的口服溶液剂，由柴胡、白芍、枳实、甘草组成，柴胡疏解肝郁，使阳气透达肌表，用为君药；芍药养血敛阴，与柴胡相配，一升一敛，使郁热透解而不伤阴，为臣药；佐以枳实行气散结，以增强疏畅气机之效；炙甘草缓急和中，又能调和诸药为使，共同起到透解郁热、调和肝脾的作用。张会梅等[1]考察了柴芍口服液对CCl4造成鸡肝损伤的防治效果及推荐用量，发现饮水中添加0.5%、1%的柴芍口服液，能明显缓解CCl4对实验鸡的肝损伤。根据文献报道高水平的霉菌毒素含量，家禽会有不同程度的霉菌毒素中毒症状[2-4]，因此，本研究通过饲喂霉变饲料建立肉鸡肝损伤模型，在模型肉鸡的饮水中添加不同剂量的柴芍口服液，评估不同剂量的柴芍口服液对肉鸡因霉变饲料造成肝损伤的保护效果。

1 材料与方法

1）药品与试剂：柴芍口服液，每1 mL相当于原生药1 g，生产批号20200702，由潍坊诺达药业有限公司生产。肝胆颗粒，每1 g相当于原生药3 g，生产批号20200401，由菏泽普恩药业有限公司生产。试验用饲料为雏鸡全价配合饲料，购自青州通慧饲料有限公司。黄曲霉毒素B1（AFB1） ELISA试剂盒、T-2毒素（trichothecenes，T-2）ELISA试剂盒、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）ELISA试剂盒，均购自上海沪峥生物科技有限公司。谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）与胆碱酯酶（CHE）活性检测试剂盒，均购自南京建成生物技术有限公司。

2）主要仪器：BK-200全自动生化分析仪，山东博科生物产业有限公司。电子天平，北京赛多利斯仪器设备有限公司。

3）试验动物：1日龄AA+商品代健康雌性雏鸡，体重（45±3）g，350只，购自山东益生种禽有限公司。

4）试验方法

①自制霉变饲料。将肉鸡全价饲料50 kg，放置在自建固体发酵间内，控制湿度在60%～70%之间，温度在30～35 ℃之间，进行高温高湿处理5 d[5]，使用前取样，采用ELISA试剂盒检测霉菌毒素含量。

②霉变饲料造成肉鸡肝损伤模型的建立。1日龄AA+肉雏鸡，饲养至8日龄，随机选择320只健康鸡分为2个组，A组40只，B组280只，A组为对照组，饲喂全价饲料，B组为模型组，饲喂自制的霉变饲料，连续数日，至B组累计死淘达5%以上时换用正常饲料。从A组和B组中分别随机取5只存活试验鸡，翅下静脉采血，分离血清，检测血清中AST、ALT、ALP、CHE活性水平；比较对照组与模型组鸡群的精神状况、采食量、死淘率以及剖检肝脏变化，综合判断试验鸡群是否出现霉变饲料造成的肝损伤问题。

③分组与给药。待B组（280只）的鸡群出现霉菌毒素肝损伤的表现，且死亡率超过5%时，随机从B组鸡群中选择有临床症状，且体重相近的试验鸡125只，随机分为5组，每组25只，分别为第2组模型对照组、第3组柴芍口服液低剂量组、第4组柴芍口服液中剂量组、第5组柴芍口服液高剂量组、第6组肝胆颗粒药物对照组，另从A组中挑选体重相近的健康肉鸡25只，将其编为第1组空白对照组。在分组完成后，第1、2组饮水中不添加药物，在第3～5组饮水中分别按照1、2.5和5 mL/L的剂量添加柴芍口服液，按照全天饮水量计算用量，集中添加到3～4 h的饮水中，并给第6组试验鸡饮水中按照每升水添加1 g对照药物肝胆颗粒。试验期共7 d，试验期间所有试验鸡饲喂正常全价饲料。

