胰酪大豆胨琼脂培养基比对研究

梁 谋 庞逸辉 刘 欢 王 霞 宣 泽 江志杰

北京市药品检验研究院 国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室中药成分分析与生物评价北京市重点实验室,北京 102206

培养基是微生物试验的基础，其质量优劣直接影响微生物试验结果的准确性和可靠性[1]。《中华人民共和国药典》2020 版四部中，《药品微生物实验室质量管理指导原则》明确要求对商品化培养基建立接收标准并进行符合性验收，验收内容包括产品名称、批号、数量、生产单位、外观性状等[2]。《药品生产质量管理规范（2010 年修订）》第二百二十六条，要求对培养基进行质量控制与保证[3]。《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013）[4]明确了培养基性能测试的方法和判定标准。培养基的质量管理和控制是相关行业和法规重点关注的内容。

1 材料与方法

1.1 仪器和耗材

LRH-250 生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；Ⅱ级A2 型生物安全柜（赛默飞世尔苏州仪器有限公司）；一次性接种环1 μl（JET，批号：20190905）；一次性L 型涂布棒（Fisher brand，批号：180301230）。

1.2 培养基

培养基比对研究使用的胰酪大豆胨琼脂培养基（以下简称培养基）分别为5 家国内培养基生产商，分别用A（批号Ⅰ：20 201105；批号Ⅱ：20 210111；批号Ⅲ：20210215），B（批号Ⅰ：20 201130；批号Ⅱ：20 210106；批号Ⅲ：20210107），C（批号Ⅰ：20 201109；批号Ⅱ：20 201202；批号Ⅲ：20201107），D（批号Ⅰ：K2173Y；批号Ⅱ：L0072Y；批号Ⅲ：L0118Y），E（批号Ⅰ：210110-4；批号Ⅱ：201216-5；批号Ⅲ：201118-1）代表。

1.3 试验菌株

金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10104、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、黑曲霉CMCC（F）98003、白色念珠菌CMCC（F）98001、大肠埃希氏菌ATCC29212 和粪肠球菌ATCC25922。

1.4 试验方法

对5 个品牌培养基的内外包装和产品标识信息进行比对分析，并根据《中华人民共和国药典》2020版四部通则1105 培养基适用性检查方法[2]和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013）[4]商品化培养基质量控制测试方法对每个品牌各3 个批号的培养基进行分析。

2 结果

2.1 培养基包装标识差异

5 个品牌培养基内外包装标识信息存在以下差异：培养基产品规格标示的单位不同；5 个品牌标示的警示信息和备注信息的内容侧重点不同；3 个品牌有效期对应生产日期缩减1 d，2 个品牌有效期对应生产日期没有缩减天数。见表1。

表1 培养基产品包装标识比对结果

2.2 培养基厂检报告差异

5 个品牌培养基自检报告使用的检验依据和具体检测项目以及适用性判定标准都不相同。见表2。

表2 培养基产品自检项目比对结果

2.3 培养基适用性检查

根据《中华人民共和国药典》2020 版四部通则1105，对5 个品牌培养基进行比对测试，培养基适用性检查结果，均符合要求，菌落平均数的比值在0.6 ～1.4。见表3。

表3 培养基适用性检查结果

根据《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013）对5 个品牌培养基性能进行比对测试。5 个品牌培养基均符合标准要求，G 值结果在7.1 ～14.5。见表4。

表4 培养基适用性检查结果

3 讨论

3.1 培养基质量管理规范化的必要性

目前，我国培养基质量控制标准多为行业标准，缺乏系统全面的国家标准。药品检验和食品生产检测培养基使用验收有相应标准。此外，还有卫生行业标准和进出口行业标准等[5-7]。现行培养基质量控制标准存在培养基应用领域不明确，适用性待提高，质量控制依据不完备等问题。

3.2 培养基比对研究发现的主要差异

首先，培养基包装及其信息标识存在差异。关于有效期标识，有效期对应生产日期应该缩减天数。包装警示信息方面，除了标示一般警示信息外，不同用途培养基应当有针对性的警示内容。再次质量控制标准差异较大。有1 个品牌没有注明出厂检验依据，给培养基的使用带来一定困惑。pH 值是微生物生长繁殖重要的环境指标之一，一般来说，细菌适合pH 值在7.0 ～7.5[8]，在比对中发现，有2 个品牌没有进行pH 值检测。适用性测试方面，品牌B 的出厂检验报告，没有写明菌落回收率的具体测试数值，只写明结果范围，其余4 个品牌菌落回收率都有明确数值。通过研究发现，5个品牌培养基适用性测试，都符合相关标准要求，但相同品牌不同批号之间均一性存在差异。

3.3 培养基质量管理的意见和建议

培养基使用前的验收很有必要，使用者应该认真执行培养基验收制度，建立适合自身应用领域培养基验收工作文件[9-12]，特别是在更换培养基供应商时，应最大限度保证培养基质量的一致性[13]。应当建立培养基通用质量标准，适用于不同微生物检测领域的培养基质量基本要求[14-16]，培养基生产商应该加强培养基质量管理和控制，对质量控制标准予以明确和完善，从而更加符合现行行业标准。

综上所述，目前市场上使用的培养基的包装标识和质控标准存在较大差异，不利于培养基后期的管理和使用，应当进行改进和完善。因条件限制只对市场上5 家培养基厂商进行比较，此外，因实际检验能力的原因未对5 种品牌培养基的pH 值、硬度、水分流失、厚度等参数做定量分析，因此研究结果存在一定局限性，有待后续研究进行深入分析与研讨。