都匀毛尖茶多糖对四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的研究

李攀攀，白锦龙，艾于杰

（1.贵州贵天下进出口实业有限责任公司，贵州 黔南布依族苗族自治州 558000；2.贵州大学 茶学院，贵州 贵阳 550025）

随着老龄化、城市化不断深入，中国已成为糖尿病患病率增长最快的国家之一，糖尿病发病率逐年上涨[1]。经过中药学的不断发展，从常见食物及中药中所提炼出的活性组分在临床上的使用，可促进糖尿病小鼠的胰岛素分泌，提高血糖的摄入，具有一定的降血糖功效[2]。天然茶多糖（tea polysaccharide）是一种在茶叶中非常重要的、具有天然活性的缀合物大分子，由糖类、核酸、蛋白质及无机元素等构成，约占茶叶干物质的20%左右[3，4]。研究表明，多种茶树中所含的茶多糖，具有抗氧化作用，增强免疫功能，降低血糖等作用，具有多种生理功能[5-10]。随着对茶多糖的进一步的研究，它被证明是一种具有良好的降糖性的物质，可以有效地提高人体内的代谢酶的活力，提高人体内的胰岛素的分泌以及肝糖原的含量；具有促进糖代谢，降低血糖的功能[11-13]。本试验以都匀毛尖茶多糖为原料，基于四氧嘧啶模型诱导小鼠设计降血糖对比实验，为都匀毛尖茶多糖功能性食品的开发和应用提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

葡萄糖，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；四氧嘧啶（Alloxan，ALX），美国Sigma公司；其他试剂均为国产分析纯。雄性昆明小鼠，清洁级，购于重庆腾鑫生物技术有限公司，合格生产许可证号：SCXK-(军)2012-0011。

1.2 实验仪器

AUY-220型电子分析天平，日本京都岛津制作所；D-971型磁力搅拌器，巩义市英峪予华仪器厂；GZX-9246MBE型电热鼓风干燥箱，上海博迅实业有限公司；XMTD-204型恒温水浴锅，常州诺海电子有限公司；MIX-30S迷你混合器，杭州米欧仪器有限公司；RE52-AA型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器，ACCU-Chek Advantage血糖仪（德国罗氏诊断有限公司）。

1.3 茶多糖提取

取都匀毛尖粉末样品100g，用1:20（W/V）的蒸馏水以1:5（W/V）的比率在55℃的水浴中进行磁性搅拌2.5小时，将浸出物过滤，4000r/min离心15min，取上清液，加入3倍容积95%酒精进行沉淀并离心，收集沉淀物并冷冻干燥，得到粗茶多糖（TPS）。

1.4 实验方法

1.4.1 糖尿病小鼠建模。取120只健康雄性昆明小鼠（体重20±2g），适应饲养7天后，24小时内禁食不禁水。随机选择10只作为对照组，通过腹腔内注入相同数量的生理盐水，剩余小鼠静脉内注入200mg/kg.bw的四氧嘧啶（四氧嘧啶配为2%的生理盐水溶液，在冰浴下进行制备）。72小时后剪尾尖取血，血糖仪上测量其空腹血糖（测量之前，禁食不禁水），以空腹血糖值>11.1mmol/L的小鼠作为糖尿病模型进行降糖试验。

1.4.2 降血糖实验。以20只正常小鼠作为正常对照（NCG)，取糖尿病模型鼠随机分成四组，即糖尿病模型组（MCG）、茶多糖低（T-L）、中（T-M）、高（T-H）剂量组。对照组与模型组每日一次性i.g.等量生理盐水，T-L、T-M、T-H剂量组每天分别一次性i.g.100、300和600mg/kg•bw剂量的茶多糖溶液，在持续进行14天的灌胃过程中，每组给予基本饲料和自由饮用水，并在给药第7天和给药第14天后测定小鼠的空腹血糖值。

1.4.3 糖耐量实验。在对每组小鼠进行空腹葡萄糖检测后，对其连续灌胃15天。实验开始之前4小时禁食，并对在给葡萄糖之前的血糖值进行测量。15min之后，各组通过灌胃给予葡萄糖2.0g/（kg• bw），于30min、120min时测定血糖值，并计算出血糖曲线下面积。

