血清抗体ELISA、TPPA联合检测在梅毒诊断中的应用

刘玲玲

商丘市立医院检验科 (河南 商丘 476000)

梅毒为一种系统性性传播疾病，早期可多种组织器官，随病情进展可侵犯至心血管、神经系统，对患者生命安全造成一定威胁[1-2]。报道显示[3]，梅毒可提高机体感染艾滋病风险，经母体胎盘可传播至胎儿，引起不良妊娠结局。因此，积极探讨梅毒早期筛查诊断方案具有重大意义。梅毒螺旋体抗体检测为临床诊断梅毒的常用方案，其中酶联免疫吸附试验(ELISA)具有良好灵敏度，可通过自动化检测系统进行检测，具有简便快捷、结果客观准确等优点[4]。明胶颗粒凝集试验(TPPA)利用梅毒螺旋体毒株制作抗原，测定特异性抗体，具有较高稳定性，且无需使用特定仪器[5]。但目前临床关于其联合应用于梅毒评估中相关研究鲜有，基于此，本研究试分析血清抗体ELISA、TPPA对梅毒的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料经我院伦理委员会审核批准，选取126例我院2020年8月～2022年8月就诊的疑似梅毒患者，其中男68例，女58例，年龄21～55岁，平均(32.58±3.45)岁；临床症状：硬下疳36例，扁平湿疣25例，生殖器溃疡41例，梅毒疹24例。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：均经临床初步诊断为疑似梅毒患者；可接受本研究检查方案；知晓本研究，并签订同意书。排除标准：梅毒复发、二次感染者；合并重大脏器功能障碍；入院前1个月接受过抗生素治疗者；合并其他感染型疾病；精神障碍或沟通障碍者。

1.3 方法标本采集：采集入院后外周静脉血3mL，37℃条件下经离心半径8cm、3500r/min离心10min后，分离血清、血浆于保存待测。

主要仪器与试剂：ELISA试剂盒购于北京万泰生物药业股份有限公司，TPPA试剂盒购于珠海丽珠试剂股份有限公司，选用仪器分别为北京白洋BY-400C型医用离心机、烟台艾德康ELISA400全自动酶免仪、江苏新康600-A型电热恒温水浴箱、上海旌派自动梅毒旋转振荡器。

ELISA检测：将浓缩洗涤液稀释20倍，编号样品对应微孔板，每板设置1孔空白对照、2孔阳性对照及3孔阴性对照，分别于相应孔内加入阴、阳对照100ul，于37℃条件下温育60min，采用洗板机洗涤5遍，每孔内加入酶标试剂100ul，空白对照孔无需加入，于37℃条件下温育30min，采用洗板机洗涤5遍，每孔内加入显色剂A、B各50ul，振荡均匀后避光显色30min，每孔内加入终止液50ul，振荡均匀后10min内测定结果，观察并记录反应图像，采用酶标仪(波长于450/630nm处)用空白孔调零后，测量各孔吸光度(A)。其中A值＜临界值判定为阴性，≥临界值判定为阳性，临界值=阴性对照孔A均值+0.18.

TPPA检测：采用微量滴管将血清稀释液滴加至微量反应板第1孔内，第2孔至最后一孔内各滴加1滴，取25ul样品加入第1孔内，采用2n方式从第1孔稀释至第4孔。于第3孔中滴加25ul未致敏粒子，第4孔至最后一孔内各滴加25ul致敏粒子。采用平板混合器混合30s，加盖后静置2h。发生凝集反应则判定为阳性。

梅毒分期评估：一期：合并生殖器溃疡、硬下疳等临床症状，梅毒特异性IgG抗体、IgM抗体或梅毒非特异性抗体中一项以上为阳性；二期：合并扁平湿疣、梅毒疹或黏膜斑等临床症状，梅毒特异性IgG抗体、IgM抗体或梅毒非特异性抗体中一项以上为阳性；潜伏期：无梅毒既往史及相关临床表现，梅毒特异性IgG抗体、IgM抗体或梅毒非特异性抗体中一项以上阳性。

1.4 观察指标(1)比较血清抗体ELISA、TPPA单独诊断结果。(2)比较血清抗体ELISA、TPPA联合诊断结果，联合诊断结果采用并联原则。(3)比较血清抗体ELISA、TPPA诊断效能。(4)比较血清抗体ELISA、TPPA对不同分期梅毒阳性检出率。

1.5 统计学方法采用SPSS 23.0软件对不同类型数据进行相关处理分析，用EXCEL软件建立数据库，常规进行逻辑检错，计数资料用n(%)表示，两组间比较行χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血清抗体ELISA、TPPA单独诊断结果经血清抗体ELISA检测结果显示，阳性37例，阴性89例；经血清抗体TPPA检测结果显示，阳性38例，阴性88例。见表1。

