奥美拉唑联合不同益生菌调节肠道菌群减轻小儿功能性消化不良

何 昀，肖 力，曹 娟，刘志刚，罗威耀

1.佛山市妇幼保健院 儿科，广东 佛山 528000；2.南方医科大学 第一临床医学院，广东 广州 510000

功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是一种常见胃肠疾病,在儿童中发病率为10%～20%[1]。奥美拉唑是一种质子泵抑制剂,是治疗FD的常用药物之一,可减轻患儿腹痛症状,但对部分患儿效果欠佳[2]。肠道菌群通过与宿主共代谢,调控肠道微生态的动态平衡,在FD发生发展中具有重要作用[3]。但目前关于选用何种益生菌治疗FD临床尚无统一意见,基于此,本研究将展开对小儿FD联合用药模式的探索,并系统观察奥美拉唑联合不同益生菌(布拉氏酵母菌散、酪酸梭菌二联活菌、双歧杆菌四联活菌片)治疗FD的疗效。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象:采用便利抽样方法选取佛山市妇幼保健院儿科2022年1月至2023年2月收治的200例FD患儿。纳入标准:1)5～13岁,能自主表达;2)罗马Ⅳ诊断标准[4],即早饱感、餐后饱胀不适、上腹烧灼感、上腹痛,且以上症状无可解释的器质性疾病,诊断前2个月至少出现以上1项或多项症状,且每月至少4 d出现症状;3)家属自愿签署知情同意书。排除标准:1)合并先天性心脏病、先天性胃肠畸形、脑性瘫痪;2)患有严重心肝肺肾或代谢性疾病者;3)合并精神疾病;4)治疗前4周服用过益生菌、质子泵抑制剂、中草药或参与其他临床研究者。经过佛山市妇幼保健院医学伦理委员会批准(2022140),受试者签署知情同意书。

1.1.2 药品:奥美拉唑[omeprazole(omep),辰欣药业股份有限公司];布拉氏酵母菌[Bladder′s yeast(yeast),法国百科达制药厂];酪酸梭菌二联活菌[clostridium butyricum(clos),科兴生物制药股份有限公司];双歧杆菌四联活菌片[bifidobacterium(bifi),杭州远大生物制药有限公司]。

1.1.3 试剂及试剂盒:白介素-6(interleukin-6,IL-6)ELISA试剂盒、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)ELISA试剂盒、白介素-1β(inter-leukin-1β,IL-1β)ELISA试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)ELISA试剂盒由上海研尊生物科技有限公司提供。胃动素(motilin,MOT)放射免疫法试剂盒、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)放射免疫法试剂盒,生长抑素(somatostatin,SS)放射免疫法试剂盒由上海极威生物科技有限公司提供。PCR试剂盒由上海信裕生物技术有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 患儿的分组及处理:将200例FD患儿随机分为奥美拉唑组(1 mg/kg,1次/d,总量不超过40 mg/次,饭前服用),奥美拉唑再分别联合布拉氏酵母菌散组(温开水冲服布拉氏酵母菌散,250 mg/次,1次/d)、酪酸梭菌二联活菌组(温开水冲服酪酸梭菌二联活菌,500 mg/次,1次/d)和双歧杆菌四联活菌片组(温开水冲服双歧杆菌四联活菌片,1.5 g/次,3次/d)治疗2周,均进行常规干预,包括调节酸碱及水电解质平衡,间隔0.5 h后给予对应药物。治疗2周。

1.2.2 ELISA检测炎性因子:分别于治疗前、后分离血清,用ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-1β及hs-CRP。

1.2.3 放射免疫法检测胃肠激素:治疗前、后用放射免疫法测血清MOT、VIP及SS表达水平。

1.2.4 Q-PCR检测肠道菌群:治疗前、后采集受试者粪便样本,提取粪便细菌总DNA,采用Q-PCR技术检测粪便样本中双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、肠球菌的基因拷贝数。双歧杆菌,上游引物:5′-CTCCTGGAAACGGGTGG-3′,下游引物:5′-GGTGT TCTTCCCGATATCTACA-3′;乳杆菌,上游引物:5′-AGCAGTAGGGAATCTTCCA-3′,下游引物:5′-ATTY CACCGCTACACATG-3′;肠杆菌,上游引物:5′-ATATGAATATC CTCCTTAG-3′,下游引物:5′-TG TAGGCTGGAGCT GCTTCG-3′;肠球菌,上游引物:5′-CCCTTATTGT TAGTTGCCATCATT-3′,下游引物:5′-ACTCGTTG TACTTCCCATTGT-3′。反应条件:95 ℃ 3 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s,27个循环;72 ℃ 10 min。

1.2.5 症状评分:在比较各组治疗前后的症状评分时,涉及到食欲不振、腹痛腹胀、恶心呕吐以及反酸嗳气等方面。症状的评分标准是:没有任何症状记为0分,轻微症状记为1分,中度症状记为2分,严重症状记为3分。

