碧绿米仔兰茎枝化学成分及其生物活性研究

千 一，李如琪，吴俊丽，李 欣，张 峰*

（1.河南大学第一附属医院，河南 开封 475000； 2.河南大学中医药研究院，药学院，河南 开封 475004）

碧绿米仔兰Aglaiaperviridis是楝科米仔兰属植物，主要生长在中国南部及西南部，其枝叶或花朵在民间常作为草药使用。米仔兰属药用植物中富含多种类型的次生代谢产物，包括Flavagline 类、萜类、黄酮类、生物碱类等，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等作用［1-5］。本实验对碧绿米仔兰茎枝的化学成分及其生物活性进行研究，从中分离得到21 个化合物，并首次分别采用T-AOC 试剂盒及MTT 法评价其抗氧化活性和神经保护活性，化合物1 ～20 均为首次从该种植物中分离得到。化合物2、9、10、14～20 具有较强的总抗氧化能力； 化合物10 的神经保护作用与浓度呈正相关，化合物9、15 的最佳浓度分别为50、100 μmol/L。

1 材料

1.1 药物与试剂 甲醇、乙腈均为色谱纯； 二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、石油醚均为分析纯，购自天津市富宇精细化工有限公司； 氘代甲醇和氘代氯仿购自宁波旋光医药科技有限公司； C18反相填料购自上海博势生物科技有限公司； 硅胶GF254薄层板和柱层析硅胶（200～300、300～400 目） 购于青岛海洋化工有限公司； 总抗氧化能力 （T-AOC）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所； 维生素C 购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司； 依达拉奉注射液（20 mL/30 mg） 购自吉林省博大制药股份有限公司； 30%过氧化氢购自天津市科密欧化学试剂有限公司。人源神经母细胞瘤 （SH-SY5Y）购自中国科学院上海生化细胞所。碧绿米仔兰药材采集于云南西双版纳，经河南大学药学院袁王俊教授鉴定为正品。

1.2 仪器 LC-20AT 型高效液相色谱仪、LC-6A型制备高效液相色谱仪（日本岛津公司）； 基质辅助激光解析离子飞行质谱检测仪、AVANCE AV-300 核磁共振波谱仪（德国Bruke 公司）； Agilent 1100 Series LC/MSD Trap 质谱仪（美国安捷伦公司）； 摇摆式粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）。

2 提取与分离

取碧绿米仔兰茎枝10 kg，粉碎成粗粉，95%乙醇加热回流提取3 次。提取液过滤后减压浓缩成浸膏（926.5 g），分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，分别得到浸膏139、43.6、40 g。

二氯甲烷浸膏43.6 g 经石油醚-乙酸乙酯（50 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、2 ∶1、1 ∶1） 梯度洗脱，TLC 检测合并后得到Fr.1 ～Fr.6； Fr.1、Fr.2 中分别直接获得化合物1 （72.3 mg）、21（60.9 mg）。Fr.3 经硅胶柱分离，以石油醚-乙酸乙酯（15 ∶1） 洗脱，得到化合物2 （9.8 mg）。Fr.4 经硅胶柱分离，以石油醚-乙酸乙酯（10 ∶1）洗脱，得到化合物3 （6 mg）、4 （49.7 mg）、5（211.6 mg）。Fr.5、Fr.6 经硅胶柱分离，以石油醚-乙酸乙酯（8 ∶1） 洗脱，得到化合物6 （21.8 mg）、7 （6.7 mg）。

