41 058例新生儿遗传代谢病串联质谱检测筛查的临床分析

黄蓓，顾海燕

江苏江阴市妇幼保健院检验科，无锡 214400

新生儿遗传代谢病筛查是新生儿出生缺陷三级预防体系的核心预防措施，目的是在遗传代谢病患儿临床症状显现前实现早期诊断和及时治疗，从而降低致残疾和死亡率，改善疾病预后[1]。2002 年，国内医院开始引入串联质谱技术用于新生儿多种遗传代谢病筛查的研究，该技术开始在国内逐渐普及[2]。串联质谱法具备高通量和高效性的特点，能够一次性检测几十种氨基酸、脂肪酸以及有机酸代谢障碍性疾病。这项提高出生人口素质的新技术在国内外不断得到推广，每年约有数千万新生儿受益于此筛查，提升了人口素质，降低了新生儿遗传性疾病的发病率[3]。

有研究数据显示，在中国每3795 名新生儿中就有一人患有遗传代谢病[4]。随着筛查、检测和诊断技术的不断进步，越来越多的遗传代谢疾病病例被检测发现[5]。为了解江阴市新生儿遗传代谢病串联质谱检测筛查工作的开展情况，本研究对2019 年1 月至2022 年12 月江阴市新生儿遗传代谢病筛查工作进行回顾性分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本回顾性研究纳入2019 年1 月至2022 年12 月在江阴市出生活产并进行了串联质谱筛查的新生儿，分析其行新生儿疾病筛查的临床资料。本研究获得我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 按照国家《新生儿疾病筛查技术规范》（2010 年版）要求，新生儿出生72 h 且充分哺乳6 次后采集足跟血滴于S＆S 903 滤纸片，室温自然干燥后递送至江阴市新生儿疾病筛查中心,筛查前家长均已签署知情同意书[6]。

1.2.2 样本送检 江阴市新生儿疾病筛查中心做好标本接收的质量核查工作，遇到血斑采集有问题或卡片填写异常时及时与采血点沟通。对不符合的标本进行退回处理，做好登记并追踪至血斑重新采集送检至江阴市新生儿疾病筛查中心。筛查中心在收到标本后5 个工作日内进行检测。

1.2.3 样本检测 将编号的滤纸干血斑标本打孔置于U 型96 孔板中，加入按比例配置的工作液（含氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮），每孔100 μl，封膜后置于45℃孵育振荡器45 min，转移至V 型96 孔板中，铝箔膜覆盖室温静置2 h，上样检测。

所用的仪器与试剂包括Panthera-Puncher9 打孔仪、ACQUITY TQD 串联质谱仪、Waters 2777C自动进样器、Waters 1525 高效液相色谱仪，使用PerkinElmer 非衍生新生儿遗传代谢病筛查试剂盒（NeoBase Non-derivatized MSMS Kit），该试剂盒可检测11 种氨基酸，31 种肉碱指标和1 种酮类。

1.2.4 检测质量控制 新生儿疾病筛查中心采取一系列重要措施来确保检测全过程的筛查质量。①检验前的质量保证：筛查中心定期对辖区内的所有采血工作人员进行培训考核，考核合格后方能上岗；采集的滤纸干血片标本全程冷链运输，因为冷链递送和低温适合湿度储存可以有效延缓干血斑标本中部分氨基酸和肉碱的降解速度，提高串联质谱检测结果的准确性和可靠性，保障筛查质量[7]；仪器设备做好定期维护保养工作。②检验中的质量保证：串联质谱检测的室内质量控制参照《临床检验质量控制技术》及《临床实验室定量测定室内质量控制指南》执行；每年参加卫生部临检中心NCCL 组织的室间质量评价计划，并取得合格证书[8-9]。③检验后的质量保证：完成实验的滤纸干血片标本在2～8℃条件下密封保存至少5 年；做好筛查数据的统计分析上报工作，定期向采血机构反馈实验室检测结果；实验室检测的信息资料存档保留至少10 年，以确保数据的长期可追溯性和安全性。

