海南10种市售灵芝水分及指标成分比较研究

【摘 要】 目的：研究海南常见的10种市售灵芝质量差异，为地方药材标准起草奠定基础，为进一步开发灵芝提供参考。方法：购买海南常见的10种市售灵芝共30批，分别进行外观性状描述，再参考中国药典（2020版）灵芝标准项下的检验方法，适当优化后，测定灵芝中的水分、三萜和甾醇含量，作为评价灵芝质量的主要指标。结果：方法精密度RSD为1.9%，低、中、高浓度的加标回收率分别为96.4%、95.2%、98.3%，测定灵芝供试品，有1批水分超过17.0%，有4批三萜及甾醇含量低于0.50%。结论：中国药典标准只收录了紫芝和赤芝，其他市售灵芝品种起草标准时可参考药典标准适当修改限度范围。政府应加强监管，逐步规范灵芝市场，修订完善地方药材质量标准，以便于进一步开发和利用灵芝资源。

【关键词】 市售灵芝；水分测定；三萜及甾醇；紫外分光光度法；香草醛冰醋酸显色法

【中图分类号】R286

【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2024）17-0043-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.17.zgmzmjyyzz202417010

Comparative on the Moisture Content and Indicator Components of Ten Kinds of Ganoderma Lucidum on Hainan Market

CHEN Siming¹ LUO Zongyu¹ ZHI Li¹ HUANG Cheng¹ CAI Rongling¹ WU Jiren^2*

1.Wuzhishan Branch of Hainan Provincial Food and Drug Inspection Institute， Wuzhishan 572299， China；2. Hainan Provincial Food Inspection and Testing Center， Haikou 572000， China

Abstract：Objective Study the quality differences of ten common commercially available Ganoderma lucidum in Hainan， laying the foundation for drafting local medicinal material standards and providing reference for further development of Ganoderma lucidum.Method Purchase 30 batches of ten common commercially available Ganoderma lucidum in Hainan， describe their appearance characteristics， and refer to the inspection methods under the Ganoderma lucidum standards in the Chinese Pharmacopoeia （2020 edition）. After appropriate optimization， determine the moisture， triterpenes， and sterols content in Ganoderma lucidum as the main indicators for evaluating the quality of Ganoderma lucidum.Result The precision RSD of the method was 1.9%， and the recovery rates for low， medium， and high concentrations were 96.4%， 95.2%， and 98.3%， respectively. When measuring the Ganoderma lucidum test sample， one batch had a moisture content exceeding 17.0%， and four batches had triterpenoid and sterol content below 0.50%.Conclusion The Chinese Pharmacopoeia only includes Zizhi and Chizhi. When drafting standards for other commercially available Ganoderma varieties， the limit range can be appropriately modified based on the pharmacopoeia standards. The government should strengthen supervision， gradually standardize the Ganoderma market， revise and improve local medicinal material quality standards， in order to further develop and utilize Ganoderma resources.

Key words：Commercially Available Ganoderma Lucidum; Moisture Measurement; Triterpenes and Sterols; UV Spectrophotometry；Vanillin Acetic Acid Colorimetric Method