乙酸乙酯部位浸膏40 g，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶1、50 ∶1、30 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1） 梯度洗脱，经TLC 检测合并，得到Fr.1～Fr.7。从Fr.1 直接得到化合物8 （51.5 mg）。Fr.4经ODS 分离，以20% ～90% 甲醇梯度洗脱，在30%甲醇流分中直接得到化合物11 （16.2 mg），40%甲醇的洗脱液经TLC 检测合并后得到Fr.4-1～Fr.4-3。Fr.4-1 经制备HPLC 分离（流动相33%乙腈-水，检测波长210、254 nm，体积流量3 mL/min），得到化合物18 （tR＝23 min，10.5 mg）。Fr.4-2 经制备HPLC 分离（流动相25%乙腈-水，检测波长210、254 nm，体积流量3 mL/min），得到化合物13 （tR＝22 min，18.6 mg）、10 （tR＝27 min，19.9 mg）、19 （tR＝31.5 min，14.7 mg）。从Fr.4-3 直接得到化合物9 （6 mg）。从Fr.5 直接得到化合物12 （16.8 mg）。Fr.6 经ODS 分离，以20% ～90%甲醇梯度洗脱，20% 甲醇流分经制备HPLC 分离（流动相15%乙腈-水，检测波长210、254 nm，体积流量3 mL/min），得到化合物15 （tR＝27 min，275.7 mg）、16 （tR＝33 min，153 mg）、17 （tR＝40.5 min，85.6 mg）； 30%甲醇流分经制备HPLC 分离（流动相25%乙腈-水，检测波长210、254 nm，体积流量3 mL/min），得到化合物14 （tR＝40 min，4.7 mg）、20 （tR＝62 min，39 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色粉末（甲醇），分子式C30H52O3，ESI-MSm/z： 483.52 ［M ＋Na］＋。1H-NMR （300 MHz，DMSO-d6）δ： 0.74 （3H，s），0.78 （3H，s），0.81 （3H，s），0.84 （3H，s），0.90 （3H，s），0.98 （3H，s），1.02 （3H，s），1.03 （3H，s）；13C-NMR （75 MHz，DMSO-d6）δ： 31.8 （C-1），24.4 （C-2），77.3 （C-3），36.5 （C-4），48.8（C-5），19.5 （C-6），35.4 （C-7），44.6 （C-8），54.6 （C-9），37.5 （C-10），21.4 （C-11），27.5（C-12），43.9 （C-13），50.2 （C-14），33.5 （C-15），28.0 （C-16），49.5 （C-17），16.3 （C-18），12.6 （C-19），86.4 （C-20），23.6 （C-21），35.9（C-22），26.4 （C-23），83.5 （C-24），71.5 （C-25），27.4 （C-26），24.5 （C-27），28.5 （C-28），22.2 （C-29），16.8 （C-30）。以上数据与文献［6］ 报道基本一致，故鉴定为3-epicotillol。

化合物2： 无色结晶（甲醇），分子式C9H10O5。与三氯化铁-铁氰化钾和与溴甲酚绿反应呈阳性，ESI-MSm/z： 196.9 ［M-H］-。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 7.33 （2H，s，H-2，6），3.88 （6H，s，H-3，5-OCH3）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ：121.9 （ C-1），108.2 （ C-2），148.8 （ C-3），141.7 （C-4），148.8 （C-5），108.2 （C-6），56.7（3，5-OCH3），169.8 （-COOH）。以上数据与文献［7］ 报道基本一致，故鉴定为丁香酸。

化合物3： 白色无定形粉末（氯仿），分子式C16H32O2，与溴甲酚绿反应呈阳性，ESI-MSm/z：255.1 ［M-H］-，碎片离子峰213.2 ［M-C3H7］-。1HNMR （300 MHz，CDCl3）δ： 2.35 （2H，t，J＝7.6 Hz，H-2），1.52 （2H，m，H-3），1.25～1.38（16H，m，H-4 ～13），1.25 （2H，m，H-14），1.38 （2H，m，H-15），0.88 （3H，t，J＝7.2 Hz，H-16）；13C-NMR （75 MHz，CDCl3）δ： 178.9 （C-1），34.0 （C-2），32.1 （C-14），29.9 （C-6 ～11），29.6 （C-12），24.8 （C-3），29.5 （C-5），29.4 （C-13），29.2 （C-4），22.8 （C-15），14.3（C-16）。以上数据与文献［8］ 报道基本一致，故鉴定为棕榈酸。