④临床表现及体重变化。试验期间观察记录肉鸡采食、饮水、精神状况、粪便情况，治疗试验开始前后分别逐只称重。

⑤血液生化指标变化。在分组治疗7 d后，每组试验鸡随机取5只，翅下静脉采血，分离血清，采用试剂盒检测血清中AST、ALT、ALP、CHE活性水平。

⑥解剖病理变化。试验结束后，每组随机取5只进行解剖，观察试验鸡肝脏病变情况。

⑦总有效率计算。在试验结束时，观察试验鸡临床表现，并统计各组肉鸡的死亡率、治愈率、有效率、无效率，且经卡方检验统计总有效率[6]。死亡率：病死鸡剖解出现典型霉变饲料肝损伤，主见：肝边缘变薄，坏死，表面见有褐紫色或淡黄色、灰黄色坏死灶等，并根据死亡数量计算死亡率。治愈率：发病肉鸡经给药治疗后精神、采食量、粪便等均恢复正常属治愈，并根据治愈数量计算治愈率。有效率：经给药治疗后，相关临床症状有明显减轻，仅表现出精神稍差，采食、饮水基本恢复正常，即判断为有效，并根据其数量计算有效率。无效率：在试验期间，经给药治疗后，其临床症状未见明显改善，主要表现：精神不振、羽毛松乱、拉稀粪，判断为无效，并根据其数量计算无效率。总有效率=治愈率+有效率，在卡方检验中采用总有效率进行检验（用X2与P值表示）。

⑧统计分析。采用SPSS 22.0统计分析软件，对试验数据进行统计分析与处理，总有效率进行卡方检验分析，对各组肉鸡血清中AST、ALT、ALP、CHE活性水平、肉鸡增重情况进行方差分析， P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2 结果

2.1 霉变饲料中毒性肝损伤模型结果

1）霉变饲料中相关毒素含量检测。将霉变的饲料干燥后，混合均匀，取少量，采用AFB1、T-2、ZEN的ELISA试剂盒检测含量（见表1），结果显示，试验用霉变饲料中AFB1、ZEN、T-2三种菌毒素含量均超标。其中，AFB1含量82.78 μ g/kg，超过饲料中允许的最高限量8倍多；ZEN含量为956.51 μ g/kg，接近超过饲料中最高限量的1倍；T-2毒素含量为1 082.65 μ g/kg，超过饲料中允许的最高限量的1倍多。

2）肉鸡霉变饲料造成肝损伤模型的建立。在建模过程中，A组肉鸡均表现健康。B组喂霉变饲料4 d后，有少数肉鸡精神状况变差、采食大幅下降；5 d后出现5只肉鸡死亡；7 d后出现较明显的临床症状，主要表现：精神沉郁、呆立，腹泻，采食量与饮水量下降，B组累计死亡21只。分别从A组和B组h0h/EWW5QfV/xvNbZigf4m4dsfoAjaedTZejMH09jKo=挑选存活的试验鸡5只，解剖观察对比肝脏变化（图1、2），可见肝损伤模型肉鸡的肝脏边缘变薄，发黄，表面有出血点。结果表明，肝损伤模型组的肉鸡肝脏符合霉变饲料造成肉鸡肝损伤的特征。在饲喂霉变饲料的第7天，从A、B组分别随机挑选5只，采血检测相关血液生化指标，结果见表2，B组造模肉鸡AST、ALT、ALP活性均极显著高于空白对照组A组（P<0.01），且B组肉鸡CHE活性极显著低于A组（P<0.01）。试验结果表明，建模组B组试验鸡肝脏功能受损明显，符合霉变饲料造成肉鸡肝损伤的特征。