1.4.4 小鼠生化指标实验。取40只糖尿病模型小鼠，按照禁食4h后的血糖水平，随机分成4组。即模型组、T-L、T-M、T-H剂量组，糖尿病模型组每天一次性i.g.等量生理盐水，T-L、T-M、T-H组每天分别一次性i.g.100、300和600mg/kg•bw剂量的茶多糖溶液。连续灌胃3周，灌胃体积为10mL/kg；末次给药4h后，小鼠禁食不禁水，腹主动脉取血并取其肝脏和胰腺，测定小鼠肝糖原、丙二醛（MDA）、血清胰岛素、超氧化物歧化酶（SOD）含量。

1.5 统计方法

采用WPS Office Excel、SPSS 17.0统计学软件进行数据统计分析处理，各项指标数据用 ±s表示，不同组间差异采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，采用Duncan检验法组间两两比较。

2 结果分析

2.1 都匀毛尖茶多糖对小鼠空腹血糖的影响

在模型建立后，以及给予药物0，7，14天后，对小鼠的空腹葡萄糖值进行测量，如表1所示。与健康对照比较，四氧嘧啶可使小鼠的葡萄糖水平显著提高，而各组之间没有显著差异，说明模型建立成功。给药之后，各TPS组均能降低糖尿病模型小鼠血糖。给药7d后，与模型对照组相比，T-M组达显著水平，T-H组差异达极显著水平。给药14d后，各TPS组小鼠血糖值均明显降低，与模型对照组相比，T-L组差异显著，T-M、T-H组差异极显著。表明三种浓度的毛尖茶多糖的降糖效果均存在一定的量效关系。

表1 都匀毛尖茶多糖对小鼠空腹血糖的影响

2.2 都匀毛尖茶多糖对小鼠糖耐量的影响

都匀毛尖茶多糖对四氧嘧啶所致的糖尿病模型的糖耐量测定的结果如表2所示。研究发现，正常对照小鼠经口服葡萄糖接收糖负载后，其血糖值在30min达到最高，之后逐步开始下降，120min时下降至正常。结果表明，在30min时小鼠的葡萄糖浓度达峰值，之后继续升高，表现出糖耐量降低的特征。TPS各剂量组在30min时的葡萄糖浓度达到峰值，之后逐步下降，至120min时的葡萄糖浓度恢复正常。相比于模型对照组，T-L剂量组差异显著，而T-M、T-H组差异极显著。与模式对照比较，各剂量组的血糖曲线下面积均有所下降，T-M、T-H组之间的差别达到了极显著水平，结果表明，茶多糖能够有效地提高小鼠的糖耐量，并且呈现出了一定的量效关系。

表2 都匀毛尖茶多糖对小鼠空腹血糖糖耐量的影响

2.3 都匀毛尖茶多糖对小鼠生化指标的影响

都匀毛尖茶多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠生化指标的影响实验结果见表3。实验结果显示，连续灌胃三周后，T-M、T-H组的小鼠体内的胰岛素和肝脏的糖原均高于正常组，且血清中的 MDA比正常组含量低，差异显著。各TPS组的 SOD活力均升高，与模型对照相比，T-M、T-H组有显著性差异。说明都匀毛尖茶多糖可以影响糖尿病小鼠的糖代谢，并具有一定降血糖能力。

表3 都匀毛尖茶多糖对小鼠生化指标的影响

3 讨论

目前，糖尿病已是全球范围内位居第三的严重威胁人们健康的疾病。近些年来，随着人们生活习惯与饮食结构的不断改变，糖尿病发病率日益提高，且呈现年轻化趋势。当前，西药用于糖尿病病人，不仅会损害病人的肝功能，还会增加病人的胰岛素敏感性，对病情的控制不易达到理想水平。基于中药的诸多优点，中药复方对上述问题的解决具有重要意义。已知，茶多糖有降血糖等作用，可用作一种自然的辅助药剂用于长期的糖尿病患者，能显著提高肝内酶的活力；促进肝脏中的葡萄糖迅速降解，提高胰岛素的含量等多个方面降低血糖值。

以上结果表明，都匀毛尖茶多糖具有明显的降糖效果，能够显著地降低四氧嘧啶小鼠的高血糖水平，提高机体的糖耐量，促进肝脏的胰岛素分泌及肝脏中糖原含量，从而提高机体的糖代谢水平，达到降血糖的目的。同时可以降低模型小鼠血清中MDA含量，且能显著提高机体内 SOD活性，能明显改善高血糖小鼠的脂质过氧化程度，对高血糖小鼠模型有显著的保护作用。结论：都匀毛尖茶多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠有明显的降糖作用，对糖尿病小鼠的糖代谢有明显的促进作用，能明显改善高血糖小鼠的脂质过氧化程度，起到一定的降血糖作用。