OGDHL、FHL1在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

张春晓 张群妹 鲁广建

作者单位：453100 新乡医学院第一附属医院

非小细胞肺癌是我国常见的呼吸系统恶性肿瘤,发病率占肺恶性肿瘤的80%左右,在很多地区的发病率及死亡率均居所有类型恶性肿瘤首位[1-2]。虽目前放化疗以及手术等治疗方案在抑制恶性肿瘤转移以及改善预后等方面有较好疗效,但死亡率仍处于较高水平[3],因此有效探究疾病进展、预后对肿瘤临床治疗仍有重要意义。OGDHL作为多酶OGDH复合物的第一步和限速步骤,与多种肿瘤的发生、发展相关[4]。而4个半LIM结构域蛋白1(four and a half LIM domains protein 1,FHL1)是LIM家族中的一种新蛋白质,目前发现FHL1在平滑肌分化和迁移过程中起重要调节作用[5],但最近已有研究发现,FHL1在癌症进展中发挥重要作用[6]。但OGDHL、FHL1在非小细胞肺癌组织中表达的研究还不清楚。因此,本次研究主要是分析OGDHL、FHL1在非小细胞肺癌组织中的表达及临床预后意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

将2019年2月至2021年2月经我院确诊并进行治疗的80例非小细胞肺癌患者作为本研究对象,其中男性50例,女性30例;年龄40～80岁,平均年龄(60.56±6.58)岁。选取非小细胞肺癌癌组织标本作为癌组织组(n=80),同时选取癌旁组织(距肿瘤边缘4 cm处)标本作为癌旁组织组(n=80)。纳入标准:①非小细胞肺癌适应证、禁忌证均依据2015年版原发性肺癌诊疗规范[7]中的标准,并经病理学及细胞学确诊;②已签署知情同意书;③均接受肺癌根治性切除术治疗,且术前未接受放、化疗治疗者。排除标准:①伴有免疫系统疾病、血液性疾病以及其他恶性肿瘤疾病者;②伴有严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍者;③术前接受新辅助治疗者;④既往精神病史者;⑤临床资料不全或无法完全配合本研究者。本研究所有患者术后通过复诊或电话的方式随访至少5年。本次研究已获得我院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 采用免疫组织化学检测OGDHL、FHL1表达水平。首先将癌组织及癌旁组织标本进行固定、石蜡、包埋并连续4 μm切片,随后将切片依次经脱蜡、二甲苯脱蜡水化,再进行抗原修复,3%过氧化氢室温孵育10 min后,经PBS漂洗3次(3 min/次)。滴加入一抗(Abcam公司生产的兔抗人OGDHL单克隆抗体)4 ℃孵育过夜,PBS漂洗3次(3 min/次)后,加入二抗(Abcam公司生产的兔抗人FHL1多克隆抗体),37 ℃孵育30 min,PBS漂洗3次(3 min/次),最后经DAB显色、苏木精复染、盐酸酒精分化、氨水返蓝、脱水、封片和晾片。以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 结果判定[8]免疫组化结果由两位资深的病理科医师进行评价。随机选取5个高倍镜视野(×400)进行计数,每个视野读取细胞计数超过400个细胞,其中显微镜下的细胞质呈现浅黄色、棕黄色或者棕褐色颗粒判定为阳性细胞,随后可根据阳性细胞染色强度与阳性细胞百分比进行评分。强度评分:无色为0分、浅黄色为1分、棕色为2分、深褐色为3分。百分比评分:<25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,>75%为4分。百分比和染色强度乘积为总分,≥3分为高表达,<3分为低表达。

1.3 统计学方法

应用SPSS 23.0软件进行分析,计数资料以率和构成比(%)表示,采用χ2检验分析;采用Kaplan-Meier生存曲线分析OGDHL、FHL1表达水平与患者预后的关系,多因素Cox回归模型分析非小细胞肺癌患者预后影响因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织中OGDHL、FHL1表达水平比较

非小细胞肺癌癌组织OGDHL高表达率明显低于癌旁组织(35.00% vs 62.50%,P<0.05),FHL1高表达率明显高于癌旁组织(67.50% vs 40.00%,P<0.05),见表1。

表1 非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织中OGDHL、FHL1表达水平比较(例,%)

2.2 OGDHL、FHL1表达与非小细胞肺癌病理特征的关系

不同年龄、性别、病理类型、肿瘤直径的非小细胞肺癌患者OGDHL、FHL1表达水平比较均无明显差异(P>0.05),但不同TNM分期、淋巴结转移、分化程度的非小细胞肺癌患者OGDHL、FHL1表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 OGDHL、FHL1表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系/例

2.3 OGDHL、FHL1表达与非小细胞肺癌患者预后的关系

术后通过复诊或电话的方式随访至少5年,5年总生存率为52.50%(42/80)。OGDHL高表达患者术后5年总生存率为82.14%(23/28),低表达患者术后5年总生存率为36.54%(19/52),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);FHL1高表达患者术后5年总生存率为40.74%(22/54),低表达患者术后5年总生存率为76.92%(20/26),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 非小细胞肺癌患者预后单因素分析