灵芝属于贵重中药材，与人参齐名，在我国有两千多年的药用历史，在《列子》《神农本草经》《抱朴子·仙药》《新修本草》《本草纲目》等古籍中均有记载^［1-2］。2020年国家卫健委、国家市场总局联合发文将灵芝中的赤芝和紫芝列为食药同源物质进行试点。近年来，灵芝产业发展迅速，中国目前是全球灵芝的主要产地和消费市场，灵芝产量逐年增加，据统计，2022年我国灵芝产量为19.45万吨，国内灵芝市场规模达到215亿元人民币，未来几年还将保持平稳增长。在盛产灵芝的海南，几乎每个市县都有灵芝专卖店，各种各样的灵芝品种被当地群众广泛习用。初步统计，海南市售灵芝品种超过20种，除紫芝和赤芝被中国药典（2020年版一部）收载，其他品种灵芝没有质量标准或质量标准简单，不便于质量控制和市场监管。目前国内外关于灵芝研究的文献非常多，但往往集中在单一品种或活性成分研究，对于非正品的市售灵芝研究较少。本文参考中国药典（2020版）灵芝标准项下的检验方法，适当优化后，测定灵芝中的水分、三萜和甾醇含量。因为灵芝的活性成分很多，其中三萜和甾醇是公认的灵芝的最主要活性成分之一，具有降血压、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、调节免疫、保肝抗炎等药理作用^［3-5］。目前已从灵芝中分离出300多种三萜类物质和40多种甾醇类物质，三萜类物质主要有灵芝酸、灵芝醇、灵芝醛、灵芝内脂等^［6-8］。甾醇类物质主要是麦角甾醇^［9］，这些活性成分共同在在人体内发挥重要药理作用^［10-14］。三萜及甾醇含量已成为评价灵芝质量的重要指标之一^［15］。灵芝中的水分与灵芝加工过程有关，影响到灵芝的存贮有效期。通过比较研究可以确定不同品种市售灵芝适合的质量控制限度范围，为地方药材标准的起草提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 灵芝是喜温喜湿型真菌，海南的温湿度特别适宜灵芝生长，常年盛产灵芝，特别是雨季，生长很快。经过灵芝市场走访调研，确定了10种常见的市售灵芝作为重点研究对象，分别为赤芝、紫芝、灵芝王、竹灵芝、青芝、白灵芝、黄灵芝、薄树芝、黑灵芝、无柄赤芝，分3次采购了10种灵芝每种3批，合计30批。灵芝外观照片如图1所示。

赤芝：子实体为木栓质，外形呈伞状，菌柄圆柱形或类圆柱形，侧生，少偏生，长7～15 cm，直径0.5～1.5 cm，红褐色至紫褐色，有漆样光泽。菌盖呈肾形、半圆形或近圆形，短径2.5～5.5 cm，长径4.5～9 cm，厚0.5～1 cm。菌盖皮壳坚硬，菌盖边缘逐渐变薄（部分菌盖边缘有一白色至浅黄色环纹，为未成熟菌盖），红褐色至黑褐色，有漆样光泽，初生菌盖呈黄白色或淡棕黄色，渐变为红褐色，具环状棱纹和辐射状皱纹，边缘薄而常稍内卷。菌盖下菌肉灰白色至淡棕色。菌盖下表面黄白色至棕褐色。菌管灰棕色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味苦涩。

紫芝：子实体为木栓质，外形呈伞状，菌柄圆柱形或类圆柱形，侧生，长8～20 cm，直径0.6～2.0 cm，紫黑色至黑色，有漆样光泽。菌盖颜色为紫黑色至黑色，有漆样光泽，皮壳坚硬，外形为肾形、半圆形或近圆形，具环状棱纹和辐射状皱纹，菌盖边缘逐渐变薄，稍内卷，菌盖下表面黄白色至棕褐色。菌管棕褐色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。短径4.5～12.5 cm，长径16.5～19 cm，厚0.5～2.0 cm。气微香，味淡。

灵芝王：海南特产灵芝品种，外形呈伞状，菌盖木栓质，多类圆形，少肾型，菌盖极厚实，短径1.5～2.5 cm，长径1.5～3 cm，厚0.5～1.5 cm。菌盖皮壳坚硬，菌盖边缘厚且具环状层纹，边缘厚实，有光泽，颜色红褐色至紫褐色。菌盖下菌肉浅锈褐色至锈褐色。菌盖下表面黄白色至棕褐色。菌管棕色至深棕褐色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。菌柄细长，类圆柱形，侧生，少偏生，长10～22 cm，直径0.3～0.8 cm，有光泽呈紫黑色至黑色。气微香，味苦涩。

竹灵芝：子实体为木栓质，外形呈伞状。菌柄圆柱形或类圆柱形，侧生，长5～18 cm，直径0.3～0.9 cm，紫黑色至黑色，有漆样光泽。菌盖较薄，皮壳坚硬，呈肾形、半圆形或近圆形，短径1.5～3.5 cm，长径2.0～4.5 cm，厚0.1～0.8 cm。菌盖具环状棱纹和辐射状皱纹，多数菌盖边缘有一白色至浅黄色环纹，边缘逐渐变薄，常稍内卷，呈紫黑色至黑色，有漆样光泽，边缘薄而菌盖下表面白色至黄白色，菌肉深锈褐色。菌管灰白色至灰褐色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味微苦涩。

