胃癌组织中突触融合蛋白6的表达与临床病理特征及远期预后的相关性

王娜,杨迷玲,杨金花,郝义彬

[河南中医药大学第五临床医学院(郑州人民医院) 病理科,河南 郑州 450053]

胃癌是起源于胃黏膜上皮细胞的一种恶性肿瘤,发病率和病死率在中国所有恶性肿瘤中分别居第2位和第3位,近年来发病人数还在不断增加,并逐渐向年轻化趋势发展[1-2]。手术是胃癌患者可能获得根治的唯一方法,但受肿瘤分期、分化程度等影响,患者整体治疗效果欠佳,预后较差[3]。一项全国多中心研究显示,腹腔镜远端胃癌根治术患者10 a总生存率仅为46.1%[4]。由此可见,胃癌患者腹腔镜远端根治术的远期预后较差。因此,探讨胃癌发病的分子机制,对改善患者远期预后具有重要意义。突触融合蛋白6(syntaxin 6,STX6)是一种囊泡转运蛋白,在肾透明细胞癌[5]、肝癌[6]等多种肿瘤组织中均呈高表达。最近研究发现,P53基因调控着细胞凋亡相关基因gm1、bax、P2xm、pag608和killer/dr5表达,而STX6是P53的直接作用靶点,能促进P53依赖型癌细胞生长,导致癌症复发转移[7]。然而,STX6在胃癌组织中的表达及作用机制尚不清楚。基于此,本研究采用回顾性分析方法,探讨胃癌术后肿瘤组织中STX6表达水平与临床病理特征、远期预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性纳入2019年6月至2022年6月在河南中医药大学第五临床医学院(郑州人民医院)接受手术的82例胃癌患者的临床资料,其中男48例,女34例;年龄46～70(54.60±5.38)岁;体重指数20～26(22.57±2.10)kg·m-2。

1.2 入选标准

纳入标准:胃癌经手术病理、影像学等检查后确诊;病理资料、实验室检查资料及随访资料完整;年龄40～62岁;术前未接受过其他抗肿瘤治疗。排除标准:伴有其他恶性肿瘤;主要器官功能受损;伴有精神功能障碍;患有严重急慢性疾病或感染性疾病;术后出现严重并发症。

1.3 研究方法

STX6检测:采用免疫组织化学En Vision法染色,4 μm石蜡切片在60 ℃下烘烤2 h,加入二甲苯和梯度乙醇脱蜡至水,采用柠檬酸热修复法抗原修复,加入3%(质量分数)过氧化氢封闭,一抗4 ℃孵育过夜,滴加HRP标记的二抗,室温孵育30 min,常规DAB显色,设置PBS代替一抗作为阴性对照组,已知阳性片作为阳性对照组。安排两名经验丰富的病理科医师采用双盲法评价STX6表达情况,于400倍视野镜下观察胃癌组织和癌旁组织的肿瘤细胞及染色程度,参照马丽等[8]研究评价肿瘤细胞和染色程度,肿瘤细胞:0分(无阳性肿瘤细胞)、1分(<10%阳性肿瘤细胞)、2分(11%～35%阳性肿瘤细胞)、3分(36%～70%阳性肿瘤细胞)、4分(>70%阳性肿瘤细胞)。染色程度:1分(淡黄色)、2分(黄棕色)、3分(棕褐色)。将阳性比例和染色程度得分相乘即得到最终得分,0分为STX6阴性表达,1～12分为STX6阳性表达。

蛋白质免疫印迹实验:采用蛋白质免疫印迹实验检测STX6表达情况,操作如下。根据试剂盒说明书要求提取胃癌组织蛋白,采用BCA法测定总蛋白浓度,蛋白提取完成后放置于-80 ℃冰箱保存。采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶配制100 g·L-1的分离胶和80 g·L-1的浓缩胶进行电泳,电泳结束后转膜1.5 h,用磷酸盐吐温缓冲液洗膜,洗膜后用50 g·L-1的脱脂牛奶封闭;一抗是STX6抗体(Abcam公司,ab140607),抗体在4 ℃环境下孵育过夜,二抗室温孵育30 min;最后,于暗室曝光显影,分析STX6相对表达量。

1.4 临床病理资料收集、随访及预后监测

查阅胃癌患者电子病例档案,收集肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移、人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)等病理资料。所有患者出院后均接受随访,每3个月进行1次电话随访或门诊复查,门诊复查内容主要包括胸部CT、胃镜、肿瘤标志物等,随访时间截至2023年6月31日,记录患者生存时间。