化合物4： 黄色油状液体 （氯仿），分子式C18H26O4，ESI-MSm/z： 307.4 ［M ＋H］＋。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ： 7.68 （2H，dd，J＝3.2，5.6 Hz，H-3，6），7.52 （2H，dd，J＝3.2，5.6 Hz，H-4 ～5），4.29 （4H，t，J＝6.8 Hz，H-8，8′），1.70 （4H，m，H-9，9′），1.44 （4H，m，H-10，10′），1.24 （4H，s，H-11，11′），0.94（6H，t，J＝7.2 Hz，H-12，12′）；13C-NMR （75 MHz，CDCl3）δ： 132.3 （C-1 ～2），131.0 （C-4，5），128.9 （C-3，6），167.8 （C-7，7′），65.6（C-8，8′），30.6 （C-9，9′），29.8 （C-10，10′），19.2 （C-11，11′），13.9 （C-12，12′）。以上数据与文献［9］ 报道基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二戊酯。

化合物5： 黄色油状液体，分子式C10H12O3，ESI-MSm/z： 203.2 ［M＋Na］＋。1H-NMR （300 MHz，CDCl3）δ： 7.24 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2，6），6.92 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3，5），4.32 （2H，q，J＝7.1 Hz，H-1′），1.40 （3H，t，J＝7.1 Hz，H-2′）；13C-NMR （75 MHz，CDCl3）δ： 130.3 （C-2，6），115.5 （C-3，5），125.2 （C-1），155.2（C-4），40.4 （C-7），61.2 （C-1′），14.2 （C-2′），173.3 （C-8）。以上数据与文献［10］ 报道基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酸乙酯。

化合物6： 无色针状结晶 （甲醇），分子式C10H8O4，ESI-MSm/z： 193.3 ［M ＋H］＋。1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ： 6.20 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），7.89 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），3.81 （3H，s，-OCH3），7.21 （1H，s，H-5），6.78 （1H，s，H-8）；13C-NMR （75 MHz，DMSO-d6）δ： 160.6 （C-2），111.6 （C-3），144.6 （C-4），109.7 （ C-5），145.3 （ C-6），151.0 （ C-7），102.9 （ C-8），149.6 （ C-9），110.4 （ C-10），55.9 （-OCH3）。以上数据与文献［11］ 报道基本一致，故鉴定为6-甲氧基-7 羟基香豆素。

化合物7： 白色油状物 （氯仿），分子式C8H18O，ESI-MSm/z： 153.4 ［M ＋Na］＋。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ： 3.66 （2H，s，H-1），0.88 （3H，t，J＝6.4 Hz，8-CH3），1.53 （2H，s，H-2），1.25 （n× CH2）；13C-NMR （75 MHz，CDCl3）δ： 7.4 （C-1），32.1 （C-2），30.2 （C-3），29.9 （C-4），29.5 （n×CH2），22.9 （C-7），14.2 （C-8）。以上数据与文献［12］ 报道基本一致，故鉴定为1-辛醇。

化合物8： 无色针状结晶 （甲醇），分子式C8H8O3，与三氯化铁-铁氰化钾和溴甲酚绿反应呈阳性，ESI-MSm/z： 153.4 ［M＋H］＋。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 7.07 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.74 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′），3.48 （2H，s，H-2）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 176.5 （C-1），41.0 （C-2），157.2 （C-4′），131.2 （C-2′，6′），126.9 （C-1′），116.3 （C-3′，5′）。以上数据与文献［13］ 报道基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酸。