1.2.5 可疑阳性召回 经过省级遗传代谢病专科培训合格的临床医师负责实验数据的解读与报告审核工作。对于初筛结果呈阳性的患儿，新筛中心立即通知相应的接产单位，尽快召回患儿再次采血复检。

1.2.6 诊断、随访与治疗 对复查结果仍异常者，转诊至无锡市妇幼保健院查尿有机酸、血生化及基因分析等检测，同时结合临床症状明确诊断。确诊病例由无锡市妇幼保健院治疗，我院遗传代谢病专职医师负责随访工作。

1.2.7 观察指标 ①初筛阳性率：初筛阳性例数/总筛查例数计算出初筛阳性；②最终筛查阳性率：最终确诊阳性例数/总筛查例数；③召回复检阳性率：复检阳性例数/召回复检总例数。④各类型遗传代谢性疾病确诊例数/总确诊例数，得出不同类型代谢性疾病在总确诊例数中的构成比。⑤疾病总阳性率=遗传代谢性疾病确诊例数/总筛查例数。

1.3 统计学处理 本研究采用描述性统计学进行数据描述分析。计数资料采用例数和率或构成比（%）来表示。

2 结果

2.1 筛查概况 2019 年1 月至2022 年12 月江阴市活产新生儿41 321 例，自愿选择参加串联质谱筛查41058 例，筛查率为99.364%；参加筛查的新生儿中，男性21208 例（51.65%），年龄3～4 d。2019—2022 年新生儿疾病初筛可疑阳性662 例，初筛阳性率为1.61%（662/41 058）；实际召回645 例，召回率为98.79%（654/662）；召回复检阳性率为0.15%（60/41 058），疾病总阳性率为0.04%（18/41 058）。其中2019 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为2.41%（237/9850）、0.18%（18/9850）、0.06%（6/9850），2020 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为1.75%（176/10 056）、0.18%（18/10 056）、0.07%（7/10 056），2021 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为0.80%（82/10 238）、0.08%（8/10 238）、0.0 1%（1/10 238）—2022 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为1.53%（167/10 914）、0.15%（16/10 914）、0.04%（4/10 914）。筛查概况见表1。

表1 2019—2022年新生儿疾病筛查串联质谱检测概况

2.2 阳性病例 筛查确诊病例18 例，总发病率0.04%（18/41 058）。其中氨基酸代谢病10 例，包括高苯丙氨酸血症8 例、高甲硫氨酸血 症2 例；有机酸代谢病5 例，包括甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症2 例、2-甲基丁酰辅酶A 脱氢酶缺乏症1 例、丙酸血症1 例、异丁酰辅酶A 脱氢酶缺乏症1 例；脂肪酸氧化障碍3 例，即原发性肉碱缺乏症3 例。确诊病例的串联质谱筛查结果及诊断情况见表2。

表2 阳性确诊患儿串联质谱筛查具体情况表（18例）

3 讨论

通过2019—2022 年期间开展新生儿遗传代谢病串联质谱筛查以来，江阴市共发现7 种18 例遗传代谢性疾病。尽管遗传代谢性疾病单个病种的发病率相对较低，但我市总体发病率为1/2281，接近广州市的1/2451 水平[10]，高于周边城市苏州[11]。这种发病率的差异可能一方面是由于遗传代谢病在不同地域的分布存在差异，另一方面也与筛查数量的多少相关。从表2 中可以看到，我市的三大类疾病的氨基酸代谢病、有机酸代谢病和脂肪酸代谢病，其中氨基酸代谢病占比55.56%（10/18）。确诊的病例中，发病率较高的三种疾病分别为高苯丙氨酸血症、甲基丙二酸血症及原发性肉碱缺乏症，这与国内类似研究的结果一致[2，12]。另外，我市确诊的两例甲基丙二酸血症均属于合并同型半胱氨酸的类型，表明合并同型半胱氨酸是甲基丙二酸血症常见类型[13]。在原发性肉碱缺乏症的判断中，本研究发现相关指标C0（游离肉碱）的假阳性率较高。这一现象一方面可能是因为C0本身在夏秋季呈现高值、在冬春季则呈现低值[14]。另一方面，C0 的结果易受母体因素影响，从而导致假阳性或假阴性的结果。因此，当新生儿遗传代谢病筛查显示C0 结果异常时，需要同时排除母体因素导致的继发性肉碱缺乏的可能性。

