新生儿肺炎患者血清circ_0038467、肿瘤坏死因子受体相关因子1水平变化及其预后预测效能

刘亚楠，陈文燕，贾小慧

1 临汾市人民医院儿科，山西临汾 041000；2 临汾市人民医院检验科

新生儿肺炎（neonatal pneumonia，NP）是新生儿时期常见的呼吸系统疾病，近年NP患病率呈上升趋势，病死率为5%～20%，已成为目前新生儿死亡的重要病因之一[1-2］。早期诊断和治疗可有效降低NP患者的病死率。因此，寻找新的检测指标来预测预后，对改善NP 患者的生活质量具有重要意义。研究[3］发现，炎症反应在NP 的发生发展中发挥重要作用[3］。环状核糖核酸（circular ribonucleic acid，circRNA）作为一类不具备5＇和3＇末端的新型非编码RNA，以共价键形成闭合环状结构，参与调控炎症 反 应[4］。circ_0038467 是 新 近 发 现 的 一 种circRNA。最新研究[5］发现，有实验报道抑制circ_0038467 能减弱肺炎链球菌诱导的人肺细胞炎症反应。肿瘤坏死因子受体相关因子（tumor necrosis factor receptor-associated factor，TRAF）1 是一种细胞内信号转导因子，能通过激活多条信号通路促进机体的炎症反应[6］。动物实验发现，重症肺炎模型小鼠血清TRAF1 水平升高[7］。目前，血清circ_0038467、TRAF1 对NP 预后的预测效能相关研究报道较少。为此，我们观察了NP 患者血清circ_0038467、TRAF1 的水平变化，进一步分析血清circ_0038467、TRAF1 对NP 预后不良的预测效能。现将结果博报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2020 年1 月—2022 年1 月本院收治的80 例NP 患者（NP 组）。NP 组纳入标准：①患者家属或监护人签署同意书；②符合第五版《实用新生儿学》[7］NP 诊断标准：①有宫内感染（如胎膜早破＞24 小时、母亲发热、母亲绒毛膜羊膜炎、母亲阴道B 族链球菌感染及定植等）、分娩过程感染（胎儿分娩过程吸入阴道内被病原体污染的分泌物、断脐不洁）、生后感染（接触呼吸道感染患者）史；（②临床表现：生后有气促、呻吟、呼吸费力、呼吸暂停、发绀等；③肺部呼吸音粗糙或减低，约半数可闻及湿啰音；④X 线：双肺可见点状、片状或大小不一、不对称浸润影。⑤日龄1～28 d。排除标准：①早产儿；②存在新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿湿肺、新生儿胎粪吸入综合症；③合并其他感染性疾病；⑧气道、肺、膈肌、心脏先天畸形；⑤医院感染。NP 组中女30例、男50 例；胎龄37～42 周（39.50 ± 0.90）周；出生体 质量2.46～4.53 （3.47 ± 0.37）kg；日 龄1～28（11.65 ± 5.28）d；确诊后根据病情严重程度[7］分为病情较轻（不需要呼吸支持或仅需鼻导管吸氧）50例和病情较重（需要无创或有创呼吸支持）30 例。另选取同期80 名健康新生儿为对照组，女32 例、男48 例；胎龄37～42（38.31 ± 1.04）周；出生体质量2.55～4.32（3.46 ± 0.38）kg；日龄1～28（12.10 ±4.63）d。两组性别、胎龄、出生体重和日龄具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 两组血清circ_0038467、TRAF1 检测 收集NP 患者确诊时和对照组体检时3 mL 股静脉血，3 000 r/min 离心15 min 后留取上层血清，部分血清使用TRIzol 试剂盒提取总RNA，经紫外分光光度仪器鉴定纯度和完整性合格后，使用TaKaRa逆转录试剂盒逆转录为cRNA。然后使用聚合酶链式反应扩增仪（按照实时荧光定量聚合酶链式反应试剂盒说明书，以β-actin为内参，以2-ΔΔCT代表circ_0038467相对表达量。circ_0038467上游引物5'-TCTGTTTAATGTGACCGCAACAA-3'、下游引物5'-CGAAATTCTGGTGCTGTGGTG-3'；β-actin 上 游 引 物5'-CTTCGCGGGCGACGAT-3'、下 游 引 物 5'-CCACATAGGAATCCTTCTGACC-3'；反应总体积：cDNA 1μL、上下游引物各2.5 μL、2×Hieff® Robust PCR Master Mix 10 μL、ddH2O 加至总体积25 μL；循环参数：94 ℃ 3 min 1 次，94℃ 10 s、55 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s 35次。剩余部分血清使用酶联免疫吸附试剂盒检测血清TRAF1。实验均重复测算3次，取平均值。