化合物9： 淡黄色无定形粉末（甲醇），分子式C28H36O13，ESI-MSm/z： 603.4 ［M ＋Na］＋，。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 6.75 （2H，s，H-2，6），6.70（2H，s，H-2′，6′），4.67 （1H，d，J＝3.6 Hz，H-7），4.80 （1H，d，J＝4.1 Hz，H-7′），4.18（2H，m，H-9′），3.88 （2H，dd，J＝9.4 Hz，H-9），3.35 （2H，m，H-8′），2.66 （2H，m，H-8）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 140.4 （C-1），105.2 （C-2.6），154.3 （C-3，5），133.8（C-4），89.8 （C-7），56.4 （C-8），71.7 （C-9），131.4 （C-1′），104.9 （C-2′，6′），149.3 （C-3′，5′），135.7 （C-4′），83.3 （C-7′），51.5 （C-8′），70.5 （C-9′），105.4 （C-1″），75.7 （C-2″），77.8（C-3″），71.3 （C-4″），78.3 （C-5″），62.5 （C-6″），57.1 （3，5-OCH3），56.8 （3′，5′-OCH3）。以上数据与文献［14］ 报道基本一致，故鉴定为（＋） -表丁香树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10： 淡黄色无定形粉末（甲醇），分子式C28H36O13，ESI-MSm/z： 603.4 ［M ＋Na］＋，。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 6.72 （2H，s，H-2，6），6.65（2H，s，H-2′，6′），4.77 （1H，d，J＝3.6 Hz，H-7），4.71 （1H，d，J＝4.1 Hz，H-7′），4.27（2H，m，H-9′），3.92 （2H，dd，J＝9.2，3.1 Hz，H-9），3.13 （2H，brs，H-8，8′）；13C-NMR（75 MHz，CD3OD）δ： 139.5 （C-1），104.8 （C-2.6），154.4 （C-3，5），135.5 （C-4），87.2 （C-7），55.7 （C-8），87.6 （C-7′），55.4 （C-8′），72.8 （C-9′），105.3 （C-1″），75.7 （C-2″），77.8（C-3″）。以上数据与文献 ［15］ 报道基本一致，故鉴定为（＋） -丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物11： 黄色油状液体（甲醇），分子式C9H10O3，ESI-MSm/z： 167.2 ［M ＋H］＋。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 7.09 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-2，6），6.75 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，5），3.52 （2H，s，H-7），3.65 （3H，s，H-9）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 157.5 （C-4），131.3 （C-2，6），126.3 （C-1），116.2 （C-3，5），174.6 （C-8），52.4 （C-9）。以上数据与文献［16］ 报道基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酸甲酯。

化合物12： 白色无定形粉末（甲醇），分子式C14H20O9，ESI-MSm/z： 355.1 ［M＋Na］＋。与三氯化铁-铁氰化钾反应呈阳性。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 6.13 （2H，s，H-2，6），3.79 （6H，2×OCH3），4.66 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1′）；13CNMR （75 MHz，CD3OD）δ： 106.1 （C-1′），75.7（C-2′），78.2 （C-3′），71.2 （C-4′），77.9 （C-5′），62.7 （C-6′），129.5 （C-4），154.7 （C-3，5），155.9 （C-1），56.9 （3，5-OCH3） 以上数据与文献［17］ 报道基本一致，故鉴为koaburaside。

化合物13： 白色无定形粉末（甲醇），分子式C19H32O7，ESI-MSm/z： 371.4 ［M-H］-。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 1.19 （3H，d，J＝6.9 Hz，H-10），1.09 （3H，s，H-11），1.01 （3H，s，H-12），2.05 （3H，d，J＝1.63 Hz，H-13），5.81 （1H，s，H-4），4.33 （1H，d，J＝7.1 Hz，H-1′）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 102.1 （C-1′），75.1 （C-2′），78.1 （C-3′），71.8 （C-4′），77.9 （C-5′），62.9 （C-6′），202.4 （C-3），125.4（C-4），170.1 （C-5），19.9 （C-10），29.1 （C-11），27.5 （C-12），25.0 （C-13），75.5 （C-9），52.4 （C-6），48.1 （C-2），37.8 （C-8），37.3（C-1），26.8 （C-7）。以上数据与文献［18］ 报道基本一致，故鉴定为byzantionoside B。

