外周血中miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后的评估价值分析

张亚鹏, 任玉川, 刘 昭, 吕晓燕, 李永利

(1.山西省阳泉市第一人民医院肿瘤血液内科, 山西 阳泉 045000 2.山西省肿瘤医院呼吸一病区, 山西 太原 030013)

流行病学调查显示,全球2018年肺癌新增病例209万及死亡病例176万,至2035年全球肺癌相关死亡病例近300万[1]。80%～85%的肺癌为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其多发于中老年人群,患者早期通常无特异性症状,多数患者确诊时病情已进展至晚期,错失最佳手术时机,预后不良风险较高[2]。临床常采用姑息性放化疗、分子靶向治疗等手段治疗晚期NSCLC,其中分子靶向治疗在NSCLC患者治疗中已表现出较佳的疗效,相比于放化疗,其具有针对性强、患者耐受性好、毒性反应轻等优势[3]。NSCLC患者预后与靶向治疗效果存在联系,准确评估靶向治疗效果对优化治疗方案及促进转归具有重要的价值。现阶段临床常采用CT或MRI复查评估NSCLC患者治疗效果,同时血清肿瘤标志物也可用于辅助评估治疗效果[4]。临床报道发现,NSCLC患者癌组织中微小RNA-34b(microRNA-34b,miR-34b)呈低表达,其表达上调能抑制NSCLC A549细胞增殖及侵袭[5]。目前临床关于miR-34b与NSCLC患者靶向治疗疗效和预后关系的研究报道较少。基于此,本研究检测Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者外周血miR-34b表达水平,探寻其在靶向治疗效果及预后评估中的价值,旨在为NSCLC治疗提供新参考。

1 资料与方法

1.1临床资料：选取2020年1月至2022年1月于我院接受靶向治疗的104例NSCLC患者作为研究对象,其中男性68例,女性36例;年龄42～76岁,平均年龄(61.08±7.33)岁;鳞癌29例,腺癌75例;临床分期：Ⅲb期63例,Ⅳ期41例。纳入标准：①满足NSCLC诊断标准：临床表现：早期症状不明显,病情进展后伴有气促、发热、痰中带血、刺激性干咳、胸痛;体格检查：多数患者相关阳性体征不明显,存在不明原因且久治难愈的肺外征象,如非游走性关节疼痛、皮肌炎、杵状指(趾)等,体检显示伴有远处转移可能的表现,如皮下结节淋巴结肿大、肝肿大伴有结节等;影像学检查提示伴有肿瘤,多位于肺野周边,影像学表现为孤立性结节或占位且边界不清;②组织病理学确诊：苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)显示鳞状细胞癌形态不明确,呈实体形态的低分化癌,若p40弥漫阳性,甲状腺转录因子1阴性,推荐诊断为NSCLC,倾向鳞状细胞癌;HE显示腺癌形态不明确,呈实体形态的低分化癌,若甲状腺转录因子1或/和黏液染色阳性,p40阴性,推荐诊断为NSCLC,倾向腺癌;③临床分期为Ⅲb～Ⅳ期;④均行靶向治疗;⑤预计生存期>3个月者;⑥思维正常,具备基本表达及沟通能力;⑦近期未行其他相关治疗。排除标准：①对靶向治疗不耐受者;②继发性肺癌或小细胞肺癌者;③免疫系统疾病、活动性肺感染、血液系统疾病及其他恶性肿瘤者;④缺乏完整的临床及随访资料者;⑤精神疾病,认知及视听功能损伤者;⑥脑、心、肾等脏器损伤严重者。医院伦理委员会批准本研究。

1.2方 法

1.2.1靶向治疗方案：所有患者均基因检测显示：外显子21突变或外显子19缺失突变,予以患者吉非替尼靶向治疗：口服盐酸吉非替尼(HJ20171297,Kagamiishi Plant,Nipro Pharma Corporation),250mg/次,1次/d,30d为1个周期,治疗4个周期。

1.2.2外周血中miR-34b表达水平检测：采集患者入院后次日清晨空腹静脉血3mL,离心处理(转速3500 r/min、半径10 cm、时间10min)后取上清液,存于-80 ℃待测。实时定量PCR检测外周血中miR-34b：以RNeasy Mini Kit总RNA提取试剂盒提取血清中游离总RNA,以纯度良好的RNA样本为模板,逆转录后行PCR扩增。反应体系20μL：cDNA 4.0μL,上下游引物各1μL,ddH2O 4.0μL,2×SYBR Premix10μL。选择U6作为内参照,上游引物序列为5'-CTC GCTTCGGCAGCACA-3' ;下游引物序列为5' -AACGCTTCA GAATTTGCGT-3'。miR-34b上游引物序列为5'-GCGGTCAATCACTAACTCC-3';下游引物序列为5'-CGTGCAGGGTCCGAGGT-3'。反应条件：95℃ 30s,95℃ 5s,60℃ 30s,经过40个循环,获得CT值。以2-△△CT表示 miR-34b的相对表达量,其中△CT=miR-34b平均Ct值-U6平均Ct值。

1.3靶向治疗效果判定：治疗4个周期后,结合实体瘤疗效评价标准评估疗效,其中完全缓解：病灶消失,无新病灶出现,肿瘤标记物降至正常,并至少维持4周;部分缓解：病灶长径总和低于基线≥30%,至少维持4周;疾病稳定：病灶长径总和缩小<30%或增大>20%;疾病进展：病灶长径总和增加>20%或出现新病灶。治疗有效为部分缓解及完全缓解之和,治疗无效为疾病稳定及疾病进展之和。