青芝：子实体为木栓质，菌盖较厚实，呈扇形或半圆形，无柄，短径5～20 cm，长径15～35 cm，厚1.5～3.5 cm。菌盖皮壳粗糙坚硬，呈浅褐色至深褐色，无光泽，具环状棱纹，菌盖下表面黄褐色至棕褐色，菌肉锈褐色。菌管棕褐色，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味苦涩。

白灵芝：子实体为木栓质，菌盖厚实，呈扇形或半圆形，无柄，短径11～25 cm，长径19～30 cm，厚2～5 cm。菌盖皮壳较松泡，呈白色或类白色，无光泽，无环纹。菌盖下表面黄白色至棕褐色，菌肉白色。菌管上部白色，下部棕褐色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微，嚼之软绵微苦。

黄灵芝：子实体为木栓质，菌盖很厚实，呈扇形或半圆形，无柄，短径9～15 cm，长径12～25 cm，厚8～20 cm。菌盖皮壳坚硬，黄褐色至黑褐色，无光泽，具环状棱纹，菌盖下表面深黄褐色至锈褐色。菌肉深黄褐色至锈褐色。菌管深黄褐色至锈褐色，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。无嗅，味淡。

薄树芝：子实体为木栓质，菌盖较薄，呈扇形或半圆形，无柄，短径6～25 cm，长径15～35 cm，厚0.5～2.0 cm。菌盖皮壳坚硬，皱缩，呈黑褐色，无光泽，具环状棱纹和纵皱纹。菌盖下表面深黄褐色至黑色，菌肉黄白色。菌管浅棕黄色至棕色、菌管短，木质样，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味淡。

黑灵芝：子实体为木栓质，外形呈伞状。菌柄圆柱形或类圆柱形，侧生，长4～10 cm，直径0.5～1.5 cm，紫黑色至黑色，有漆样光泽。菌盖呈肾形、半圆形或近圆形，短径4.0～12 cm，长径15～19 cm，厚0.5～2.0 cm。菌盖皮壳坚硬，菌盖边缘逐渐变薄，边缘薄而常稍内卷，呈紫黑色至黑色，有漆样光泽，具环状棱纹和辐射状皱纹。菌盖下表面黄白色至棕褐色，菌肉锈褐色。菌管棕褐色，如鸡肉丝状排列，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味淡。

无柄赤芝：子实体为木栓质，呈扇形或半圆形或肾形，菌盖较薄，无柄，短径7～20 cm，长径9～35 cm，厚0.5～2.5 cm。菌盖皮壳坚硬，红褐色至黑褐色，具漆样光泽，具环状棱纹和辐射状皱纹，菌盖下表面橙黄色至红褐色，菌肉棕黄色至棕褐色。菌管棕黄色至红褐色、菌管短，内有多数孢子，孢子细小，黄褐色。气微香，味苦涩。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试药 紫外分光光度计（型号：UV-2550；生产商：日本岛津公司）；电子天平（型号：XS204；生产企业：梅特勒-托利多国际有限公司）；多样品自动浓缩仪（型号：S60；生产商：力德生物科技上海有限公司）；电热恒温水浴锅（型号：HWS-26；生产商：上海一恒科学仪器有限公司）；超声仪（型号：GS-060A；生产商：GENENQ）；电热鼓风干燥箱（型号：DHG-9070A；生产商：上海一恒科学仪器有限公司）。

齐墩果酸（批号：110709-202109；含量：99.9%；来源：中检院）；甲醇（批号：R142452；含量：≥99.9%；来源：DIKMAPURE）；乙醇（批号：20230315；含量：≥95%；来源：福晨天津化学试剂有限公司）；冰醋酸（批号：20211228；含量：≥95%；来源：广东光华科技股份有限公司）；香草醛（批号：T20100624；含量：≥99.5%；来源：国药集团化学试剂有限公司）；高氯酸（批号：20100902；含量：70%～72%；来源：广州市化学试剂厂）；乙酸乙酯（天津市大茂化学试剂厂，批号：20200601；含量：≥99.5%）。

