种猪常温精液新旧国标比对分析

解冰辉，段晓红，李同川，王贵江，罗文学，骆菲，马军红，张军辉

（河北省畜牧良种工作总站，河北石家庄 050000）

传统的猪常温精液检测使用的是人工判断精子活力和密度，检测方法比较落后，人为误差较大， 而随着精准智能化的研发和推广新型的猪精液检测仪器CASA 系统出现，多数中大型公猪站已经采用， 它更快捷和精准的检测出精子活力和密度；旧标准的技术要求比较单一，深部输精技术在实际生产中的应用效果显著； 旧标准使用的福尔马林固定液， 从环保的角度对人员和环境已经不太适用。 新标准及时修订实施使种猪常温精液生产经营行为更标准更规范更具有先进性和科学性， 笔者对新旧标准进行了梳理，便于检测人员操作、避免出现数据误差和保证检测技术方法一致性。

1 常温精液质量要求的比对

新旧比对，一是检测项目减少2 项：外观和有效期；二是剂量，旧标准：地方品种40～50 毫升，其他80～100 毫升；新标准：常规输精≥80.0毫升,深部输精≥60.0 毫升，地方品种≥40.0 毫升；三是精子活力新旧不变≥60.0%；四是每剂量中直线前向运动精子数，旧标准：地方品种≥10 亿，其他≥25 亿；新标准：常规输精≥18.0 亿,深部输精≥12.0 亿，地方品种≥10.0 亿；五是精子畸形率新旧不变≤20%。

2 抽样的比对

旧标准： 抽样方法与批次化生产实际不符，不便于操作。

新标准：抽样方法条理清晰，可操作性强。出厂检验：以每批次生产量随机抽取，取样量不少于10%。 型式检验： 以每批次生产量随机抽取，取样量不少于15%。 抽样时间：产品分装后2 小时至保质期截止前24 小时。

3 检测方法的比对

3.1 剂量的检测

旧标准量筒法： 取两个剂量全部倒入量筒内，读取其精液量，两个剂量平均数为样品剂量值。 为了降低误差，以及避免对活力的影响，需要将量筒洗净晾干，缓缓倒入精液，将精液瓶置于量筒上方30 秒以上，尽量使精液全部移入量筒内，读出剂量值。 实际工作中需要准备大量量筒否则检测时间过长影响后面的检测内容，量筒内精液也倒不干净， 检测误差大、 操作不方便。

新标准称量法：电子台秤，清零后称量待检产品，记录数值，再使用与受检产品同一批次未使用的空包装称量记录数值， 两个数值之差为剂量值。 根据精液密度约等于水的密度，用台秤称量精液质量， 将精液质量数值直接等同于体积数值。 测量结果保留至小数点后1 位。

新旧检测方法对比， 称量法与量筒法的比较优势：简单、快捷，更好地体现科学性、先进性， 更符合生产实际。 种猪常温精液密度约为1.0038 克/毫升与水的密度1.000 克/毫升(4℃)接近，1 份80 毫升的种猪常温精液误差约为0.304 克，使用量筒法时其残留在原容器的精液量约为0.5930 毫升，约0.5952 克。 可见量筒法误差大。量筒法在操作过程中对精子损伤较大，可能对后续活力和畸形检测结果产生影响。

3.2 精子活力和前向运动精子数的检测

精子活力检测方法比对，旧标准使用人工目测判断；新标准使用仪器法检测。 旧标准：活力：取两个剂量精液摇匀，各取1 毫升水浴锅加热，分别滴1 滴于载玻片上，加盖玻片，37℃条件下，估算精子活力，每个样片观察3 个视野，计算平均值。

前向运动精子数检测方法比对，旧标准使用血球计数板法；新标准使用仪器法检测。旧标准：用移液器取950 微升3%的氯化钠， 再取50 微升的精液与之混匀，取一滴稀释后的精液于血盖片边缘，使精液自行慢慢流入计数室，均匀充满后立刻停止，放置5 分钟，然后在显微镜下数上下两个计数室，每个计数室选左上右上左下右下中间5 个中方格计数， 取两个计数室平均数，如果计数结果误差超过5%，则应重检。 通过公式计算出每剂量前向运动精子数。

