皮肤恶性黑色素瘤血清miR⁃211、miR⁃128 水平及与疗效关系

刘月丽 朱林 魏星 吴勇

皮肤恶性黑色素瘤（cutaneous malignant mela⁃noma，CMM）是侵袭性最强的皮肤恶性肿瘤之一，占皮肤恶性肿瘤3%左右，CMM 在头面部、背部、四肢均可发生［1］。我国IV 期CMM 患者5 年生存率仅为4.6%［2］。早诊断、早治疗是延长CMM 患者生存期、提高患者生命质量的关键，寻找与CMM诊断、疗效新型生物标志物具有重要意义［3］。微小RNA（microRNA，miRNA）是一种内源性非编码单链RNA，其主要通过信使RNA 降解或抑制转录后翻译，参与基因表达调控［4］。相关文献指出［5］，miRNA 的表达和肿瘤发生发展关联密切，其能通过发挥抑癌基因、促癌基因或肿瘤耐药基因角色影响肿瘤疗效及预后，可为肿瘤预后判断、靶向治疗等提供依据。微小RNA⁃211（microRNA⁃211，miR⁃211）作用广泛，研究表明miR⁃211与多种肿瘤、心脑血管疾病等关联密切［6］。微小RNA⁃128（microRNA⁃128，miR⁃128）是在神经系统中表达较活跃的一种miRNA，近年来有研究证实，miR⁃128参与多种恶性肿瘤细胞增殖、分化、侵袭、凋亡等过程，与肿瘤诊断、预后等有关［7］。为此，本研究将探究CMM 患者血清miR⁃211、miR⁃128水平及与疗效关系，旨在为CMM 治疗评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年7 月至2022 年6 月期间河南中医药大学第三附属医院收治的120 例CMM 患者为研究对象，设为CMM 组。纳入标准：①参照《中国黑色素瘤诊治指南》［8］中CMM 诊断标准，且均经病理检查明确诊断及分期；②年龄≥18 岁；③临床、病理资料完整；④入组前未经放化疗；⑤可配合治疗及随访。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②存在严重心脑血管疾病、感染性疾病、重要脏器功能不全、免疫系统疾病、血液病；③存在皮肤以外的原发病灶；④精神病史。另选取同期90 例非肿瘤皮肤病患者为对照组。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，患者均对研究知情同意。

1.2 方法

所有研究对象入组72 h 内采集静脉血标本3 mL，采用湘仪TG16⁃WS 台式高速离心机，4℃条件下经3 000 r/min 离心20 min，离心半径10 cm，留取上清液于-80℃条件保存备用。采用Trizol 试剂盒提取总RNA（天根生化科技有限公司），通过聚合酶链式反应逆转录合成cDNA，采用实时荧光定量PCR 法测定miR⁃211、miR⁃128表达水平。

1.3 观察指标

①记录患者血清miR⁃211、miR⁃128表达水平；②收集患者临床病理资料，包括肿瘤部位、肿瘤最大径、病理类型、有无溃疡、分化程度、淋巴结转移、临床分期、Ki⁃67 指数，比较不同病理特征患者血清miR⁃211、miR⁃128表达情况。③参照《中国黑色素瘤诊治指南》［9］分为完全缓解、部分缓解、疾病稳定及疾病进展，其中完全缓解、部分缓解视为缓解（缓解组），疾病稳定、疾病进展视为未缓解（未缓解组），比较治疗后不同疗效患者临床资料及血清miR⁃211、miR⁃128表达水平及影响疗效危险因素。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 CMM 组与对照组血清miR⁃211、miR⁃128 表达比较

CMM 组血清miR⁃211、miR⁃128表达分别为（2.58±0.62）和（0.36±0.09），均低于对照组的（4.45±0.87）和（1.86±0.32），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 不同病理特征患者血清miR⁃211、miR⁃128 表达比较

不同病理类型、分化程度、淋巴结转移、临床分期、Ki⁃67 指数患者血清miR⁃211表达比较差异有统计学意义（P＜0.05）；不同分化程度、淋巴结转移、临床分期患者血清miR⁃128表达比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同病理特征患者血清miR⁃211、miR⁃128 表达比较（）Table 1 Comparison of expressions of serum miR⁃211 and miR⁃128 among patients with different pathological characteristics（）

表1 不同病理特征患者血清miR⁃211、miR⁃128 表达比较（）Table 1 Comparison of expressions of serum miR⁃211 and miR⁃128 among patients with different pathological characteristics（）