化合物14： 淡黄色粉末 （甲醇），分子式C21H20O11，ESI-MSm/z： 449.3 ［M＋H］＋。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 7.34 （1H，s，H-2′），7.30 （1H，d，J＝8.3 Hz，H-6′），6.93 （1H，d，J＝8.3 Hz，H-5′），6.37 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），6.20 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），5.35 （1H，s，H-1″），0.95 （3H，d，J＝6.0 Hz，H-6″）。将该化合物进行酸水解与单糖标准品进行TLC 薄层对照，确定六元糖的化学结构是鼠李糖。根据δ：0.95 （3H，d，J＝6.0 Hz，H-6″） 的偶合常数确定糖苷键为α 型；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ：103.5 （C-1″），73.2 （C-4″），72.1 （C-3″），72.0（C-2″），71.9 （C-5″），17.7 （C-6″），179.9 （C-4），159.5 （C-5），99.8 （C-6），166.1 （C-7），94.6 （ C-8），163.3 （ C-9），105.9 （ C-10），122.9 （ C-1′，6′），116.8 （ C-5′），116.5 （ C-2′），149.9 （C-4′），146.1 （C-3′），158.4 （C-2），136.3 （C-3）。以上数据与文献［19］ 报道基本一致，故鉴定为槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物15： 淡黄色无定形粉末（甲醇），分子式C21H22O12，ESI-MSm/z： 465.3 ［M-H］-。1HNMR （300 MHz，CD3OD）δ： 6.97 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.80 （1H，dd，J＝8.0，2.0 Hz，H-6′），6.77 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），5.91（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.90 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），3.86 （1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 102.5 （C-1″），74.5 （C-2″），78.0 （C-3″），71.1 （C-4″），77.5（C-5″），62.4 （C-6″），168.9 （C-7），165.3 （C-5），164.0 （C-9），102.5 （C-10），97.3 （C-8），96.3 （ C-6），147.2 （ C-3′），146.2 （ C-4′），128.9 （ C-1′），121.1 （ C-6′），116.2 （ C-5′），115.9 （ C-2′），195.9 （ C-4），83.5 （ C-20），77.1 （C-3）。以上数据与文献［20］ 报道基本一致，故鉴定为（2R，3R） - （＋） -蚁母树苷。

化合物16： 浅黄色粉末 （甲醇），分子式C21H22O12，ESI-MSm/z： 465.3 ［M-H］-。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 7.03 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.85 （1H，dd，J＝8.0，2.0 Hz，H-6′），6.83 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），5.96 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.98 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），3.88 （1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″）；13C-NMR（75 MHz，CD3OD）δ： 169.1 （C-7），165.5 （C-5），164.0 （C-9），102.3 （C-10），97.3 （C-8），96.4 （ C-6），128.8 （ C-1′），116.0 （ C-2′），146.9 （ C-3′），146.0 （ C-4′），116.2 （ C-5′），121.1 （C-6′），196.1 （C-4），83.4 （C-2），77.7（C-3）； 104.6，75.4，77.9，71.4，77.8，62.7为6 个糖碳信号。以上数据与文献［20］ 报道基本一致，故鉴定为（2S，3S） - （-） -蚁母树苷。

化合物17： 白色无定形粉末（甲醇），分子式C28H38O13，ESI-MSm/z： 605.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 3.77 （3H，s，7-OCH3），3.74 （6H，s，3′，5′-OCH3），3.28 （3H，s，5-OCH3），4.26 （1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），6.57（1H，s，H-8），6.43 （2H，s，H-2′，6′）；13CNMR （75 MHz，CD3OD）δ： 33.8 （C-1），40.5（C-2），46.6 （C-3），42.8 （C-4），147.4 （C-5），138.8 （ C-6），148.5 （ C-7），107.7 （ C-8），130.1 （ C-9），126.3 （ C-10），134.3 （ C-1′），106.7 （C-2′，6′），148.9 （C-3′，5′），139.3 （C-4′），66.1 （C-2α），62.7 （C-3α），104.7 （C-1″），78.1 （C-3″），77.8 （C-5″），75.1 （C-2″），71.5 （ C-4″），62.7 （ C-6″），60.1 （5-OCH3），56.5 （7-OCH3），56.8 （3′，5′-OCH3）。以上数据与文献［21］ 报道基本一致，故鉴定为（＋） -南烛木树脂酚-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖。