1.5 观察指标

(1)不同临床病理特征患者胃癌组织中STX6表达情况;(2)胃癌患者的远期预后;(3)胃癌患者临床病理特征、远期预后与STX6表达的关联性。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 胃癌组织中STX6表达情况

免疫组织化学法检测结果显示,胃癌组织STX6表达阳性率为65.85%(54/82),高于癌旁组织中50.00%(41/82)(χ2=4.228,P=0.040)。

2.2 胃癌组织中STX6表达与临床病理特征的关系

胃癌组织中STX6表达与肿瘤部位、肿瘤直径及分化程度无相关性(P>0.05),但与TNM分期、淋巴结转移及HER-2表达相关(P<0.05)。见表1。

表1 胃癌组织中STX6表达与临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 STX6阳性表达和STX6阴性表达患者的总生存期比较

随访结果显示,STX6阳性表达和STX6阴性表达患者的总生存率分别为74.07%、92.86%(χ2=4.142,P=0.042)。经log-rankχ2检验,STX6阳性表达者的总生存时间较STX6阴性表达者短(χ2=16.346,P<0.001)。见图1。

图1 STX6阳性表达和STX6阴性表达患者的生存曲线

2.4 胃癌组织中STX6表达与远期预后的关系分析

经一般双变量Pearson相关性分析显示,胃癌组织中STX6表达与患者总生存期呈负相关(r=-0.508,P<0.001)。

3 讨论

现阶段,临床对胃癌多采用以手术为主的综合治疗策略,但难早期诊断、术后复发转移率高等导致胃癌患者总体预后较差[9]。STX6是突触前膜中的一类特殊蛋白,可通过介导囊泡转运和膜融合参与多种恶性肿瘤的发生及发展过程[10-11]。目前研究显示,STX6是一种潜在的致癌基因,影响着食管癌[12]、前列腺癌[13]等多种恶性肿瘤的预后转归。。

本研究结果显示,STX6在胃癌组织和癌旁组织中存在差异表达,且在胃癌组织中的表达更高。胃癌的进展与原癌基因或抑癌基因的异常表达有关,STX6作为一种促癌基因,可维持人体内血管内皮细胞生长因子受体2水平,诱导肿瘤细胞增殖、细胞迁移和血管生成,最终导致胃癌复发转移[14]。研究发现,抑制STX6功能可阻断血管内皮细胞生长因子受体2功能,阻碍新生血管生成[10]。提示STX6对血管内皮细胞生长因子受体2的调控机制可能是胃癌复发转移的重要因素之一。既往大量文献报道,P53是迄今为止与人类肿瘤关系最密切的基因之一,P53基因的突变和功能丧失会导致新生血管生成,有利于肿瘤快速生长[15-16]。而STX6是P53基因的作用靶点之一,STX6在肿瘤组织中呈高表达会增强P53家族对血管生成基因Smad4的刺激能力,最终导致肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,增加患者预后不良风险[17-18]。一项针对乳腺癌细胞的研究发现,STX6敲低后可阻碍细胞黏附,引起肿瘤细胞周期停滞并加快肿瘤细胞凋亡,进而对乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用[19]。可见STX6在肿瘤的发生和发展中扮演重要角色。Zhou等[20]研究发现,STX6能通过激活USF2/LC3B轴改变肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,最终促进恶性肿瘤进展。提示对于胃癌根治术后仍接受化疗的患者来说,STX6改变癌细胞对化疗药物的敏感性也可能是胃癌转移、复发的一个关键因素。本研究经Pearson相关性检验显示,胃癌组织中STX6表达与患者总生存期呈负相关。这与上述观点相符。

本研究还显示,TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、HER-2阳性的胃癌组织中STX6阳性比率较高,与马丽等[8]研究结果大致相符。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移和HER-2阳性往往预示着肿瘤浸润程度较深、恶性程度较高,因此具有上述病理特征的胃癌患者STX6阳性表达占比较高。提示在临床工作中,可以根据STX6表达情况筛选出术后高复发、转移风险的胃癌患者,并针对此类患者开展相应的治疗,可能对改善患者远期预后有积极意义。

4 结论

胃癌患者的临床病理特征和远期预后与STX6表达存在密切相关性,但本研究作为回顾性、单中心研究,病例数量有限,所得结论仍有待大样本、多中心的前瞻性研究加以验证。此外,目前STX6在胃癌中的研究证据有限,其在胃癌发生发展中的具体作用机制还有待深入研究。