1.4预后评估：靶向治疗结束后进行1年随访,每3个月随访1次,终点事件为患者全因死亡,统计患者生存情况。

2 结 果

2.1Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后情况：104例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者,经靶向治疗后,完全缓解17例、部分缓解23例、病情稳定36例,疾病进展28例。随访1年,104例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者,未出现失访者,其中生存患者32例,死亡患者72例。

2.2不同靶向治疗效果NSCLC患者外周血miR-34b表达水平比较：104例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者根据靶向治疗效果分为有效组(完全缓解+部分缓解)40例及无效组(病情稳定+疾病进展)64例。有效组外周血miR-34b表达水平为(2.25±0.49),高于无效组的(1.68±0.32)(t=7.182,P<0.05)。

2.3外周血miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的评估价值：ROC曲线显示,外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的AUC为0.856(P<0.05),截断值为1.94。见图1、表1。

表1 外周血miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的评估价值

图1 外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的ROC曲线

2.4不同预后Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者外周血miR-34b表达水平比较：104例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者根据预后分为存活组(n=32)及死亡组(n=72)。存活组外周血miR-34b表达水平为(2.48±0.36),高于死亡组的(1.64±0.29)(t=12.634,P<0.05)。

2.5外周血miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者预后的评估价值：ROC曲线显示,外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者预后的AUC为0.916(P<0.05),截断值为2.16。见图2、表2。

表2 外周血miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者预后的评估价值

图2 外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者预后的ROC曲线

2.6不同外周血miR-34b表达水平Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者的生存曲线分析：结合2.5中Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者外周血miR-34b=2.16为不良预后的临界值,104例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者中,miR-34b>2.16患者34例,其中1年死亡9例;miR-34b≤2.16患者70例,其中1年死亡63例。Log-rank检验显示,miR-34b>2.16组和miR-34b≤2.16组患者生存率比较,差异有统计学意义(χ2=27.767,P<0.05)。见图3。

图3 不同外周血miR-34b表达水平Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者的生存曲线

3 讨 论

对于错过最佳手术时机、已不可切除的Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者或是自身基础疾病导致无法耐受手术的患者,分子靶向治疗可为患者临床症状和生存率的改善带来新的希望和方向。研究指出,接受分子靶向治疗可使40%～50%晚期NSCLC患者获益,能延长生存期,对于提高患者生命质量具有积极作用[6]。但由于患者存在个体差异性,不同患者接受分子靶向治疗的效果不一,准确预测Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者治疗疗效和预后对于尽早调整治疗方案和延长患者生存期具有重要作用[7]。

本研究中Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者经分子靶向治疗后,治疗有效率为38.46%,61.54%患者治疗无效,与韩文梅等[8]报道的Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗有效率37.14%相近。进一步的研究显示,有效组外周血中miR-34b表达水平高于无效组,表明miR-34b可能参与NSCLC的发生有关,检测Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者外周血miR-34b表达水平可能有助于辅助评估靶向治疗的效果。miR-34是近年来发现与肺癌预后具有重要联系的一种miRNA分子,异常表达的miR-34水平可影响对肿瘤生物学行为的调控作用,进而影响其发生和发展[9]。有报道显示,miR-34b在前列腺癌患者血浆中呈较低表达,其水平与前列腺癌的病理分级、TNM分期等临床病理特征有关[10]。本研究发现,外周血miR-34b表达水平评估Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果的AUC为0.856,证明了外周血miR-34b表达水平对Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果具有一定的评估价值。

miR-34b已被研究指出具有抑癌作用,其在NSCLC患者外周血中的异常低表达水平可能通过与下游基因p53和MDM2形成反馈回路来调控细胞周期,抑制其促凋亡功能,进而促进癌症进展,导致其对靶向治疗药物反应降低,影响其治疗效果并进一步影响患者生存和预后情况[11]。本研究对104例行靶向治疗的Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者随访1年,结果显示,32例(30.77%)患者存活,72例(69.23%)患者死亡。本研究还发现,存活组外周血中miR-34b表达水平高于死亡组,说明miR-34b低表达还可能与晚期NSCLC患者的不良预后有关。miR-34b抑癌机制的发挥具有多重性和复杂性,除上述影响机制外,miR-34b还可抑制肿瘤干细胞的功能,低水平的miR-34b可通过直接作用于Sox等多潜能性相关基因抑制肿瘤的形成和转移;此外,下调miR-34b还可能通过激活肝细胞生长因子-肝细胞生长因子(HGF-Met)通路抑制p53磷酸化和转录活性,进而影响肿瘤细胞的增殖和转移,其表达水平与肺癌患者的淋巴结转移呈负相关[12]。本研究发现,miR-34b>2.16组和miR-34b≤2.16组患者生存率比较存在明显差异,提示外周血中miR-34b表达与患者的生存率有关。外周血miR-34b异常低表达提示晚期NSCLC患者体内肿瘤细胞的增殖和转移较强,具有更高的转移和死亡风险。

综上所述,外周血miR-34b表达水平与Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者靶向治疗效果及预后有关,检测外周血miR-34b表达水平有助于评估靶向治疗效果及预后。