新标准： 开启精子质量分析仪预热至少5分钟，恒温台设置温度为37℃；物镜转换到相差显微镜头，调节至视野光线最佳；专用定容玻片预热大于1 分钟；样品在18℃～25℃室温下轻摇2～3 分钟；保持精液瓶与视线水平，使其倾斜约45°， 将移液器吸头伸入液面下15～20 毫米处，避开凝结絮状物，吸取3～5 微升，滴于定容玻片进样口处，让其自行流入腔室，同样方法做一平行样；点样后预热1～3 分钟，在200 倍条件下，在3 分钟内完成两个样点的检测。 每个样点至少读取3 个视野的数据， 记录每个样点的平均值。相对偏差大于5% ，则应重检。算出活力平均值，保留小数点后1 位。 同样方法在仪器软件界面读取并记录精子密度值，通过公式计算出前向运动精子数，保留小数点后1 位。

新标准中精子质量分析仪的优势： 步骤简单、操作快速、读数准确、重复性好，提高检测效率。 旧标准中，聘用职工流动性大，而且每个人判定标准各异，人为误差较大，严重影响数据的准确性。 而使用质量分析仪， 读数一视同仁，降低了人工误差，避免了纠纷。 质量分析仪需要定期采用血球计数法进行校准，一般1 年1 次。

3.3 精子畸形率检测

精子畸形率新旧比对，旧标准使用姬姆萨染色法染色时间需要1.5 小时；新标准使用姬姆萨染色法需要15～30 分钟或者使用伊红苯胺黑快速染色法，时间更短，检测更快。 旧标准使用了福尔马林固定液，新标准删除了中性福尔马林的固定步骤。

新标准染色法优势：染色时间缩短，染色效果不变；中性福尔马林为有毒有害试剂，属于管制试剂， 删去固定步骤不影响精子畸形率的检测，环保安全；伊红苯胺黑快速染色法能快速检测精子畸形率，有效缩短检测时间，提高检测效率，对生产企业具有绝对优势。

4 检验分类的比对

4.1 出厂检验

旧标准为常规检验，只检验外观和活力。

新标准检验项目：产品剂量、精子活力和前向运动精子数。 主要是在封装入库前和销出时检验。 判定规则：所检项目有一项不符合本标准规定时，则判定该抽检样品不合格。

4.2 型式检验

旧标准检验项目：全部检验项目，每两周抽检1 次。

新标准检验项目：全部检验项目。 正常生产时，至少每半年进行1 次型式检验。 有特殊情况随时进行型式检验。 判定规则：任何项目不符合本标准规定时，则判定该抽检样品不合格。 若该抽检样品在其保质期内可进行复检。 批次判定规则：每个批次中所有抽检样品合格，则判定该批次合格；其中有任一抽检样品不合格，则判定该批次不合格。

5 新标准增加了标签和随行文件的内容

5.1 标签标识信息

种猪常温精液、品种名称、种公猪个体编号、生产企业名称及联系方式、生产时间、适用受体、授精方式、保存条件、保质期，以及规定的产品质量参数最低保证值。

非生产企业经营常温精液产品时，其标签信息还应包括经营企业的名称和联系方式等。若是混合精液则应注明。

使用电子标签（如二维码标签）的标签信息至少应包括本条款规定的信息，还可包括生产企业商标或徽标，以及可追溯的其他信息。

5.2 随行文件

随行文件至少应包括种畜禽生产经营许可证和动物防疫合格证复印件，以及种公猪系谱档案复印件。

6 包装、贮存、运输和保质期

新标准更为详细、具体，可操作性更强。

包装：包装的容量应大于规定的对应产品的最低剂量的110%。 如40 毫升包装容量应不低于44 毫升。

贮存：恒温箱避光保存，16℃～18℃，保质期内每间隔8～12 小时摇匀1 次。

运输：16℃～18℃避光密封容器中运输，避免强烈振动和碰撞。

保质期：应不少于72 小时。

7 新标准增加了不合格产品的处置

不应出售和使用检验不合格的产品。不合格产品应按有关规定进行无害化处理。新标准对不合格产品的处置提供了参考依据。

8 新标准新增定义内容

种猪：体型外貌和性能质量符合本品种标准要求且具有种用价值的公猪。 对公猪质量可靠性的要求。

精子密度：每毫升精液中所含的精子个数。

批次：同一生产线、同一时间，使用同一份或混合精液稀释分装生产的一批常温精液产品。

保质期：自产品生产之时起，在满足种猪常温精液产品规定的保存和运输条件下，其产品符合质量要求的最长期限。

混合精液：同一品种两头及以上种猪的常温精液混合产品。