与传统分析方法相比，串联质谱技术在苯丙酮尿症的筛查方面表现出了更高的特异性。在2019 年以前，我市使用荧光法进行苯丙酮尿症的筛查，筛查阳性率达到了0.42%。然而，自2019 年起我们采用了串联质谱法，筛查阳性率显著下降至0.048%，同时召回阳性预测值高达40%。这一工作流程的改进减少了不必要的可疑阳性召回，提升了苯丙酮尿症的筛查工作效率。

自2015 年起，本筛查中心每年上报新生儿疾病筛查质量指标数据至卫生部临检中心。通过定期对这些质量指标数据的统计及回顾性分析，并采用PDCA（Plan-Do-Check-Act）循环方法，我们不断改进血斑采集的质量、标本递送和报告发放的及时性、以及实验室内质量控制达标情况等方面的工作。表1 显示，2019—2022 年新生儿疾病初筛阳性率为1.61%（662/41 058）、召回率为98.79%、召回复检阳性率为0.15%，疾病总阳性率为0.04%，其中2019 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为2.41%、0.18%、0.06%，2020 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为1.75%、0.18%、0.07%，2021年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为0.80%、0.08%、0.01%，2022 年初筛阳性率、召回复检阳性率、疾病总阳性率分别为1.53%、0.15%、0.04%，我们的初筛阳性召回率和召回复检阳性率均高于全省水平（数据来自卫生部临检中网站），这对于评估新生儿遗传代谢病筛查管理工作的成效以及筛查方法的效能等具有重要指导意义[15]。

另外，从表2 可以看出，串联质谱筛查总体来说有着较高的初筛阳性率（最高达2.06%），远高于本中心先天性甲状腺功能减低症和先天性肾上腺皮质增生症等遗传代谢病筛查项目。临床医师对筛查结果的判读依据各检测项目的截断值，因此，如果截断值设定不合理，很可能会引起假阴性或假阳性结果，从而影响临床判读的准确性。遗传代谢性疾病的发病率受地域和人种的影响，而不同出生胎龄、体重的新生儿的氨基酸、肉碱代谢水平也会存在差异[16]。因此，在设定截断值时，需要考虑多种因素。卫生健康委临床检验中心的何法霖等人通过调查指出，目前我国各筛查中心串联质谱指标的切值设置存在较大差异，建议各实验室定期进行评估和验证[17]。江阴市中心实验室目前采用的切值是主要参考试剂厂家的说明书，并根据累计的筛查数据进行了部分修改。随着检测数据和临床判读经验的积累，本中心将持续优化各项目的截断值，以降低假阳性率，提高召回阳性预测值，以更好地适应本地人群的需求。

江阴市的新生儿遗传代谢病串联质谱筛查工作开展以来，阳性病例的发现不仅拓展了本市确诊遗传代谢病的范围，也提升了临床医师在疾病识别和报告审核方面的经验，进一步推动了本市的遗传代谢病筛查工作的发展。对于有先证者的家庭，再次怀孕时应进行产前诊断，以实现优生优育，最终提升整体人口素质。值得强调的是，公共卫生项目的有效实施离不开政府机构的监管和推动。江阴市的串联质谱筛查率相对较高（99.34%）[18]，这也归功于政府相关部门对筛查工作的高度认可和持续支持。