化合物18： 淡黄色粉末 （甲醇），分子式C26H34O11，ESI-MSm/z： 522.4 ［M-H］-。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 6.76 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-2′），6.64 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-5′），6.62（1H，dd，J＝1.8，7.9 Hz，H-6′），6.19 （1H，s，H-5），2.07 （1H，m，H-8），4.13 （1H，d，J＝7.7 Hz，H-1″），3.81 （3H，s，6-OCH3），3.78 （3H，s，3′-OCH3）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 138.5 （C-1′），114.3 （C-2′），147.1（C-3′），145.2 （ C-4′），116.3 （ C-5′），123.1（C-6′），47.8 （C-7′），46.2 （C-8′），68.8 （C-9′），104.1 （C-1″），75.3 （C-2″），77.9 （C-3″），71.6 （C-4″），78.0 （C-5″），62.9 （C-6″），56.3（3′-OCH3），56.4 （ 6-OCH3），128.5 （ C-1），112.3 （ C-2），149.0 （ C-3），145.8 （ C-4），117.5 （C-5），134.3 （C-6），33.9 （C-7），39.6（C-8），65.6 （C-9）。以上数据与文献［22］ 报道基本一致，故鉴定为（＋） -异落叶松脂素-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖。

化合物19： 白色粉末 （甲醇），分子式C28H38O13，ESI-MSm/z： 605.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR（300 MHz，CD3OD）δ： 3.33 （3H，s，5-OCH3），3.83 （3H，s，7-OCH3），3.75 （6H，s，3′，5′-OCH3），4.30 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），6.57（ 1H，s，H-8 ），6.43 （ 2H，s，H-2′，6′）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 33.6 （C-1），41.1 （C-2），46.8 （C-3），42.7 （C-4），147.6（C-5），139.0 （C-6），148.7 （C-7），107.8 （C-8），129.3 （C-9），126.0 （C-10），134.5 （C-1′），106.8 （C-2′，6′），148.7 （C-3′，5′），139.0（C-4′），68.4 （C-2α），62.8 （C-3α），104.8 （C-1″），75.1 （C-3″），78.2 （C-5″），75.1 （C-2″），78.2 （C-3″），71.6 （C-4″），77.9 （C-5″），62.8（C-6″），60.1 （5-OCH3），56.5 （7-OCH3），56.8（3′，5′-OCH3）。以上数据与文献［23］ 报道基本一致，故鉴定为（-） -南烛木树脂酚-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物20： 淡黄色无定形粉末（甲醇），分子式C21H24O10，ESI-MSm/z： 577.9 ［M＋H］＋。与三氯化铁-铁氰化钾反应呈蓝色。1H-NMR （300 MHz，CD3OD）δ： 6.16 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-3′），6.14 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-5′），7.04 （2H，dd，J＝8.8，1.8 Hz，H-2，6），6.66 （2H，dd，J＝8.8，1.8 Hz，H-3，5），4.99 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-1″），3.42 （2H，t，J＝7.5 Hz，H-α），2.81 （2H，t，J＝7.5 Hz，H-β）；13C-NMR （75 MHz，CD3OD）δ： 102.0 （C-1″），74.7 （C-2″），78.4 （C-3″），71.1 （C-4″），78.5 （C-5″），62.4（C-6″），206.4 （C ＝O），106.6 （C-1′），166.3（C-2′），98.4 （C-3′），167.6 （C-4′），95.5 （C-5′），162.3 （C-6′），133.9 （C-1），130.4 （C-2，6），116.1 （C-3，5），156.3 （C-4），46.9 （Cα），30.8 （C-β）。以上数据与文献［24］ 报道基本一致，故鉴定为根皮苷。

化合物21： 白色针状结晶（石油醚-丙酮），分子式C29H50O，沸点130 ～132 ℃，Liebermann-Burchard 反应呈阳性，使用3 种不同的展开剂与β-谷甾醇对照品对照在同一薄层板展开，具有相同的薄层行为，与β-谷甾醇对照品混合熔点保持不变，故鉴定为β-谷甾醇。

4 活性实验

4.1 总抗氧化能力（T-AOC） 将化合物1 ～20制成浓度为3.7 mmol/L 的溶液，因试验体系为3.7 mL，其中样品溶液为0.1 mL，即样品终浓度为0.1 mmol/L。按照总抗氧化能力（T-AOC） 试剂盒说明书进行样品处理，样品分为测定管和对照管。测定管加入1 mL 试剂一、0.1 mL 的样品溶液、2 mL 试剂二、0.5 mL 试剂三，对照管加入1 mL试剂一、2 mL 试剂二、0.5 mL 试剂三； 涡旋混匀后，37 ℃水浴30 min 后，再分别在测定管与对照管中加0.1 mL 试剂四和0.1 mL 样品溶液； 涡旋混匀后，室温放置10 min，在520 nm 波长处测量吸光度（双蒸水调零）。按下式（1） 计算总抗氧化能力，结果见表1。化合物2、9 ～10、14 ～20具有较强的总抗氧化能力。根据结构类型分析发现，天然酚酸类总抗氧化能力最高，黄酮类和木脂素类的总抗氧化能力次之，其他类型的化合物总抗氧化能力最弱。

