血清miR-134-5p、miR-181a-5p联合检测对良恶性肺结节的鉴别价值

周鑫志 张松 魏小栋

大部分肺结节为良性,但有相当一部分是早期的、潜在可治愈的恶性肿瘤,判断结节的良性或恶性是肺癌早期发现的关键[1]。微小RNA(miRNA)是一种非编码、短、单链RNA,通过miRNA通过结合mRNA的3'-UTR区在转录后水平调节基因转录和翻译参与生物体的病理生理过程[2]。miRNA的异常表达参与肿瘤细胞的增殖、转移、侵袭和血管生成,最近miRNA作为判断肺结节性质的生物标志物被研究[3]。微小RNA(miR)-134-5p在非小细胞肺癌和鼻咽癌中起抗肿瘤作用[4]。miR-181a-5p是miR-181家族的成员,抑制非小细胞肺癌进展[5]。本研究探讨联合测定肺结节病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鉴别良恶性肺结节中的价值。

对象与方法

一、对象

2021年1月～2021年12月收治的肺结节病人124例,根据病理结果分为良性组和恶性组,每组各62例。纳入标准:(1)病理确诊为肺结节[6];(2)无肺癌病史;(3)知情且同意;(4)临床资料完整。排除标准:合并恶性肿瘤、免疫系统、血液系统以及肾脏功能障碍疾病;有肺部放化疗或手术治疗史;入组前3个月有激素、抗生素治疗史;肺部感染、慢性肺病或肺结核;妊娠期或哺乳期。本研究经医院伦理委员会批准。

二、方法

1.一般资料收集:收集病人年龄、性别、体质指数、吸烟史、结节直径、结节个数、结节位置等资料。与良性组相比较,恶性组病人结节直径显著增大,差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、性别、体质指数、吸烟史、结节个数、结节位置比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平测定:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检查。就诊当日清晨空腹静脉血5 ml,4 ℃冰箱保存,5 000 r/min离心8分钟,取上清液,超低温冰箱保存备用。采用总RNA提取试剂盒提取血清样本总RNA,并测定RNA产物浓度。采用RT-PCR试剂盒进行qRT-PCR检测miR-134-5p和miR-181a-5p水平,以U6为内参基因,每个样品设置3个技术重复。

三、统计学方法

结果

1.两组血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平比较见表2。与良性组比较,恶性组病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 两组血清miR-134-5p,miR-181a-5p水平比较

2.血清miR-134-5p水平与miR-181a-5p相关性分析:Pearson相关分析显示,肺结节病人血清miR-134-5p水平与miR-181a-5p呈正相关(r=0.547,P<0.05)。见图1。

图1 血清miR-134-5p水平与miR-181a-5p相关性分析

3.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与恶性肺结节临床病理特征相关性:以恶性组肺结节病人血清miR-134-5p平均值0.73为临界值将恶性肺结节病人血清miR-134-5p水平分为高水平和低水平,分别为32例和30例;以恶性组肺结节病人血清miR-181a-5p水平平均值0.97为临界值将恶性肺结节病人血清miR-181a-5p水平分为高水平和低水平,分别31例和31例。血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与病人淋巴结是否转移、结节直径相关(P<0.05);血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与病人性别、症状、组织学类型、肺部位置无关(P>0.05)。见表3。

表3 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与恶性肺结节临床病理特征相关性(例,%)

4.肺结节恶性因素多因素Logistic回归分析:以肺结节是否为恶性(是=1,否=0)作为因变量,以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平、结节直径为自变量进行多因素Logistic回归分析。结果显示,高水平miR-134-5p、miR-181a-5p为病人肺结节为恶性的独立保护因素(P<0.05);结节直径为病人肺结节为恶性的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 肺结节恶性影响因素Logistic回归分析

5.血清miR-134-5p、miR-181a-5p在鉴别良恶性肺结节中的价值:以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平为检验变量,以肺结节是否为恶性肺结节为状态变量(是=1,否=0)绘制ROC曲线,结果见图2、表5。血清miR-134-5p、miR-181a-5p联合鉴别肺结节良恶性的效能均优于两者单独鉴别,差异有统计学意义(P<0.05)。

图2 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鉴别良恶性肺结节的ROC曲线

表5 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鉴别良恶性肺结节中的效能分析

讨论

如何通过无创的方式实现对良恶性肺结节综合评估是目前临床研究趋势,确定这些肺结节的性质对于病人治疗计划的制定具有重要意义。本研究发现,恶性组肺结节病人结节直径较良性结节直径显著增大,且结节直径较大为病人肺结节为恶性的独立危险因素,提示肺结节性质与其直径大小具有一定相关性。

miRNA可在生理或病理条件下由正常细胞分泌到体液中,也可以由凋亡和坏死细胞分泌到体液中。miR-134-5p与抑制癌细胞生长、侵袭和迁移有关,其表达在肾癌、结直肠癌和肝癌等已被证实[7]。miR-134-5p过表达能够减少SGC7901细胞的增殖、集落形成和侵袭[8]。miR-134-5p的表达在非小细胞肺癌中显著下调,且与非小细胞肺癌进展呈负相关[9]。本研究发现,恶性组肺结节病人血清miR-134-5p水平显著降低,与饶德新等[9]研究结果一致。

miR-181a-5p作为一种功能性miRNA,已经在包括肺癌在内多种癌症类型中进行研究,且miR-181a-5p是炎症蛋白的关键上游调节因子,具有抗炎活性[10]。miR-181a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达降低,miR-181a-5p过表达可阻止非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭[11]。miR-181a-5p通过靶向STAT3信号传导缓解克雷伯菌肺炎感染引起的肺损伤[12]。miR-181a-5p在肺癌组织和细胞系中表达显著降低,过表达miR-181a-5p的肺腺癌细胞可显著抑制肺腺癌细胞系A549的增殖和迁移[13]。本研究发现,恶性组肺结节病人血清miR-181a-5p水平显著降低,与Wang等[13]研究结果一致。本研究还显示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与病人淋巴结是否转移、结节直径相关,低水平miR-134-5p、miR-181a-5p病人淋巴结转移概率更高、结节直径更大,提示低水平miR-134-5p、miR-181a-5p与肺结节病人恶性发展具有一定相关性。高水平miR-134-5p、miR-181a-5p均为病人肺结节为恶性的独立保护因素,且肺结节病人血清miR-134-5p水平与miR-181a-5p呈正相关,推测miR-134-5p、miR-181a-5两者在肺结节的发展中具有协同作用,抑制肺结节的恶性发展。进一步ROC分析显示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鉴别病人肺结节为良恶性的AUC分别为0.867、0.868,两者联合鉴别的AUC为0.931,均优于两者单独鉴别,提示miR-134-5p、miR-181a-5p联合在鉴别良恶性肺结节中具有一定潜在价值。

综上所述,恶性肺结节病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平较良性病人均显著降低,两者联合检测对良恶性肺结节的鉴别具有重要价值。本研究样本数量有限,后续本研究将继续扩大样本量并纳入健康样本作为对照组,进一步分析二者水平变化,并深入探究病人结节中miR-134-5p、miR-181a-5p水平变化及其潜在的作用机制。