2.3 患者实体瘤疗效情况

治疗后，120 例CMM 患者中，完全缓解47 例，部分缓解35 例，疾病稳定24 例，疾病进展14 例，缓解率为68.33%（82/120）。

2.4 缓解组与未缓解组临床资料比较

缓解组与未缓解组病理类型、分化程度、有无淋巴结转移、临床分期、Ki⁃67 指数水平、是否手术比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 缓解组与未缓解组临床资料比较［n（%）］Table 2 Comparison of clinical data between remission group and non⁃remission group［n（%）］

2.5 治疗后缓解组与未缓解组血清miR⁃211、miR⁃128 表达比较

缓解组血清miR⁃211、miR⁃128表达量分别为（3.05±0.58）和（0.41±0.10），均高于未缓解组的（1.56±0.46）和（0.26±0.06），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.6 影响CMM 患者疗效的危险因素分析

以患者实体瘤疗效状态为因变量（缓解=0，未缓解=1），以临床病理特征及血清miR⁃211、miR⁃128表达为自变量，将单因素分析中差异有统计学意义因素纳入多因素Logistic 回归模型，结果显示，低分化、淋巴结转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、miR⁃211低表达、miR⁃128低表达是影响患者疗效的危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响CMM 患者疗效的危险因素分析Table 3 Analysis of risk factors affecting the efficacy in patients with CMM

3 讨论

miR⁃211位于XP11.3 染色体上，其直接靶基因如NFAT5、IGF2R、TGFBR2等与免疫调节、细胞周期、侵袭转移等关联密切，可影响肿瘤细胞增殖、侵袭过程［9］。本文结果显示，CMM 患者血清miR⁃211表达明显低于非肿瘤皮肤病患者。Babapoor等［10］研究指出，黑色素瘤组织miRNA⁃211 表达明显低于色素痣，其诊断黑色素瘤的敏感性、特异性可达90%和86.2%，该研究认为miRNA⁃211 对黑色素瘤有诊断价值，也说明miRNA⁃211 可能参与黑色素瘤发生，与本研究结果相似。本研究还显示，血清miR⁃211在不同病理类型、分化程度、淋巴结转移、临床分期、Ki⁃67 指数患者中表达有明显差异，提示miR⁃211可能与CMM 增殖、分化、侵袭、转移等病理过程有关。国内研究指出［11］，miR⁃211在黑素瘤组织及恶性黑素瘤细胞中均呈明显低表达，而增加miR⁃211在黑素瘤中的表达，能明显下调黑素瘤细胞克隆形成力及肿瘤侵袭力；该研究还显示，miR⁃211表达上调后，与恶性肿瘤侵袭性有关的基质金属蛋白酶16 mRNA 表达明显下调，MMP⁃16可能是miR⁃211下游靶基因。本研究分析发现，缓解组血清miR⁃211表达更高，血清miR⁃211低表达是患者疗效不佳的危险因素。

miR⁃128定位于人染色体2q21.3 和3p22.3 上，其在神经系统特异性高表达，在维持神经系统发育及正常生理功能中起重要作用。近年来有研究认为，miR⁃128还可以影响多种肿瘤细胞增殖、分化、侵袭、凋亡等过程，其表达失调涉及多种机制，如染色体中miR⁃128位点杂合子扩增或缺失、miR⁃128基因启动子区甲基化异常、miR⁃128加工过程异常等，与肿瘤生物学行为有密切关联［12］。本文结果显示，CMM 患者血清miR⁃128表达明显低于非肿瘤皮肤病患者，且与患者分化程度、淋巴结转移及临床分期有关，提示miR⁃128与CMM 的发生及病理过程有关。既往有研究指出［13］，卵巢癌患者血清miR⁃128表达明显下降，且与患者分化程度、淋巴结转移、FIGO 分期等有关，认为miR⁃128可能作为一种抑癌基因影响卵巢癌发生发展。目前关于miR⁃128影响CMM 侵袭、转移的机制尚不完全清楚，宋昊等［14］研究显示，miR⁃128可能通过靶向作用于人黑色素瘤组织中趋化因子CCL18基因的3′UTR，逆转CCL18诱导的黑素瘤细胞侵袭、转移过程，从而对CMM 有抑制作用。本研究进一步结果显示，缓解组血清miR⁃128表达较未缓解组高，血清miR⁃128低表达是患者疗效不佳的危险因素，说明miR⁃128或可作为患者疗效预测指标。

综上所述，CMM 患者血清miR⁃211、miR⁃128表达水平明显降低，两指标均与患者临床病理特征及疗效有关，具有一定参考价值。