表1 血清抗体ELISA、TPPA单独诊断结果

2.2 血清抗体ELISA、TPPA联合诊断结果经血清抗体ELISA、TPPA联合诊断结果显示，126例疑似梅毒患者中，阳性47例，阴性79例，诊断灵敏度为93.75%(45/48)、特异度为97.44%(76/78)、准确率为96.03%(121/126)。见表2。

表2 血清抗体ELISA、TPPA联合诊断结果

2.3 血清抗体ELISA、TPPA单独、联合诊断效能与血清抗体ELISA、TPPA单独诊断比较，联合诊断灵敏度93.75%(45/48)、准确率为96.03%(121/126)较高，漏诊率6.25%(3/48)较低，差异显著(P＜0.05)。见表3。

表3 血清抗体ELISA、TPPA单独、联合诊断效能n(%)

2.4 梅毒分期评估价值经血清抗体结合临床症状评估，48例梅毒患者中，一期20例，二期11例，潜伏期17例。与血清抗体ELISA、TPPA单独诊断比较，联合诊断对于梅毒一期阳性检出率较高，差异显著(P＜0.05)。见表4。

表4 梅毒分期评估价值n(%)

3 讨 论

梅毒为一种由梅毒螺旋体感染引起的性疾病，感染后可累计多种脏器，临床症状较为复杂，且病程较长，早期诊断存在一定难度[6]。报道显示[7-8]，血清学为诊断梅毒的主要方案，通过非特异性类脂质抗体检测具有较高敏感度，但反应素也存在于非梅毒患者中，且早期梅毒患者反应素出现时间较晚，反应素滴度下降时易发生前滞现象，存在一定局限性。因此，积极探讨一种早期梅毒筛查诊断方案具有重大意义。

梅毒螺旋体镜检为临床诊断梅毒“金标准”，可通过暗视野显微镜进行观察，结合临床症状、性接触史等可进行确诊，但梅毒螺旋体镜检需取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液或组织研磨液，患者接受度较低，不适用于筛查诊断[9]。血清抗体ELISA为一种基因功能特异性检测技术，可通过检测人血清、血浆标本中梅毒螺旋体IgG抗体进行诊断，具有较高敏感度，且ELISA法检测可利用全自动酶免仪，结果清晰易整理，有利于大样本量检测，适用于早期筛查[10]。本研究结果发现，血清抗体ELISA检测对于梅毒诊断灵敏度为72.92%、特异度为97.44%、准确率为88.09%，具有一定诊断价值，可用于早期初步筛查诊断中。分析本研究ELISA检测存在一定假阳性率原因在于，ELISA检测为梅毒IgM、IgG混合抗体，其中IgG抗体在治愈后仍存在一定阳性率，且部分皮肤病、自身免疫疾病及血清纤维蛋白异常患者均可引起ELISA检测阳性[11-12]。因此，单纯通过ELISA检测部分梅毒患者易出现漏诊、误诊现象，无法评估梅毒活动状态及疗效，可联合其他检测方案进行诊断，以提高诊断准确性。

本研究通过TPPA检查结果发现，TPPA对于梅毒诊断准确率为90.48%，具有较高诊断价值。TPPA为一种通过梅毒螺旋体毒株制作抗原检测特异性抗体的诊断方案，当人体感染梅毒螺旋体后，体内可产生梅毒螺旋体抗体，其中TP抗体为梅毒螺旋体的特有抗体，因此可通过TPPA检测特异性抗体进行诊断，且其试剂具有较强稳定性，结果较为准确[13]。本研究还发现，血清抗体ELISA、TPPA联合诊断灵敏度93.75%、准确率为96.03%显著高于二者单独诊断，可有效降低漏诊率，提示临床可通过血清抗体ELISA、TPPA联合检测进行早期筛查诊断。报道显示[14]，梅毒患者感染后梅毒螺旋体抗体可在体内终生保留，且不随患者病情进展、治疗变化，因此TPPA检测结果具有较强稳定性，不易出现假阳性反应，可有效弥补血清抗体ELISA检测缺点。但TPPA检测自动化程度较低，需通过肉眼进行判断结果，无法保存检测数据，且检测时需将样本进行系列稀释，不利于大批量样本筛查，因此血清抗体ELISA、TPPA检测可相互弥补不足，临床可先通过ELISA进行初步筛查后，再行TPPA检测进行确诊[15]。本研究结果还发现，血清抗体ELISA、TPPA联合诊断相较于单独诊断对于梅毒一期阳性检出率较高，进一步说明二者联合应用对梅毒具有较高的诊断价值，为临床病情分期提供参考。

综上所述，血清抗体ELISA、TPPA联合检测对于梅毒具有较高诊断价值，为临床早期筛查诊断、病情分期提供依据，以制定相应干预方案。