分化型甲状腺癌组织中TTF-1、Galectin-3表达水平与患者临床表现、预后的关系*

史良平,王传彬,程义壮,赵 玮,夏梦华,毕丽琴

安徽省肿瘤医院:1.核医学科;2.影像科,安徽合肥 230000

甲状腺癌分为分化型甲状腺癌(DTC)和未分化型甲状腺癌,DTC起自甲状腺滤泡上皮,约占90%,其中甲状腺乳头状癌(PTC)是最为常见的病理类型,占内分泌系统恶性肿瘤的90%,占全身恶性肿瘤的1%,且患病率整体呈上升趋势,发病不断年轻化[1]。大部分DTC患者的恶性度较低、生长缓慢且预后较好,但仍有部分患者因自身免疫缺陷等因素在治疗后发生复发或转移,甚至死亡[2]。因此,寻找更有价值的分子生物学标志物对临床具有重要意义。甲状腺转录因子-1(TTF-1)是由2个内含子和3个外显子组成的含有同源异型域的转录因子,位于染色体14q13.3,已证实TTF-1与多种癌症发展密切相关[3]。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)是一种可溶性的β-半乳糖苷结合蛋白,可在细胞质和细胞核中被检测出来[4-5]。二者与DTC患者关系的研究较为少见,故本文拟分析DTC患者组织中TTF-1和Galectin-3的表达情况,探讨二者与DTC患者临床表现、预后的关系,旨在为临床提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月1日至2020年5月30日本院收治的76例DTC患者作为研究对象,将手术过程中取得的癌组织标本纳入DTC组(n=76),将对应的癌旁组织标本纳入癌旁组(n=76)。年龄为20～74岁,平均(47.69±8.47)岁;男29例、女47例。纳入标准:(1)符合DTC诊断标准[6],且经病理活检明确诊断;(2)均为初诊患者,入院前未接受过抗癌治疗。 排除标准:(1)合并其他部位恶性肿瘤;(2)妊娠或哺乳期女性;(3)临床资料缺失、出院后失访及拒绝参与本研究。本研究已经本院医学伦理委员会审批通过,患者及监护人知情同意。

1.2仪器与试剂 鼠抗人TTF-1单克隆抗体(北京中杉科技有限公司)、鼠抗人Galectin-3单克隆抗体(北京中山金桥生物技术有限公司),DAB染色试剂盒(北京中山金桥生物技术有限公司)。

1.3方法

1.3.1TTF-1、Galectin-3检测 采用免疫组化法检测TTF-1、Galectin-3在DTC组及癌旁组的表达情况,具体操作严格参考使用说明书进行。首先将手术取得的组织标本进行固定(10%甲醛溶液,4 h)后,石蜡包埋、切片(厚度:5 μm)及脱蜡(二甲苯,20 min)处置;然后进行孵育(0.3%过氧化氢溶液,30 min)、磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗(3次,每次5 min),加入生物素标记的二抗,室温孵育30 min,PBS冲洗后DAB 染色试剂盒显色,苏木素复染,中性树胶封片,光学显微镜下观察结果。

1.3.2结果判定 由2位经验丰富的病理医师采用双盲的形式对结果进行评定(取均值),采用半定量分析法判读染色结果[7]。TTF-1、Galectin-3染色以细胞质或细胞核或细胞膜上出现棕黄色颗粒或者黄色颗粒且高于背景的非特异性着色即为阳性细胞。阳性细胞百分比评分:总分0～4分,阳性细胞百分比>80%为4分;阳性细胞百分比 50%～80%为3分;阳性细胞百分比10%～<50%为2分;阳性细胞百分比<10%为1分;没有阳性细胞为0分。染色强度评分:把细胞质或核膜呈棕褐色、棕黄色、浅黄色、无色分别计3分、2分、1分、0分。染色指数=染色强度评分+阳性细胞百分比评分,总分<4分即可判断为阴性表达,≥4分可判断为阳性表达。

1.3.3预后 DTC患者出院后通过用定期门诊复查、电话随访等方式连续随访3年,登记患者的生存情况,随访截止时间2023年5月30日。

1.4统计学处理 采用SPSS23.0统计软件进行数据分析,TTF-1、Galectin-3表达水平等计数资料采用n和百分比(%)描述,采用χ2检验分析TTF-1、Galectin-3表达与DTC患者病理特征的关系,采用多因素Cox回归分析探讨影响DTC患者预后的因素,双侧检验水准为α=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1TTF-1、Galectin-3在DTC组及癌旁组中的表达情况比较 DTC组TTF-1、Galectin-3阳性表达率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1、2。

注:TTF-1在DTC组中阳性表达、TTF-1在癌旁组中阴性表达。

注:Galectin-3在DTC组中阳性表达、Galectin-3在癌旁组中阴性表达。

表1 TTF-1、Galectin-3在DTC组及癌旁组中的表达情况比较[n(%)]