单因素分析得出,TNM分期、淋巴结转移、分化程度、OGDHL表达、FHL1表达均与非小细胞肺癌患者预后密切相关(P<0.05),见表3。

表3 非小细胞肺癌患者预后单因素分析(例,%)

2.5 非小细胞肺癌患者预后多因素Cox回归分析

多因素Cox回归分析结果显示,TNM Ⅲ期、淋巴结转移、低分化、OGDHL低表达、FHL1高表达均为影响非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表4。

表4 非小细胞肺癌患者预后的多因素Cox回归分析

3 讨论

非小细胞肺癌包括肺鳞癌、肺腺癌和大细胞癌,作为目前世界上发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一,其目前死亡率已达到89%,严重威胁患者生存及生活质量[9]。虽随着近年来我国手术、化疗、放疗及生物治疗等治疗手段不断发展,非小细胞肺癌死亡率已得到改善,但5年生存率仍不足15%[10]。因此,寻找特异性、敏感性较高的标志物对控制病情进展、提高患者生存率有着重要的意义。本研究主要分析OGDHL、FHL1在非小细胞肺癌组织中的表达及临床预后意义。

OGDHL是α-酮戊二酸脱氢酶复合体中的一个亚单位,同时也是多酶OGDH复合物的第一个且限速的成分,其位于10q11.23区域10q11.23区域,目前发现其在降解葡萄糖和谷氨酸的过程中起关键作用[11]。同时OGDHL可通过参与三羧酸循环负责诱导细胞凋亡,在多种肿瘤发展中发挥重要作用[12]。本研究结果显示,非小细胞肺癌患者癌组织OGDHL高表达率明显低于癌旁组织(P<0.05),且OGDHL表达水平与非小细胞肺癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度密切相关(P<0.05),提示OGDHL表达在非小细胞肺癌组织中呈低表达,并且参与疾病的发生、发展。既往有研究显示,OGDHL在肝癌组织中表达水平低于肺癌邻近组织,低表达与更高年龄、组织学分级、分期、T分类和生存率差相关,并且可作为作为肝癌诊断和预后生物标志物[13],与本研究结果一致。本研究预后分析显示,OGDHL高表达患者术后5年总生存率明显高于低表达患者(P<0.05),提示OGDHL表达水平可能与非小细胞肺癌患者预后有关。但Mao等[14]研究显示,OGDHL低表达组甲状腺状癌患者的总生存率更高。本研究多因素Cox回归分析显示,OGDHL低表达是影响非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),证实OGDHL蛋白与非小细胞肺癌预后密切相关,可作为评估预后的肿瘤标志物。既往研究认为,OGDHL基因的异常表达可影响葡萄糖的降解和谷氨酸的合成,进而通过增加或抑制柠檬酸及脂肪酸从影响肿瘤细胞的增长;同时OGDHL基因的异常表达可导致细胞周期阻滞、细胞凋亡和能量代谢异常,从而影响肿瘤的发生及进展[15]。同时既往甲状腺癌相关研究发现,OGDHL表达下调可影响肿瘤细胞的生长期,从而导致肿瘤细胞凋亡[16]。因此可能是OGDHL在非小细胞肺癌表达降低导致肿瘤细胞的凋亡、增殖,进而影响患者预后。

FHL1是FHL蛋白家族的创始成员,其作为一类组织特异性的转录共结合子,组织特异性的表达并受发育调节,目前在骨骼肌肌病和心血管疾病中发挥重要作用外,FHL1也逐渐在肿瘤的生长、浸润和转移过程中发挥重要作用[17]。本研究结果显示,非小细胞肺癌癌组织患者FHL1高表达率明显高于癌旁组织(P<0.05),且表达水平与非小细胞肺癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度密切相关(P<0.05),说明FHL1表达水平升高可能与疾病发生有关,且可能参与疾病发展过程。既往有研究显示,FHL1在结肠癌组织中表达下降或缺失[18]。本研究显示,FHL1高表达患者术后5年总生存率明显低于低表达患者(P<0.05),说明FHL1高表达可能影响非小细胞肺癌患者预后。同时预后多因素分析显示,FHL1为影响非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),证实FHL1与非小细胞肺癌患者预后密切相关。文献中显示,FHL1磷酸化后可促进肿瘤进展,并且与肿瘤发生、浸润、转移等环节有关[19],同时有研究报道发现,FHL1在心脏、骨骼肌、卵巢、肾脏、肺和脑中高表达[20]。因此本研究认为FHL-1高表达诱导患者细胞增殖、侵袭,进而影响病情进展以及预后。

综上所述,非小细胞肺癌患者癌组织中OGDHL蛋白呈低表达,FHL1蛋白呈高表达,并且表达水平与疾病的发生、发展及预后密切相关,两者能够作为评估患者预后的有效指标。当然本研究选择样本量来自单中心,且指标只进行了单次检测,未来需进一步扩大样本纳入范围,进行多时间点指标检测,以分析更多研究结果。