乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α⁃2b 凝胶治疗HSIL患者CKC术后伴HR⁃HPV感染的效果及对IL⁃4、IL⁃10及TNF⁃α 水平的影响

冯爱迪 贾丽华 万颖

高度鳞状上皮内病变（High⁃grade squamous in⁃traepithelial lesion，HSIL）属于一类癌前病变，近年来，有数据统计报道，其患病率逐渐呈年轻化趋势发展，且高发年龄段为30～50 岁［1］。目前，临床对于HSIL 患者常采取宫颈冷刀锥切术（cold⁃knife con⁃ization，CKC）进行治疗，然而，HSIL 患者CKC 术后仍会出现复发情况，复发的主要原因是感染高危型人乳头瘤病毒（High⁃risk human papillomavirus，HR⁃HPV），引起宫颈内部微生物菌群紊乱，造成pH 值失衡、免疫状态失调［2］。白细胞介素4（Interleukin 4，IL⁃4）是外分泌糖蛋白，在自身免疫疾病炎症中呈高表达水平［3］。白细胞介素10（Interleukin 10，IL⁃10）是细胞介导免疫反应细胞因子，可以加强机体自身免疫和清除能力［4］。肿瘤坏死因子⁃α（tumor necrosis factor⁃α，TNF⁃α）可在机体内发挥着抗肿瘤、抗感染等作用［5］。人干扰素作为常用的治疗伴HR⁃HPV 感染药物，可有效改善患者免疫功能，而乳酸杆菌胶囊对阴道内菌群亦有改善作用。本文旨在探讨乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α⁃2b 凝胶治疗HSIL 患者CKC 术后伴HR⁃HPV 感染的效果及对IL⁃4、IL⁃10 及TNF⁃α 水平的影响，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1 月至2022 年12 月于北京市通州区妇幼保健院因HSIL 行CKC 术后伴HR⁃HPV 感染者161 例为研究对象。纳入标准：①采取CKC 手术方案；②首次因HSIL 行CKC 治疗者；③经组织病理学确诊为HSIL 者；④月经周期规律者；⑤患者知晓并签署知情同意书；⑥女性。排除标准：①行CKC 术后确诊HR⁃HPV感染病程＜6 个月；②年龄＜18 岁，＞55 岁者；③妊娠期或哺乳期以及入组后查出怀孕者；④有多重耐药及食物过敏者；⑤合并有造血功能及肝肾功能严重原发性疾病者；⑥有精神障碍，无法配合者；⑦生殖道有急性感染者；⑧宫颈病变HSIL残留者。

依据治疗方式分为对照组79 例（予人干扰素α⁃2b 凝胶治疗）与研究组82 例（予乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α⁃2b 凝胶治疗）。对照组病程38～58 d，平均病程（46.26±1.39）d；年龄23～46 岁，平均年龄（33.16±1.44）岁；HR⁃HPV 亚型：HPV⁃16：31 例，HPV⁃52：21 例，HPV⁃58：17 例，HPV⁃56：10 例；合并亚型种类：合并1 种亚型者：43 例，合并2 种及以上者：36 例。研究组病程37～58 d，平均病程（46.11±1.21）d；年龄22～47 岁，平均年龄（33.21±1.38）岁；HR⁃HPV 亚型：HPV⁃16：34 例，HPV⁃52：22 例，HPV⁃58：15 例，HPV⁃56：11 例；合并亚型种类：合并1 种亚型者：45 例，合并2 种及以上者：37 例。两组患者一般资料对比差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究已经院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

对照组：予以人干扰素α⁃2b 凝胶（兆科药业有限公司，国药准字：S20010054，规格10 万IU/g）1 g/次，隔日一次，放于阴道后穹隆部位，隔日1 次，10 次为1 个疗程，20 天为1 个疗程，总治疗3 个疗程。研究组：在对照组上协同乳杆菌活菌胶囊（内蒙古双奇药业股份有限公司，国药准字：S20030005，规格：0.25 g/粒）1 粒/次，隔日一次，放于阴道后穹隆部位，隔日1 次，10 次为1 疗程，20 天为1 个疗程，与人干扰素α⁃2b 凝胶交替使用，总治疗3 个疗程。所有患者月经期间禁用，用药期间使用工具避孕。