2.2TTF-1、Galectin-3表达与DTC患者临床病理特征的关系 TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、组织分型为PTC、有淋巴结转移的DTC患者TTF-1阳性表达率、Galectin-3阳性表达率高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、组织分型为滤泡状甲状腺癌(FTC)、无淋巴结转移的DTC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 TTF-1、Galectin-3表达与DTC患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3DTC患者预后生存情况及单因素分析 76例DTC患者出院后连续随访3年,61例患者存活,总生存率为80.26%(61/76)。DTC患者的3年总生存率与TNM分期、分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移有关(P<0.05);TTF-1阴性、Galectin-3阴性DTC患者的3年总生存率高于TTF-1阳性、Galectin-3阳性DTC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 DTC患者预后的单因素分析[n(%)]

2.4DTC患者预后的多因素Cox回归分析 将DTC患者预后作为因变量,与单因素分析中有意义的指标作为自变量进行多因素Cox回归分析,结果显示,有淋巴结转移、TTF-1阳性、Galectin-3阳性是DTC患者预后的影响因素(P<0.05)。见表4。

表4 NSCLC患者预后的多因素Cox回归分析

3 讨 论

甲状腺癌已成为内分泌系统中最常见的恶性肿瘤[8-9]。因此,寻找与DTC病情进展有关的生物学标志物,对提高患者临床疗效及生活质量非常关键。TTF-1是NKx-2基因家族中含内转录因子同源结构的一个成员,TTF-1包含378个氨基酸,在人染色体位于14q13,TTF-1在甲状腺组织中呈特异性表达,在甲状腺滤泡上皮中激活甲状腺球蛋白及甲状腺过氧化物酶等基因的转录及活化[10]。陈国群[11]在分析TTF-1与小细胞肺癌患者的关系时发现,TTF-1是影响小细胞肺癌患者预后的独立危险因素。邱爽等[12]研究发现,TTF-1与甲状腺微小癌患者病理因素相关,可为临床诊断及评估病情严重程度提供依据。本研究结果显示,DTC组TTF-1阳性表达率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05),提示TTF-1与DTC关系密切。对TTF-1与DTC患者临床特征的关系进行深入分析发现,TNM分期高、分化程度低、组织分型为PTC、有淋巴结转移的DTC患者TTF-1阳性表达率更高,证实了TTF-1参与DTC的发生及发展。在甲状腺发生过程中,TTF-1表达于甲状腺前体细胞和甲状腺滤泡细胞,其编码基因的持续表达可维持甲状腺表型、功能及组织分化状态[13]。甲状腺癌的发生是基因突变的TTF-1不能与靶DNA相结合,使其失去调控功能,导致甲状腺细胞不能正常分化、成熟,甚至引发恶变,乳头状甲状腺癌便是与错义突变的TTF-1导致339位密码子丙氨酸被缬氨酸取代有关,进而推测TTF-1呈高水平表达与DTC患者癌细胞增殖能力增强有关[14-15]。本研究结果显示,TTF-1阴性DTC患者的3年总生存率高于TTF-1阳性DTC患者,差异有统计学意义(P<0.05),多因素Cox回归分析显示,TTF-1阳性是DTC患者预后的影响因素(P<0.05)。提示TTF-1与DTC患者的预后有关,可作为评估患者预后的生物学标志物。

Galectin-3是凝集素蛋白家族成员中唯一的嵌合型,由氨基末端区域与羧基末端碳水化合物识别区域融合组成的多肤,可参与许多生理、病理发生过程,例如细胞生长与凋亡、基因转录的调控等,在甲状腺细胞中通过与TTF-1相互作用来调节基因转录[16]。臧荣发等[17]研究发现,结肠癌患者血清Galectin-3与5年随访死亡情况呈正相关,是影响结肠癌患者生存率的独立危险因素。位嘉等[18]在研究Galectin-3与PTC的关系时发现,Galectin-3在PTC组织中的阳性表达率高,灵敏度与特异度均较高,可作为诊断PTC的重要标志物。本研究结果显示,DTC组Galectin-3阳性表达率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05),提示Galectin-3与DTC关系密切。对Galectin-3与DTC患者临床特征的关系进行深入分析发现,TNM分期高、分化程度低、组织分型为PTC、有淋巴结转移的DTC患者Galectin-3阳性表达率更高,证实了Galectin-3参与DTC的发生及发展。Galectin-3主要存在于活动的巨噬细胞、嗜酸性细胞、上皮细胞(如甲状腺、肠)的细胞质中,可与其特异性受体相结合,促使DTC患者癌细胞异常增殖,影响肿瘤细胞的黏附功能,导致肿瘤淋巴结转移率高、扩散快,进而推测Galectin-3呈高水平表达与DTC患者癌细胞增殖能力增强有关[19-20]。本研究结果显示,Galectin-3阴性DTC患者的3年总生存率高于Galectin-3阳性DTC患者,差异有统计学意义(P<0.05),多因素Cox回归分析显示,Galectin-3阳性是DTC患者预后的影响因素(P<0.05)。提示Galectin-3与DTC患者的预后有关,可作为评估患者预后的生物学标志物。

综上所述,DTC患者癌组织中的TTF-1、Galectin-3阳性表达率高,且与患者TNM分期、分化程度、组织分型、淋巴结转移及3年生存率有关,可对DTC患者病情判断及预后评估有重要参考价值。但是本研究存在局限性,作为单一中心研究,且纳入样本量有限,可能存在信息、选择偏倚,今后临床可开展多中心、大样本的前瞻性研究,进一步佐证此结果。