1.2.2 水分 参考2020版药典通则的水分测定方法^［16］，先将采购的30批灵芝分别进行粉碎，精密称取灵芝样品2 g平铺于干燥至恒重的扁型称量瓶中，控制厚度在1 cm以内，置热风干燥箱中105 ℃干燥5 h后，盖好瓶盖，转移到干燥器中，放冷30 min后精密称定，继续置热风干燥箱中105 ℃干燥1 h，放冷30 min后精密称定，直到连续两次的称重误差在5 mg以内，通过减失重量计算灵芝的含水量。结果见表2。

1.2.3 三萜及甾醇含量 先用香草醛冰醋酸显色法显色后参考2020版药典一部灵芝中三萜和甾醇测定方法^［16］使用紫外分光光度法测定。

供试品溶液的制备：取粉碎后的灵芝1 g/2 g/4 g（称取的重量根据预实验不同种类灵芝三萜及甾醇含量确定）精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇50 mL，先浸泡2 h，再超声处理（功率140 W，频率42 kHz）45 min，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用适量乙醇，分次洗涤滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的制备：精密称定齐墩果酸（CHO）对照品10.27 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇振摇溶解，并稀释至刻度，即得。

线性和范围：精密量取对照品溶液0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.50 mL，分别置15 mL具塞试管中，氮气吹干，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL，摇匀，在70 ℃水浴中加热15 min，立即置冰浴中冷却5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，摇匀，以相应试剂为空白，使用紫外-可见分光光度计，在546 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标得到标准曲线Y=9.5826X-0.0178，相关系数r=0.9997，线性范围2.05～20.54 μg·mL^-1。

方法精密度：称取同一批赤芝6份，每份2 g，按照“1.2.3”供试品溶液的制备方法，同法操作，再精密量取供试品溶液0.2 mL，置15 mL具塞试管中，照“1.2.3”线性和范围项下的方法，自“氮气吹干”起，同法操作，测定吸光度，再带入标曲计算含量，结果方法精密度，6份样品RSD为1.9%，能满足测定要求。

方法准确度：取含量较低的一批紫芝按照“1.2.3”供试品溶液的制备方法，同法操作，得到提取液，取9份，每份0.2 mL，分成3组，置15 mL具塞试管中，再分别加入对照品溶液0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL各3份，照“1.2.3”线性和范围项下的方法，自“氮气吹干”起，同法操作，测定吸光度，带入标曲计算含量，扣减该批紫芝中三萜及甾醇含量，与加入量比较，计算得低、中、高浓度回收率，结果平均回收率均大于95%，满足测定要求。详见表1。

2 结果

样品测定：精密量取供试品溶液0.2 mL，置15 mL具塞试管中，照“线性和范围”项下的方法，自“氮气吹干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中齐墩果酸的含量，根据水分测定结果，折干计算，即得灵芝中三萜及甾醇含量。

10种市售灵芝共计30批，仅有1批水分超过17.0%，按干燥品计算，含三萜及甾醇以齐墩果酸（CHO）计，有4批低于0.50%。详见表2。

3 讨论

由于市售各品种灵芝三萜和甾醇含量差异较大，参考2020版药典检测方法线性范围不能满足测定要求，课题组通过预实验的结果调整取样量，使待测样品的浓度在标曲范围内，吸收值符合紫外测定的要求，确保市售灵芝检测的结果准确可靠。

通过市售灵芝中三萜和甾醇含量测定，反映出各种市售灵芝质量差异较大，含量最高的是白灵芝，平均含量3.34%，其次是灵芝王1.32%和竹灵芝1.12%，含量最低的是青芝平均只有0.42%。检验数据也显示，不同商店售卖的同品种灵芝三萜和甾醇含量也有明显差异，差别最大的是黄灵芝，最高含量3.06%，最低含量0.29%，相差超过10倍，可能与采摘时节或存放时间有关。因此制定地方药材标准时，不同品种灵芝的指标成分限度范围应有差异。

目前只有紫芝和赤芝被中国药典收载，属于正品灵芝，其他品种均属于伪品，但在海南地区多为习用，多数灵芝品种尚未建立质量标准或标准简单，不便于市场监管。本次研究仅采集了3个市县30批市售灵芝，样本量还不够大，由于灵芝成分复杂，单一成分或指标成分难以全面评价其质量，下一步，课题组将通过进一步研究，通过多指标全面考察灵芝质量，为各种市售灵芝建立质量标准，为开发和利用各种灵芝资源提供参考依据。

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（收稿日期：2024-02-02 编辑：陶希睿）