1.2.6 临床疗效:根据《诸福棠实用儿科学(第8版)》[5],治疗后上述症状评分降低≥90%者归入痊愈,降低≥60%且<90%者归入显效,降低≥30%且<60%者归入有效,降低<30%,甚至不降反增者归入无效;总有效率=(痊愈+显效+有效)/总例数×100%。

1.2.7 不良反应:统计治疗期间不良反应。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 比较各组治疗前后血清炎性因子水平

治疗后各组血清IL-6、TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平显著下降(P<0.05),3个联合治疗组显著低于奥美拉唑组(P<0.05)(图1～4)。

omep.omeprazole; yeast.omeprazole+Bladder′s yeast group; clos.omeprazole+clostridium butyricum group; bifi.omeprazole+bifidobacterium group; *P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

2.2 比较各组治疗前后胃肠激素水平

治疗后各组血清MOT水平显著升高(P<0.05),3个联合治疗组显著高于奥美拉唑组(P<0.05);治疗后各组血清VIP、SS水平显著降低(P<0.05),3个联合治疗组显著低于奥美拉唑组(P<0.05)(图5～7)。

MOT.motilin; *P<0.05 compared with omep.

VIP.vasoactive intestinal peptide; *P<0.05 compared with omep.

SS.somatostatin; *P<0.05 compared with omep.

2.3 比较各组治疗前后肠道菌群

治疗后各组肠杆菌、肠球菌显著降低(P<0.05),3个联合治疗组显著低于奥美拉唑组(P<0.05);治疗后各组双歧杆菌、乳杆菌显著升高(P<0.05),3个联合治疗组显著高于奥美拉唑组(P<0.05)(图8～11)。

*P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

*P<0.05 compared with omep.

2.4 比较各组治疗前后症状评分

治疗后各组症状评分显著降低(P<0.05),3个联合治疗组显著低于奥美拉唑组(P<0.05)(图12)。

*P<0.05 compared with omep.

2.5 比较各组临床疗效

3个联合治疗组显著高于奥美拉唑组(P<0.05)(图13)。

图13 各组临床疗效Fig 13 Clinical efficacy in each group

2.6 比较各组治疗期间不良反应

各组治疗期间不良反应发生率比较无差异(图14)。

图14 各组治疗期间不良反应Fig 14 Adverse reactions during treatment in each group

衡起重要作用。布拉氏酵母菌散属常用微生态制剂,具有消耗肠道内氧气的能力,从而形成局部低氧环境,有助于乳酸杆菌增殖,并同时抑制需氧致病菌的增殖,以达到调节肠道微生态的作用[6]。研究证实,对FD患儿采用布拉氏酵母菌散辅助治疗可减轻组食欲不振等临床症状[7]。酪酸梭菌二联活菌散是由酪酸梭状芽孢杆菌活菌菌粉和婴儿型双歧杆菌活菌菌粉组成的微生态制剂。其中,酪酸梭菌芽孢杆菌活菌菌粉在肠道内起到重要作用,它通过产生酪酸梭菌抑制有害菌的繁殖,消耗肠内氧气,抑制产生胺、吲哚等肠道毒素,并形成无氧环境。这样的环境有助于促进双歧杆菌的增殖[8]。有学者在复方胃蛋白酶颗粒治疗小儿FD的基础上加用酪酸梭菌二联活菌散,发现对减轻患儿临床症状、调节胃肠激素分泌均有益[9]。双歧杆菌四联活菌片是婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、蜡状芽孢杆菌的复方益生菌制剂。前面三种菌株具有益处,并且在肠道内黏附并大量繁殖,形成有保护作用的菌膜结构,从而重建肠道微生态屏障。同时,蜡样芽孢杆菌在肠道内定植时可以消耗肠道中的氧气,为双歧杆菌等需缺氧环境的菌种创造有利的微环境。此外,双歧杆菌四联活菌片还能够减少刺激性气体和毒性代谢物的产生,并促进胃肠道动力的恢复[10]。研究显示,在口服多潘立酮的基础上,额外服用双歧杆菌四联活菌片可通过改善胃电节律、提高血清P物质及MOT水平等机制,改善FD患儿的临床症状。这一疗法在临床实践中表现出显著的疗效[11]。本研究通过对比发现,联合益生菌治疗后治疗总有效率均有所提升,肠道菌群及临床症状明显改善,其中以布拉氏酵母菌散、酪酸梭菌二联活菌的效果更好,可能与这两种益生菌为散剂,其益生菌活性较双歧杆菌四联活菌片更好有关,且能确保治疗的安全性。

胃肠激素分泌异常是FD的典型特征,同时有研究指出,FD患儿存在促炎细胞因子释放过多的现象[12]。本研究补充益生菌后FD患儿血清IL-6、TNF-α、IL-1β、hs-CRP等促炎细胞因子水平出现下降趋势,胃肠激素分泌亦得到改善,MOT升高,VIP、SS降低。分析其原因可能在于,补充益生菌后机体有害菌群得到抑制,可减少肠道炎性介质释放,同时肠道菌群的恢复对多种酶的分泌均有帮助,利于调节胃肠激素水平。但肠道菌群与胃肠激素、炎性细胞因子间具体的调节关系涉及的具体机制尚不清楚,可作为今后研究的方向之一。