1.3 观察指标

1.3.1 临床疗效［6］

在治疗3 个月、月经结束后3 天进行评估，痊愈：患者HR⁃HPV 亚型检测全都转为阴性；有效：患者HR⁃HPV 亚型检测最少一种转成阴性；无效：患者HR⁃HPV 亚型检测无转阴或阳性种类增多。总有效=治愈率+有效率。

1.3.2 宫颈局部微生态环境

在治疗3 个月后，采纳阴道微生态评分（Nugent）［7］分析评估。评判标准［8］：恢复或正常：阴道分泌物pH 值不大于4.5，Nugent 不大于3 分，菌群密度和多样性在10～999 个之间，H2O2酶和唾液酸酐酶是阴性，优势菌群是乳杆菌；未恢复：阴道分泌物pH 值大于4.5，Nugent 大于3 分，菌群密度和多样性在1～9 个之间或高于1 000 个，H2O2酶和唾液酸酐酶是阳性，优势菌群是革兰阴性球菌、杂菌与短杆菌。

1.3.3 宫颈局部微免疫状态

在治疗前和治疗3 个月后检测宫颈口周围黏液和分泌物，将无菌刷在宫颈表皮顺时针刷5圈，在保存液中充分涮洗，用5 mL PBS 缓冲液冲洗宫颈表面与阴道上端，在后穹窿吸出灌洗液3～4 mL，以2 000 r/min 转速，离心半径5 cm，离心10 min，将离心后的上清液放入EP 管内，-70℃冻存待检。利用酶联免疫法检测灌洗液中IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α、白细胞介素⁃2（Interleukin⁃2，IL⁃2）、干扰素⁃γ（interferon⁃gamma，IFN⁃γ）水平。IL⁃2、IL⁃4、IL⁃10 试剂盒由奥地利Biosource 公司提供，IFN⁃γ、TNF⁃α 试剂盒由美国R&D 公司提供。

1.3.4 宫颈病变组织吲哚胺2，3⁃双加氧酶（Indoleamine 2，3⁃Dioxygenase，IDO）和IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 表达［9］

在治疗前和治疗3 个月后采集患者宫颈病变组织细胞，利用免疫组化法测定IDO、IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达，在高倍镜下选取5 个不同区域视野，计数＞500 个细胞内阳性细胞数，采纳半定量积分法按着色深浅对染色结果和阳性细胞所占百分比进行评估。依据着色强弱进行评估，3 分：棕黄色；2 分：黄色；1 分：浅黄色；0 分：阴性。依据阳性细胞所占百分比评估，4 分：阳性细胞占比＞75%；3 分：阳性细胞占比50%～75%；2 分：阳性细胞占比10%～50%；1 分：阳性细胞占比≤10%。总分数=着色强弱分数+阳性细胞分数。依据总分进行结果判定，强阳性：≥6 分；中度阳性：4～5 分；弱阳性：2～3 分；阴性：0～1 分。总阳性率=［（强阳性+弱阳性+中度阳性）/总例数］×100%。试剂盒为上海研生有限公司提供。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）描述，两两间使用t检验；计数数据采用n（%）表示，并采用χ2检验；均以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效

治疗后，对照组总有效率为83.54%，研究组总有效率为93.90%，对照组总有效率比研究组低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组临床疗效比较［n（%）］Table 1 Comparison of clinical efficacy between the two groups［n（%）］

2.2 宫颈局部微生态环境

治疗后，研究组阴道微生态环境恢复率（92.68%）比对照组（82.28%）高，pH 值与Nugent 评分均比对照组低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组宫颈局部微生态环境比较［n（%），（）］Table 2 Comparison of local microecological environment of cervix between the two groups［n（%），（）］

表2 两组宫颈局部微生态环境比较［n（%），（）］Table 2 Comparison of local microecological environment of cervix between the two groups［n（%），（）］

2.3 宫颈局部微免疫状态

治疗后，两组IL⁃2、IFN⁃γ 细胞因子水平均上升，且研究组比对照组高；两组IL⁃4、IL⁃10、TNF⁃α水平均下降，且研究组比对照组低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 两组宫颈局部微免疫状态比较（）Table 3 Comparison of local cervical microimmune status between the two groups（）

