疣鼻天鹅感染不动杆菌的诊治

邱启官

(长沙生态动物园，湖南 长沙 410004)

疣鼻天鹅(Cygnusolor)是一种大型鸟类，属游禽，因其前额突起一个瘤疣状物，所以被命名为疣鼻天鹅。疣鼻天鹅除脚趾、蹼呈灰黑色以外全身覆盖白色羽毛，脖颈细长，游泳时弯曲成“S”形，飞行时脖颈伸直，姿态优美。疣鼻天鹅主要分布于欧洲、非洲、亚洲，常营居于芦苇丛中，主要以水草的根、茎、叶、芽、果实为食。不动杆菌(Acinetobacter)是非发酵菌的条件致病菌，当机体抵抗力下降时易感染。该菌可引起呼吸道感染、败血症、脑膜炎、心内膜炎、伤口及皮肤感染、泌尿生殖道感染等[1]，严重者致死。其中鲍曼不动杆菌(A.baumanii)极易对包括碳青霉烯类抗生素在内的大多数抗菌药产生耐药性[2]。高温天气下受到污染的水体给不动杆菌提供了适宜的环境，造成了一批疣鼻天鹅的群发性疾病。通过对此病的诊断、治疗和分析，可为以后此类疾病的防治提供参考。

1 发病情况

2021年9月14日—10月4日，长沙生态动物园天鹅湖水域共26只疣鼻天鹅发病。其中9月14日发现在湖内死亡5只，15日发现在湖内死亡5只。将剩余的16只疣鼻天鹅转移至兽医院隔离场治疗，9月16日早上发现死亡2只，17日死亡1只，22日死亡1只，10月3日死亡1只，10月4日死亡1只。

2 疾病诊断

2.1 临床观察及病理检查

观察转移至兽医院的16只疣鼻天鹅的精神状况、运动状况和粪便形状，发现临床表现为精神沉郁、不喜动、拉水样稀粪，其中4只脖子弯曲着地，呼吸时有时无。

对9月14—15日死亡的10只疣鼻天鹅进行解剖，观察内部脏器变化，发现其解剖结果具有共同的特征：胰腺出血(图1A)，脾脏有红色梗死(图1B)，十二指肠出血(图1C)；其中2只还有肺炎。9月16日和17日死亡的3只疣鼻天鹅，除出现14日和15日死亡的疣鼻天鹅的共同特征外，心脏外膜内膜均有出血点。9月22日死亡1只疣鼻天鹅，其胰腺、脾脏、十二指肠无明显病变，但心肌有出血点，肺部有炎症。10月3日死亡的1只，心脏外有大量尿酸盐沉积，尘肺并局部坏死。10月4日死亡的1只，内脏无明显病变，从主气管取出圆状白色伪膜。将患病疣鼻天鹅内脏出血、肺部炎症等剖检结果与其他动物感染不动杆菌的症状比较，疑似为不动杆菌感染。

图1 胰腺(A)、脾脏(B)和十二指肠(C)病变

采集肝脏、脾脏送长沙市中心医院做切片，进行病理诊断分析。结果显示肝组织结构保留，肝细胞广泛变性坏死，伴有胆汁淤积，汇管区可见中等量炎细胞浸润，符合急性或亚急性肝脏损伤所致肝组织大块坏死(图2A)。脾脏淤血性肿大，脾脏结构欠清，其内可见小淋巴细胞、有核红细胞，脾窦内充满轻度异型单核细胞样细胞，不能明确其细胞来源及性质(图2B)。

A.肝脏(200×)；B.脾脏(200×)

2.2 实验室诊断

2.2.1 细菌的分离

无菌采取胰腺、脾脏、十二指肠、肝脏、肺脏样品送湖南农业大学兽医技术检测中心实验室检测。样品接种于哥伦比亚血琼脂培养基，置于恒温培养箱内37℃培养24～48h，挑取典型单菌落进行纯化培养。接种脾、肝、肺等组织的血琼脂培养基上有均一的菌落生长。分离的菌落较黏稠，呈灰白色圆形，表面光滑、湿润，无溶血现象(图3A)。染色镜检显示为革兰染色阴性(图3B)，短杆菌，两端钝圆，无芽孢。分离菌初步鉴定为不动杆菌。

A.菌落形态；B.革兰氏染色镜检(1 000×)。

2.2.2 细菌的鉴定

DNA提取：使用美国Promege公司的Wizard®SV Genomic DNA Purification System试剂盒提取细菌基因组DNA。

16S rDNA通用引物：27F：5′-AGAGTTTAGT CCTGCCTCAG-3′；1492R：5′-CTACGGCTCACT CGTTACGA-3′。由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

PCR反应体系25.0μL：Premix TaqTM12.5μL，无核酸酶水6.5μL，上、下游通用引物各1μL，模板DNA 4.0μL。

PCR反应程序：95℃预变性5min；95℃变性20s，56℃退火30 s，72 ℃延伸90 min，共35个循环；最后72 ℃延伸5 min。

分离菌的16S rDNA基因PCR扩增产物约为1450bp。PCR产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。测序结果与GenBank中的序列进行Blast比对，结果显示与鲍曼不动杆菌高度同源，相似度达到98%。结合细菌形态学鉴定结果，判定该分离菌株为鲍曼不动杆菌。

