雏痢净中木香及苍术薄层鉴别方法研究

陈 幸，单乃荣，班燕桃，吴 涛，严 寒，严 明

（广西兽药监察所，广西南宁 530001）

0 引言

“雏痢净”是一种由白头翁、黄连、黄柏、马齿苋、乌梅、诃子、木香、苍术、苦参9味中药组成的复方散剂，具有清热解毒、涩肠止泻的功效，主要用于防治雏鸡白痢[1]。为《中华人民共和国兽药典》2020年版二部收载品种。在目前的质量控制方法中，收载了7味中药的显微特征鉴别和黄连的薄层鉴别方法，专属性和质量可控性不够，难以全面评价该药品的质量，存在较大的质量安全风险。组方中的木香为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，《本草纲目》记载，“木香是三焦气分之药，能升降诸气”。其性味辛、苦、温，归脾、大肠、胆经，功效是行气、调中、止痛。临床主要用于脾胃气滞所致的消化不良、腹泻、下痢、腹痛及肝胆湿热气滞等证[2]。木香活性化合物中木香烃内酯和去氢木香内酯等主要化学成分，具有促进胃排空、止泻、抗胃溃疡、抗炎镇痛等药理作用。苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb）Dc.或北苍术Atract ylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根茎，主要有效成分为苍术素、苍术酮及β-桉叶醇等挥发油类物质[3]，调节胃肠道，主治泄泻。近年来有报道木香、苍术饮片质量情况的主要原因用伪品替代或掺伪[4-5]，误用混淆品土木香青木香[6]、北苍术[7-9]。为了完善本产品的质量控制方法，提高产品质量标准，我们选择木香烃内酯、去氢木香内酯和苍术素等作为研究的指标性成分，对组方中木香及苍术的薄层鉴别方法进行了研究。结果表明所建立的方法简单、快速、灵敏，可以作为该散剂的质量控制标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器

电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，型号PL602-S（量程0.01 g）、AE240（量程0.01 mg）；超声清洗仪：昆山市超声仪器有限公司，型号KQ-250DB；薄层色谱全自动点样仪：CAMAG公司，型号为ATS 4；双槽玻璃层析缸；薄层色谱全自动定量喷雾器Biostep DS20；薄层色谱数字成像系统Biostep DD70。

1.2 试药

木香对照药材（批号：Z0181811，中国兽医药品监察所）。木香烃内酯对照品（批号：111524-201911，中国食品药品检定研究院）。去氢木香内酯对照品（批号：111525-201912，中国食品药品检定研究院）。苍术（北苍术）对照药材（批号：Z0031306，中国兽医药品监察所）。苍术（茅苍术）对照药材（批号：120932-201407，中国食品药品检定研究院）。苍术素对照品（批号：111924-201806，中国食品药品检定研究院）。甲醇、环己烷、甲酸乙酯、甲酸、石油醚（60～90℃）、丙酮、乙醇、硫酸、香草醛均为分析纯。硅胶G薄层板（德国Merck公司，规格200 mm×200 mm，批号：HX90 309784；青岛海洋化工有限公司，规格200 mm×200 mm，批号：20201107）。

1.3 供试品

由广西玉林市药材市场购进的原料药材制粉，过二号筛，按照《中华人民共和国兽药典》2020年版二部收载的药材标准检验符合规定。根据雏痢净处方比例除去各药，按制剂工艺制成自配缺木香的阴性对照样品1批、缺苍术的阴性对照样品1批、自配雏痢净样品1批，混匀即得。分别监制获得A企业雏痢净3批（批号：20210201、20210202、20210203），B企业雏痢净3批（批号：20210201、20210202、20210203），C企业雏痢净3批（批号：20210301、20210302、20210303）。