表1 化合物1～20 的总抗氧化能力测定结果Tab.1 Detemination results of total antioxidant capacities of compounds 1-20

A为吸光度，T为反应时间30 min，N为样品测试前稀释倍数。

4.2 神经细胞保护活性 经MTT 法检测发现，化合物2、15、17 和依达拉奉分别在10、25、50、100、200 μmol/L 对SH-SY5Y 细胞存活率无影响，化合物9 ～10 对SH-SY5Y 细胞的增殖具有促进作用，无细胞毒性，见图1。

图1 部分化合物和依达拉奉对SH-SY5Y 细胞生长的影响Fig.1 Effects of some compounds and edaravone on the growth of SH-SY5Y cells

经MTT 法检测发现，不同浓度H2O2（100、200、300、400、500、600 μmol/L） 处理SH-SY5Y细胞6、24 h 后，细胞存活率随浓度增大和时间延长而减小。造模6 h 时SH-SY5Y 的存活率分别为（92.34±0.19）%、（91.04±0.20）%、（88.07±0.23）%、（77.45±0.34）%、（76.04±0.35）%、（69.62±0.41）%； 造模2 h 时SH-SY5Y 的存活率分别为 （99.62±0.11）%、（87.20±0.24）%、（83.25±0.28）%、（76.11±0.35）%、（54.62±0.56）%、（42.87±0.68）%，比对发现400 μmol/L的H2O2处理细胞6 h 为最优建模条件，见图2。

图2 不同时间和浓度的H2O2 对SH-SY5Y 细胞的影响Fig.2 Effect of different time and concentration of H2O2 on SH-SY5Y cells

经MTT 法检测发现，模型组细胞存活率为（72.34±0.45）%，阳性对照组（依达拉奉） 在10、25、50、100、200 μmol/L 时存活率分别为（80.93±0.36）%、（83.40 ± 0.34）%、（84.31 ± 0.33）%、（86.70±0.30）%、（90.29±0.36）%，细胞存活率随着浓度的增大而增加，见图3。

图3 不同浓度的依达拉奉对H2O2 诱导的SH-SY5Y 细胞损伤的影响Fig.3 Effect of edaravone at different concentration on H2O2-induced SH-SY5Y cell injury

经MTT 法检测发现，化合物2 和17 对H2O2诱导的SH-SY5Y 细胞损伤保护作用随药物浓度的增大而增大，但与模型组比较无显著差异； 化合物9 和15 的最佳保护浓度分别为50、100 μmol/L，其保护作用在大于最佳浓度时作用下降； 化合物10 保护作用与药物浓度呈正比，且同等浓度下化合物10 保护作用更强，见图4。

图4 部分化合物对H2O2 诱导的SH-SY5Y 细胞损伤的影响Fig.4 Effects of some compounds on H2O2-induced SH-SY5Y cell injury

综上所述，本实验从碧绿米仔兰中分离得到化合物1～20，并对其进行总抗氧化能力（T-AOC）测定，发现天然酚酸类总抗氧化能力最高，黄酮类和木脂素类的总抗氧化能力次之。对化合物2、9～10、15、17 进行神经细胞保护活性研究时，发现化合物2 和17 对H2O2诱导的SH-SY5Y 细胞损伤保护作用与药物浓度呈正相关，但与模型组比较无显著性差异； 化合物9 和15 对H2O2诱导的神经细胞损伤后的保护作用的最优保护浓度分别为50、100 μmol/L； 化合物10 保护作用与药物浓度呈正比，且同等浓度下化合物10 保护作用更强。