2.3 诊断结论

经临床症状观察、病理检查、分离菌的鉴定，结合不动杆菌引发疾病的相关文献，该批疣鼻天鹅符合不动杆菌引发的病变，诊断该病为鲍曼不动杆菌感染。

3 疾病治疗

9月14—24日，根据临床症状和解剖结果基本排除禽流感、小鹅瘟、禽霍乱、肝炎、副伤寒沙门氏菌及寄生虫，但仍不能确定具体病原体的情况下，以对症治疗为主：肌肉注射头孢他啶(0.5g，3次·d-1)、硫酸阿米卡星(0.1g，2次·d-1)、维生素K1(5mg，2次·d-1)，静脉滴注利巴韦林(0.1g，2次·d-1)。症状表现严重的增加静脉滴注维生素C(0.1g，2次·d-1)、三磷酸腺苷二钠(5mg，2次·d-1)、肌酐(50mg，2次·d-1)。

经实验室诊断疑似致病菌为鲍曼不动杆菌后，9月24日—10月4日，借鉴同类型分离菌株的药敏试验结果，调整治疗方案为：全群静脉滴注头孢哌酮钠舒巴坦钠(0.5g，2次·d-1)和盐酸左氧氟沙星氯化钠(0.1g，1次·d-1)，肌肉注射维生素K1(5mg，2次·d-1)。

对全园水系采取分段抽干、扑洒石灰等方式进行全面消毒。10月4—11日，对所有治疗存活的疣鼻天鹅精心护理一周，10月12日治疗完成放回班组。此次病情从发生到控制共持续20d，死亡16只疣鼻天鹅。

4 讨论

鲍曼不动杆菌广泛分布于水体和土壤中，常引起生物被膜感染，不易清除，且泛耐药或多重耐药，治疗极困难。不动杆菌感染在国内外医院报道和研究比较深入。有研究表明，动物临床病例中由于细菌引起感染的比例不断上升，其中耐药鲍曼不动杆菌从兽医临床标本中分离出来的频率也越来越高[3]；2020年，三门峡天鹅湖国家城市湿地公园从病死的野生疣鼻天鹅中分离出洛菲不动杆菌[4]；2022年，安徽科技学院动物科学学院报告从病死鹅中分离出鲍曼不动杆菌[5]；四川农业大学动物医学院检测出肉牛不动杆菌[6]；奶牛生乳中分离出洛菲不动杆菌[7]；不动杆菌感染啮齿动物(如鼠)[8]、水禽(如鸭)[9]导致死亡的病例也时有报道。鲍曼不动杆菌普遍存在于自然界，当动物体质弱时易于感染；鲍曼不动杆菌对多种动物显示出致病性，已经成为自然界普遍存在的致病菌种。

目前针对于疣鼻天鹅感染鲍曼不动杆菌后的临床研究较少，缺乏典型症状的总结，仅靠临床症状和剖检病理变化很难确定为哪种细菌感染。在动物治疗中，取得病样后经化验能确定某一种病原，根据病原采取选择特异性的药物、补充体液、加强护理减少并发症的危害、对症治疗等治疗方法很重要。饲养应精细，治疗应精准。本次疣鼻天鹅感染鲍曼不动杆菌在未确定之前，采用排除法保守治疗并配合辅助疗法；在确定病原后，对症治疗效果较佳。在感染鲍曼不动杆菌后的中后期，部分病例疑似因鲍曼不动杆菌侵犯脑部和神经系统，导致大脑皮层出现出血、淤血或神经损伤的情况。这些疣鼻天鹅会出现低头、头部撞击地面或墙壁、头部不受控制等一系列神经症状，剖检后发现头颈部皮下出现水肿、淤血和出血等症状。针对这些临床表现，做好饲养管理、防止撞伤和溺水、对具有此症状的病例提供适当护理显得尤为重要。近年来，单味中药治疗鲍曼不动杆菌[10-11]、中药复方治疗鲍曼不动杆菌[12-13]、中药与抗生素联合应用治疗鲍曼不动杆菌均进行了研究[14-16]，取得了好的抑菌效果，为野生动物感染鲍曼不动杆菌的治疗药物提供了新的选择。疣鼻天鹅感染鲍曼不动杆菌的病例很少，无相关特征性病变的报道。此次病例，胰腺出血、脾脏红色梗死、十二指肠出血为共同病理变化，其能否作为疣鼻天鹅感染鲍曼不动杆菌的特征性病变，需要相关专业人员进一步的验证。

通过调查发现，每年的7—9月份是此种疾病的易发期，湖南属于亚热带季风气候，夏季高温，如果一段时间没有充足的雨水，人工湖泊如果没有流动性水源，疣鼻天鹅的排泄物及饲料在高温天气下为水体提供了大量的营养，极易爆发流行性的传染病。疣鼻天鹅的机体抵抗力降低，多种条件性致病菌均易感，在此次病例细菌培养时，也培养出了肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)，结合肺炎克雷伯菌在饲养环境的普遍性、临床症状、剖检变化，认为造成疣鼻天鹅死亡的因素是鲍曼不动杆菌感染。对于此类群发性疾病，早发现、早诊断和早治疗，以及在疾病发生时对健康个体进行隔离，使其远离以前的饲养环境，采取提高机体抵抗力、减少应激和辅助使用一些抗生素的措施，能够阻止疾病的进一步发展和传播。因此，群体感染时应该视感染严重程度分群饲养、分群治疗和护理，无症状的保留在原场地，症状轻的进行隔离，症状重的单独治疗，做到早发现、早隔离。饲养人员也应与分群动物对应，保持相对稳定，避免病原传播。