◎ 饶玲玲
(湖南省分析测试中心有限公司,湖南 长沙 410000)
水产养殖产业的迅猛发展,为我国农村经济的进步提供关键性支撑。在养殖业发展进程中,因养殖密度、环境污染等因素,导致各类水产品病害严重,兽药的科学应用能够有效降低水产养殖的发病率及死亡率,保障养殖者的利益。然而,因部分养殖者缺乏相关用药知识及科学的指导,出现抗生素、药物添加剂滥用的问题,导致水产品兽药残留严重,成为社会大众关注的焦点。兽药残留是指动物产品的可食用部分中所有与药物有关的物质残留,是药物原型或其所有代谢物的总和[1-4]。水产品在使用药物之后,包括药物原型在内的相关产物、杂质等,都会在水产品的组织、细胞及各种器官中进行积累,不仅不利于生态环境,也会通过食物链进入人体,引发人类身体健康问题。兽药滥用的问题非常普遍,严重影响了我国水产品食用的安全性。因此,对水产品中的药残进行检测在保障食品安全方面意义重大[5]。鱼类是CS 地区重要的食用水产品,尤其是草鱼,受到当地人民的广泛喜爱。因此,强化对草鱼水产品安全的监管,对于当地经济、产业、新农村建设、提升当地农民收入,具有重要现实意义。基于此,本研究依据GB 31656.13—2021 《食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法》,对草鱼中的4 种硝基呋喃代谢物的含量进行了测定,同时开展了测定方法的评价,期望可以为水产品农残的测定提供一定参考依据。
(1)材料。实验用草鱼:来自SC 水产养殖基地。
(2)试剂。4 种硝基呋喃代谢物标准和内标物质;甲醇、乙酸乙酯、乙酸铵、二甲亚砜、2-硝基苯甲醛(以上均为色谱纯);盐酸、无水磷酸氢二钾;水(超纯水)。
(3)实验仪器。液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI);组织捣碎机;恒温振荡器等;分析天平;氮吹仪;离心机;涡旋混合器。
参照GB 31656.13—2021 《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法》。
1.3.1 色谱条件
色谱柱:Waters C18(Xbridge BEH 2.5 μm);柱温:30 ℃;进样量:10μL;流速:0.35 mL·min-1;流动相:溶剂A 为2 mmol·L-1的乙酸铵溶液,溶剂B 为甲醇。梯度洗脱程序见表1。
表1 流动相及梯度洗脱程序表
1.3.2 质谱条件
离子源:EI(ESI+);扫描方式:SRM;离子喷雾电压:4 500 V;离子传输管温度:300 ℃;蒸汽温度:350 ℃;鞘气流速:30 Arb;辅助气流速:15 Arb。
配制了6 个点的标准溶液,浓度分别为 0.50、1.00、2.00、5.00、10.0、20.0 ng·mL-1,内标浓度为 2.00 ng·mL-1,建立标准工作曲线,得到线性回归方程和相关系数,见表2。
表2 4 种硝基呋喃代谢物的线性方程及R2 值表
由表2 可见,在0.5~20.0 ng·mL-1线性范围内,4 种硝基呋喃代谢物的标准线性方程相关系数处于0.999 2~0.999 8,说明其线性关系表现良好。
各称取草鱼样品2 g,分别添加硝基呋喃代谢物(AHD、AOZ、SEM、AMOZ)标准物质0、5、5、10 ng,并定容至1 mL,计算其分析结果及回收率,具体见表3。
表3 硝基呋喃代谢物加标回收实验结果表
由表3 可知,4 种硝基呋喃代谢物的加标回收率处于91.8%~107%,代表该检测方法具备较高的准确度,可以满足检测要求。
依据上述方法对草鱼样品中含有的4 种硝基呋喃代谢物进行检测,检测结果见表4。
表4 草鱼样品中硝基呋喃代谢物检测结果表
由表4 可知,通过对SC 水产养殖基地选取的具有代表性的3 个养殖点中的草鱼开展检测。结果显示,该养殖基地的草鱼样品中除SEM 未检出外,样品中均有AMOZ、AOZ、AHD 残留,其中AMOZ 含量处于5.28~5.38 μg·kg-1,AOZ 含量处于2.52~2.58 μg·kg-1,AHD 含量处于2.56~2.59 μg·kg-1,且检出值均高于该检测方法的定量限(0.50 μg·kg-1)。
本研究在对仪器的工作条件进行优化后,开展了硝基呋喃代谢物加标回收实验。结果显示,4 种代谢物处于0.05~20.0 ng·mL-1浓度范围内时,其线性关系表现良好,相关系数处于0.999 2~0.999 8,4 种代谢物加标回收率处于91.8%~107%。结果表明,该检测方法准确度较高、简单、可靠,能满足草鱼中不科学应用硝基呋喃类药物的检测监控要求,为相关人员开展水产品硝基呋喃类药残检测提供方法参考。
水产品中检测出的硝基呋喃代谢物,不仅源自养殖者在饲养过程中不科学地使用药物,也与环境污染具有较大的关系。对于本实验样品草鱼中检测出来的AMOZ、AOZ、AHD 3 种硝基呋喃代谢物,其来源还有待进一步研究。