表3 两组宫颈局部微免疫状态比较（）Table 3 Comparison of local cervical microimmune status between the two groups（）

注：与同组治疗前比较，aP＜0.05。

2.4 宫颈病变组织IDO 和IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达

治疗后，两组IDO、IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达率比治疗前低，且研究组比对照组低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4、图1。

图1 IDO、IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性阴性免疫组化图（免疫组化染色，×100）Figure 1 Positive and negative immunohistochemical pictures of IDO，IL⁃10，IL⁃4，and TNF⁃α（immunohistochemical staining，×100）

表4 两组宫颈病变组织IDO 和IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达比较［n（%）］Table 4 Comparison of IDO，IL⁃10，IL⁃4，TNF⁃α positive expression in cervical lesions between the two groups［n（%）］

3 讨论

HSIL 为宫颈癌的癌前病变，HR⁃HPV 感染是导致HSIL 的主要因素，临床中对于HSIL 患者常利用CKC 手术进行治疗，而大部分HSIL 患者CKC 术后仍有HR⁃HPV 持续感染，从而引起疾病复发率的增高［10］。因此，需对HSIL 患者CKC 术后伴HR⁃HPV 感染进行有效治疗，以防止疾病的复发。目前，临床常采用人干扰素α⁃2b 药物来治疗伴有HR⁃HPV 感染HSIL 患者，通过与细胞表面特异性受体结合产生抑制细菌繁殖来达到抗病毒、调节免疫的效果［11］。研究表明，在人干扰素α⁃2b 上联合乳酸菌阴道胶囊治疗宫颈HR⁃HPV持续感染患者，能明显提高患者转阴率［12］。本研究中结果显示：研究组临床总有效率比对照组高，研究结果与上述学者研究结果趋同，表明在干扰素基础上辅以乳杆菌活菌胶囊治疗更能促进患者HR⁃HPV 感染转阴，提高临床治愈率。

乳杆菌活菌胶囊为一种活菌制剂，其可用来补充阴道中乳酸杆菌，调节阴道内菌群平稳。既往研究表明，乳杆菌活菌胶囊对HR⁃HPV 感染患者阴道微生态和炎性因子有明显改善作用，其能加快阴道微生态恢复，控制HPV 的高危性感染［13］。本研究进一步分析宫颈局部微生态环境和微免疫状态及IDO、IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达，结果显示：研究组阴道微生态环境恢复率比对照组高，且研究组pH 值与Nugent 评分均比对照组低；两组IL⁃2、IFN⁃γ 细胞因子水平均上升，且研究组比对照组高；两组IL⁃4、IL⁃10、TNF⁃α 水平均下降，且研究组比对照组低；两组宫颈病变组织IDO、IL⁃10、IL⁃4、TNF⁃α 阳性表达率都比治疗前低，且研究组比对照组低。表明乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α⁃2b 凝胶能更有效改善宫颈组织HPV 感染情况，维持微生态环境平衡，提高机体免疫能力，降低炎性反应。分析原因：人干扰素与受体结合后，可减少HPV 蛋白合成，抑制HPV 内DNA 转录和复制，从而起到抗病毒作用。乳杆菌活菌胶囊可黏附在阴道上皮表面，防止致病菌的繁殖附着，维持阴道内菌群平衡；且乳杆菌活菌胶囊可以恢复阴道上皮细胞天然免疫功能，通过免疫功能上调IL⁃2、IFN⁃γ 因子水平，下调IL⁃4、IL⁃10、TNF⁃α 因子水平，保持阴道内部菌群免疫应答正常状态［14］。同时乳杆菌活菌胶囊可提高患者免疫调节功能，加强宫颈内部菌群自我保护作用，降低炎性因子IL⁃4、IL⁃10、TNF⁃α 水平，控制炎症反应，从而减轻机体感染情况，抑制HSIL癌变加重。

综上所述，应用乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α⁃2b 凝胶治疗HSIL 患者CKC 术后伴HR⁃HPV感染疗效更佳，有利于维持稳定宫颈微生态环境，提高免疫调节，降低炎症反应。