2.2 柴芍口服液对肝损伤肉鸡的治疗效果

1）柴芍口服液对肝损伤肉鸡临床症状的总有效率的影响。肉鸡在停止饲喂霉变饲料后，其临床症状均有所好转，经不同剂量柴芍口服液、肝胆颗粒治疗的试验鸡临床症状整体改善情况优于模型对照组。总有效率试验结果显示（见表3），第3～6组试验鸡死亡率均明显低于第2组，且第3～6组试验鸡的治愈率均明显高于第2组。经卡方检验，第3、6组总有效率高于第2组，但是差异不显著，第4、5组总有效率显著高于第2组 ，差异显著（P<0.05）。结果表明，柴芍口服液能显著改善试验鸡霉变饲料造成肝损伤的临床症状，降低死亡率，在每升饮水中分别添加2.5 和5 mL柴芍口服液时治疗效果最明显，优于对照药物肝胆颗粒。

2）柴芍口服液对肝损伤肉鸡肝脏剖解变化的影响。解剖发现：空白对照组为健康的肉鸡，肝脏呈棕红色，富有弹性（图3）；模型对照组的肉鸡肝脏呈淡黄色，表面大量出血点，易碎（图4）；柴芍口服液低剂量组的肉鸡肝脏呈土黄色，肿大（图5）；柴芍口服液中剂量组的肉鸡肝脏呈浅黄色，少量出血点（图6）；柴芍口服液高剂量组的肉鸡肝脏呈暗红色，略带少量黄色病变（图7）；肝胆颗粒组的肉鸡肝脏呈淡黄色，少量出血点（图8）。结果表明，柴芍口服液能够降低霉变饲料造成的鸡肝脏的损伤，减轻肝脏出血、发黄等病变，在每升饮水中分别添加2.5 和5 mL柴芍口服液的效果最显著，且优于对照兽药肝胆颗粒。

3）柴芍口服液对肝损伤肉鸡血液生化指标的影响。试验结果显示（见表4），与空白阳性对照第2组比较，经药物治疗7 d的第3～6组试验肉鸡相关肝功能血液生化水平均显著提高，第3～6组试验鸡AST、ALT、ALP活性均明显低于第2组（P<0.05），第3～6组试验鸡CHE活性极显著高于空白对照第2组（P<0.05）。其中第4、5组试验鸡生化指标改善情况最佳，优于第3、6组，且第6组优于第3组。试验结果表明，柴芍口服液能显著改善霉变饲料造成的鸡肝功能相关血液生化指标，在每升饮水中分别添加2.5 和5 mL柴口服液的效果最显著，且优于对照兽药肝胆颗粒。

4）柴芍口服液对肝损伤的肉鸡增重的影响。试验结果显示（见表5），在治疗之前，第2～6组试验鸡体重无显著差异，对比试验结果可见，经药物治疗7天的第3～6组试验鸡体重均有显著改善，3～6组试验鸡体重显著高于第2组（P<0.05），但均显著低于空白对照第1组（P<0.05），第4、5组试验鸡体重改善情况最佳，优于第3、6组，且第5组优于第6组，第6组优于第3组。试验结果表明，柴芍口服液能显著改善霉菌毒素中毒造成的生长迟缓问题，增加试验鸡体重，在每升饮水中添加2.5 和5 mL的柴芍口服液时，效果最显著，优于对照兽药肝胆颗粒。