1.3 资料收集方法 收集NP患者性别、胎龄、分娩方式、出生体重、日龄、病程、病情严重程度、超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）和降钙素原（procalcitonin，PCT）等资料。并参考第五版《实用新生儿学》接受治疗，包括抗感染治疗、呼吸支持、营养疗法、液体疗法和并发症治疗。治疗7～10 d时根据是否出现气胸、脓胸、肺不张、胸腔积液、心力衰竭、中毒性脑病、化脓性脑膜炎、败血症等并发症或死亡判定预后。

1.4 统计学方法 选用SPSS28.0 统计学软件进行数据处理。正态性分析采用K-S 检验，呈正态分布的计量资料以±s表示，两组比较用t检验；采用Pearson 相关性分析法分析NP 患者血清circ_0038467 与TRAF1 水平的相关性；以病情严重程度（重 症/轻 症=1/0）、hs-CRP、PCT、circ_0038467、TRAF1（连续变量均原值录入）为自变量，预后（不良/良好=1/0）为因变量，采用多因素Logistic回归分析法分析NP预后不良的影响；绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic，ROC）分析血清circ_0038467、TRAF1 水平对NP 预后不良预测效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清circ_0038467、TRAF1水平比较 NP组、对照组血清circ_0038467 分别为4.19 ± 1.14、1.50 ± 0.43，TRAF1 分 别 为（34.96 ± 11.80）、（12.56 ± 4.06）pg/mL。与对照组相比，NP 组血清circ_0038467、TRAF1 水 平 高（t分 别 为19.800、16.051，P均＜0.05）。病情较轻、病情较重NP患者血清circ_0038467分别为3.60 ± 0.83、5.18 ± 0.86，TRAF1分别为（28.79 ± 9.07）、（45.23 ± 8.10）pg/mL。与病情较轻者相比，病情较重的NP患者血清circ_0038467、TRAF1水平高（t分别为8.099、8.165，P均＜0.05）。

2.2 NP 患者血清circ_0038467 与TRAF1 水平的相关性 NP 患者血清circ_0038467 与TRAF1 水平呈正相关（r=0.713，P＜0.001）。

2.3 NP 患者预后不良的单因素分析 80 例NP 患者分为预后不良21 例和预后良好59 例。预后不良患者中，男12 例，女9 例；胎龄（38.48 ± 0.81）周；顺产14 例，剖腹产7 例；出生体质量（3.39 ± 0.25）kg；日龄（11.48 ± 5.90）d；病程（4.19 ± 1.44）d；病情严重程度：轻症6 例，重症15 例；血清hs-CRP（17.68 ±2.91）mg/L；血清PCT（0.58 ± 0.19）ng/mL；血清circ_0038467 为5.10 ± 1.12；血清TRAF1（43.80 ±8.70）pg/mL。预后良好患者中男38 例，女21 例；胎龄（38.51 ± 0.94）周；顺产36 例，剖腹产23 例；出生体质量（3.50 ± 0.40）kg；日龄（11.71 ± 5.10）d；病程（4.02 ± 1.51）d；病情严重程度：轻症44 例，重症15 例；血清hs-CRP（15.35 ± 2.84）mg/L；血清PCT（0.44 ± 0.17）ng/mL；血清circ_0038467 为3.87 ±0.96；血清TRAF1（31.81 ± 11.19）pg/mL。预后不良 的NP 患 者 重 症 比 例 和hs-CRP、PCT、circ_0038467、TRAF1 水 平 高 于 预 后 良 好 者（P均＜0.05）， NP患者预后不良的多因素Logistic回归分析结果见表1。由表1可见， 病情较重和血清超敏C反应蛋白水平升高、血清降钙素原水平升高、血清circ_0038467 水平升高及血清TRAF1 水平升高为NP患者预后不良的独立危险因素（P均＜0.05）。

表1 NP患者预后不良的多因素Logistic回归分析结果

2.4 血清circ_0038467、TRAF1 水平及二者联合对NP 预后不良的预测效能评估价值 血清circ_0038467、TRAF1 水平及二者联合对NP 预后不良的ROC 结果见表2。血清circ_0038467、TRAF1水平单独和联合评估NP 患者不良的曲线下面积 （area under the curve，AUC）为0.796、0.788、0.865。

表2 血清circ_0038467、TRAF1水平及二者联合对NP预后不良的诊断效能

3 讨论

NP 是指胎儿出生后短期内出现的肺部感染性疾病，通常因为产前、产时或出生后支原体、病毒、真菌和细菌等病原体感染引起，以发热、气促、咳嗽、发绀、肺部湿啰音等为主要临床表现[9］。NP 主要因病原体侵入肺部后，通过直接损伤和宿主异常免疫应答反应引起肺部结构和功能损害所致，由于新生儿呼吸器官和功能不成熟，肺炎持续加重极易引起肺内肺外组织免疫损伤，导致气胸、脓胸、肺不张、胸腔积液、心力衰竭、中毒性脑病、化脓性脑膜炎、败血症等甚至死亡[10-11］。尽管近年来抗生素治疗和呼吸、营养和液体等支持治疗取得一定进展，但重症NP患者往往已出现肺内和肺外脏器严重损害，预后仍然较差[12］。因此及时评估NP 患者病情严重程度和预后对促进其预后改善具有重要意义。