2 方法与结果

2.1 雏痢净中木香的薄层色谱鉴别

2.1.1供试品溶液的制备。取本品5 g，加甲醇10 ml，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.1.2对照溶液的制备。取木香对照药材0.5 g，同2.1.1项下的方法制成对照药材溶液。再取木香烃内酯对照品、去氢木香内酯对照品，加甲醇分别制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3木香阴性对照溶液的制备。取不含木香的“雏痢净”阴性对照样品5 g，按照2.1.1项下的方法，制成阴性对照溶液。

2.1.4薄层色谱鉴别。吸取上述五种溶液各5 µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，观察结果。

2.1.5结果。供试品色谱中，在与木香对照药材色谱和木香烃内酯、去氢木香内酯对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰、圆整、无拖尾。阴性对照样品在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上无斑点、无干扰。此方法可以用于雏痢净中木香的质量控制。图谱见图1、图2。

图1 木香的薄层图谱（普通G板 德国Merck）

图2 木香的薄层图谱（普通G板 青岛海洋）

2.2 雏痢净中苍术的薄层色谱鉴别

2.2.1供试品溶液的制备。取本品3 g，加甲醇10 ml，超声处理15 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.2.2对照溶液的制备。各取苍术（北苍术）对照药材，苍术（茅苍术）对照药材0.8 g，同2.2.1项下的方法制成对照药材溶液。再取苍术素对照品，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3苍术阴性对照溶液的制备。取不含苍术的“雏痢净”阴性对照样品3 g，按照2.2.1项下的方法，制成阴性对照溶液。

2.2.4薄层色谱鉴别。吸取上述五种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－丙酮（9∶2）为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，观察结果。

2.2.5结果。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的污绿色主斑点。阴性对照样品在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上无此斑点、无干扰。图谱见图3、图4。

图3 苍术的薄层图谱（普通G板 德国Merck）

图4 苍术的薄层图谱（普通G板 青岛海洋）

3 讨论

3.1 优化提取方法

3.1.1在木香的TLC实验中，分别对展开剂和显色剂进行了考察。考察了木香药材及含木香制剂常用的展开剂系统，比较了环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液、石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶1）、环己烷-乙酸乙酯（9∶1）、环己烷-丙酮（10∶3）、甲苯-甲醇（27∶1）等展开系统，最终确定采用兽药典木香药材的展开系统，即环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液，此系统相较于其他系统分离效果更好。对不同的点样量进行了筛选，分别点样2、5、10 µl，根据实验结果，最终确定供试品、对照品溶液及对照药材溶液均为5 µl，样品和对照品斑点大小相近、斑点颜色清晰、分离度好。

3.1.2在苍术的TLC实验中，分别对提取方法、展开剂进行了优化考察。提取方法的优化，考察了不同溶剂、溶剂用量比例及提取方式。

1）取样品加正己烷超声提取，滤过，滤液作为供试品溶液。

2）取样品加无水乙醚室温放置2 h，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加无水乙醇溶解作为供试品溶液。

3）取样品加甲醇超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液。结果为此方法甲醇超声提取效果较好，斑点圆整清晰。

展开剂的优化。进行了氯仿一甲醇、正己烷一乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）－丙酮等试剂不同配比试验研究，结果表明以石油醚（60～90℃）－丙酮（9∶2）作为展开剂得到的色谱分离度及斑点相对位置重现性好。

3.2 对比实验

木香、苍术的TLC实验均用进口薄层板和国产薄层板进行了对比实验，均达到较好的分离效果，说明本方法具有较强的耐用性。

薄层色谱法（TLC）在中药和药物辅料的检测中占有非常重要的地位，据统计，在《中华人民共和国兽药典》2020版二部中有大部分的品种使用了TLC作为质量控制分析方法。尽管柱液相色谱、质谱发展迅速，但TLC成本低、操作灵活便捷、样品前处理简单、通量高、仪器联用便捷等优势仍是柱液相色谱难以达到的[10]。本实验在薄层色谱鉴别中，保留原处理净标准黄连的鉴别，增加了另外两味药木香和苍术的薄层鉴别方法，使该标准更加完善，因为TLC法不仅能够定性，还具有半定量的效果，对该产品的质量控制水平提升有重要意义。