3 讨论

1）试验鸡中毒性肝损伤模型探讨。饲料及原料在生产、储存过程中不可避免发生霉变，特别是在降雨较多的季节，主要产生黄曲霉毒素B1（AFB1），其次是玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）、T-2毒素等，其检出率在70%以上，且有5%左右的样品相关毒素含量超过饲料卫生标准的要求[7]，危害严重。霉菌毒素特别是AFB1和T-2毒素对肝脏损伤较重，当毒素进入机体后，需要在肝脏等器官中进行代谢，解毒，损伤肝细胞[8]。ALT主要存在于肝细胞的胞质中，是肝损伤的一个很灵敏的指标，而AST广泛存在于机体组织中，因此，当ALT、AST这两种血清转氨酶活性同时升高，在一定程度上可体现肝细胞的损害程度，另外，血清ALP、CHE活性变化也可衡量肝功能的变化[9]。在本试验的试验鸡霉变饲料中毒性肝损伤的建模过程中，试验鸡血清AST、ALT、ALP 活性均显著上升（P<0.05），且血清CHE活性显著下降（P<0.05）。自制霉变饲料检测结果显示，AFB1、T-2、ZEN三种霉菌毒素均严重超标。再结合饲喂霉变饲料后，试验鸡群表现精神萎靡、羽毛蓬乱、缩头闭眼、呆立，采食量与饮水量显著下降，拉白色稀粪，生长速度下降，并出现死淘。解剖可见肝边缘变薄，坏死，表面有黄色、紫色的坏死灶及坏死点等病变。与王素芳等[10]报道的临床症状一致。因此，从临床表现、病理解剖、血清生化以及饲料霉菌毒素检测结果分析，采用霉变饲料建造的肉鸡肝损伤模型是成功的。

2）柴芍口服液对霉变饲料造成肉鸡肝损伤的治疗效果。柴芍口服液是四逆散的改进型产品，据研究四逆散对肝损伤具有保护作用，彭汉光等[11]研究表明，加味四逆散具有防治四氯化碳、D-氨基半乳糖所致急性肝损伤作用。王鹤[12]采用系统药理学的方法，阐述了四逆散80个活性成分与91个治疗靶点互相作用，直接或间接地通过相互作用的方式参与慢性肝炎的治疗。宋琳等[13]的研究表明四逆散可通过纠正脂代谢紊乱、改善胰岛素抵抗、保护肝细胞等途径，对非酒精性脂肪性肝炎发挥治疗作用。屈倩等[14]研究发现与四逆散相同组方的保肝汤对海南文昌鸡的霉菌中毒具有明显的临床疗效。柴芍口服液能显著改善霉变饲料导致肉鸡肝损伤的症状，降低肉鸡死亡率，在每升饮水中分别添加2.5 和5 mL柴芍口服液均能显著提高霉变饲料引起肝损伤治疗的有效率，柴芍口服液能显著降低试验鸡血清AST活性、ALT活性、ALP活性，并显著升高血清CHE活性，柴芍口服液能显著促进肉鸡生长，增加鸡体重。

3）综上所述，柴芍口服液在治疗霉变饲料导致的肉鸡肝损伤方面具有显著疗效，按照每升饮水中分别添加2.5 和5 mL的柴芍口服液，连续使用7 d，可达到治疗霉变饲料造成肝损伤的目的。■

参考文献：

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[2] 田莎，孙鑫东，宋泽和，等.吸附剂对饲喂含黄曲霉毒素B_1和T-2毒素饲粮肉鸡生长性能、器官指数、血清生化指标和抗氧化能力的影响[J].动物营养学报，2020（7）：3143-3153.

[3] 陈士华.霉菌毒素对家禽生产业的危害及解决对策[J].山东畜牧兽医，2014（10）：25-26.

[4] 张勇，王梦晨，董浩，等.霉变饲料对肉鸡生长性能、抗氧化性能及组织形态的影响[J].饲料研究，2021（12）：37-40.

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[7] 刘建高，厉学武，彭哲，等.2021年我国饲料原料中常见霉菌毒素污染情况调查[J/OL].中国家禽：1-6[2023-08-28].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/32.1222.S.20230809.1332.002.html

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[11] 彭汉光，戴春林，魏屏，等.加味四逆散保护肝损伤的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2000（11）：25-26..

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[13] 宋琳，陈策，李承潇，等.四逆散对非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝保护作用研究[J].河北中医药学报，2019（3）：1-4.

[14] 屈倩，唐光华，张诗薇，等.保肝汤治疗鸡霉菌毒素中毒的临床疗效试验[J].养禽与禽病防治，2020（4）：17-19.