炎症反应失控是NP发生发展的关键机制，支气管、肺泡、肺间质受到病原体侵入后能激活先天免疫系统，通过产生免疫效应因子维持肺脏免疫微环境稳态，但随着炎症反应增强可导致肺部免疫稳态失控，并加剧肺内和肺外组织损害[3］。circRNA 是一类分布广泛具有环状结构和高稳定性的非编码，能通过与微小RNA（microRNA，miRNA）相互作用或竞争，调控mRNA 表达和功能，进而参与NP 等多种疾病过程[13-14］。circ_0038467 是一种具有促炎作用的circRNA，LIU 等[15］首次报道，circ_0038467 在脂多糖诱导人支气管上皮样细胞炎症模型中升高，敲除circ_0038467能抑制Janus激酶/信号传导和转录激活因子3途径抑制其炎症反应。后续敲除circ_0038467能靶向miR-495-3p/髓样分化初级应答基因88 和miR-195-5p/Toll样受体4/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）途径，抑制支气管上皮样细胞炎症反应和凋亡[16-17］。上述研究提示，circ_0038467 在肺部炎症中发挥重要作用。然而关于血清circ_0038467 与NP患者病情和预后的关系尚未可知。

TRAF 是一类多功能细胞内信号接头分子家族，其家族成员能与下游分子相互作用激活炎症信号通路，诱导炎症反应[18］。TRAF1 是TRAF 家族中唯一不含TRAF 结构的N-末端锌指结构域成员，在所有组织中均有表达，能与肿瘤坏死因子受体2 形成异二聚体复合物，激活NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶8/Janus 激酶等信号通路，促进炎症发生发展[19］。实验研究指出，敲除TRAF1 基因能通过抑制Janus激酶、NF-κB信号通路改善缓解骨关节炎、类固醇抵抗型哮喘等炎症疾病进展[20］。上述研究表明，TRAF1 具有促炎作用。TRAF1 在肿瘤坏死因子- α诱导的小鼠肺部炎症中升高。敲除TRAF1 能通过抑制NF-κB 信号通路，减少脂多糖诱导的小鼠肺部炎症反应[7］。因此我们推测，TRAF1可能与NP 患者病情和预后有关。

本研究结果显示，NP 患者血清circ_0038467、TRAF1 水平升高，重症NP 患者血清circ_0038467、TRAF1 水平进一步升高，是预后不良的独立危险因素。说明血清circ_0038467、TRAF1 水平升高与病情加重有关，并且会增加NP患者预后不良风险。其原因可能是血清circ_0038467 水平升高能激活Janus激酶/信号传导和转录激活因子3、髓样分化初级应答基因88、Toll 样受体4/NF-κB 等炎症信号通路[15-17］，TRAF1水平升高也能激活Janus激酶、NF-κB等炎症信号通路[7］，增强炎症反应，加剧肺内、肺外组织炎症损伤并诱导其凋亡，进而导致病情加重和预后不良。本研究结果还发现，NP 患者血清circ_0038467 与TRAF1 水平呈正相关，这提示血清circ_0038467、TRAF1 水平可能共同影响NP 患者病情严重程度和预后。最近XIA 等[21］实验也指出，敲除circ_0038467 能靶向miR-545-3p 下调TRAF1 表达，进而抑制体外NP 细胞模型炎症和细胞凋亡。进一步佐证了本研究结果。最后本研究通过绘制ROC曲线发现，血清circ_0038467、TRAF1 水平为4.08、33.67 pg/ml 时，评估NP 患者预后不良的AUC 为0.796、0.788，血清circ_0038467、TRAF1 水平联合评估的AUC 为0.865，大于circ_0038467、TRAF1 水平单独评估。这说明血清circ_0038467、TRAF1 水平可能成为NP患者预后辅助评估指标，且联合检测血清circ_0038467、TRAF1水平能提升评估价值。

综上所述，NP 患者血清circ_0038467、TRAF1水平升高，并与病情严重程度有关，血清circ_0038467、TRAF1 可能协同促进NP 的发生发展。血清circ_0038467、TRAF1 水平是预后不良的独立危险因素，血清circ_0038467、TRAF1 水平联合预测NP 预后不良的价值较高，可能成为NP 患者预后的辅助评估指标。