子痫前期病人长链非编码RNA H19和长链非编码RNA HAND2-AS1表达水平与胰岛素抵抗的相关性研究

蒋天从，刘志明，谷孝月，郭婉茹，石冲，戚桂杰

作者单位：唐山市妇幼保健院产前诊断科、唐山市出生缺陷筛查与诊断重点实验室，河北 唐山063000

子痫前期是发生于妊娠20周之后的血压升高、蛋白尿及代谢紊乱现象，易导致更严重的子痫，会造成不良母婴结局，现有治疗方法一般为尽量控制病情以延长孕周，提高胎儿存活率［1-3］。胰岛素抵抗（IR）是代谢综合征的病理学基础，可引发内皮细胞功能紊乱，参与子痫前期的发病，合并IR者发生子痫前期的风险高于正常孕妇，即IR 可能是子痫前期的发病基础之一［4-5］。血管内皮损伤也是子痫前期的诱发因素之一［6］。多种长链非编码RNA（LncRNA）被发现与血管内皮损伤密切相关［7-9］，LncRNA H19在妊娠期疾病中表达异常［10］；LncRNA H19可调控氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管内皮细胞凋亡［11］，其在子痫前期疾病中的表达以及与IR 的关系有待研究。LncRNA HAND2-AS1在子痫前期血清内高表达，且与血管内皮细胞损伤相关［12］。本研究通过分析子痫前期病人血清及胎盘组织中LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平以及IR水平的变化，初步分析其参与子痫前期的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2021 年1—12 月在唐山市妇幼保健院建卡的子痫前期孕妇105 例作为研究对象，其中轻度子痫前期孕妇67 例，重度子痫前期孕妇38 例。诊断标准以及子痫前期严重程度参照2020 年妊娠期高血压疾病诊治指南［13］。纳入标准：单胎；无孕前高血压；初次妊娠。排除标准：合并心、肺、肾等功能障碍；多囊卵巢综合征。随机选取同期体检健康孕妇97 例作为对照组。收集所有孕妇年龄、身体质量指数（BMI）、孕周、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白等一般资料。

1.2 标本采集抽取子痫前期孕妇以及正常孕妇空腹静脉血，离心后分离血清，-80 ℃保存备用。待孕妇胎盘娩出后，取胎盘组织生理盐水漂洗，液氮冷冻，-80 ℃保存备用。

1.3 孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19与LncRNA HAND2-AS1水平测定通过Trizol试剂提取孕妇血清以及胎盘组织总RNA，将一定量RNA 逆转录成cDNA，通过SYBR Green PCR 试剂盒进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定，扩增条件：95 ℃预处理2 min，（95 ℃ 10 s，55 ℃ 15 s，72 ℃ 10 s）×40 次。通过2-ΔΔCt法定量LncRNA H19 与LncRNA HAND2-AS1 水平，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为二者内参对照。引物5"-3"序列：LncRNA H19 正向ATCGGTGCCTCAGCGTTCGG，反 向CTGTCCTCGCCGTCACACCG；LncRNA HAND2-AS1 正 向TGTAGTGTCGCTGGTATCGC，反 向GAGTCACAGGCAGTCGTAGA；GAPDH 正向GGATGCAGGGATGATGTTC，反向TGCACCACCAACTGCTTA。

1.4 IR测定检测孕妇空腹胰岛素（FINS）、空腹血糖（FBG）水平，计算稳态模型的IR 指数（HOMA-IR）=FINS×FBG∕22.5，用来评估个体胰岛素抵抗水平，随胰岛素抵抗水平的升高，HOMA-IR升高［14］。

1.5 统计学方法本研究数据采用SPSS 25.0 分析，本研究计量资料（年龄、BMI、孕周、收缩压、舒张压、24 h 尿 蛋 白、FBG、FINS、HOMI-IR、LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1）数据均符合正态分布，采用±s描述，组间比较采用独立样本t检验（对照组与子痫前期组、轻度子痫前期组与重度子痫前期组）；Pearson 法分析子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平与HOMI-IR相关性。以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与子痫前期孕妇一般资料比较对照组与子痫前期组年龄、BMI、孕周比较差异无统计学意义（P＞0.05）；子痫前期组病人收缩压、舒张压高于对照组（P＜0.05），且重度子痫前期病人收缩压、舒张压高于轻度子痫前期病人（P＜0.05），孕周低于轻度子痫前期组（P＜0.05），见表1。

表1 子痫前期孕妇105例与体检健康孕妇97例一般资料比较∕ ± s

表1 子痫前期孕妇105例与体检健康孕妇97例一般资料比较∕ ± s

注：BMI为身体质量指数。①为子痫前期组与对照组比较。②为重度与轻度比较。

分组对照组子痫前期组轻度重度t，P值①t，P值②舒张压∕mmHg 83.76±8.68 105.71±5.52 103.93±5.41 108.85±5.58 21.61，＜0.001 4.43，＜0.001例数97 67 38年龄∕岁29.72±2.85 29.79±2.99 30.82±3.01 29.64±2.93 0.17，0.865 1.95，0.054 BMI∕（kg∕m2）25.24±2.88 25.46±2.70 25.52±2.60 25.36±2.61 0.56，0.576 0.30，0.763孕周∕周36.72±2.96 36.56±2.87 37.30±3.94 35.28±1.84 0.39，0.697 2.98，0.001收缩压∕mmHg 111.65±8.72 163.72±9.17 151.14±9.06 175.32±9.31 41.28，＜0.001 13.01，＜0.001

2.2 对照组与子痫前期孕妇24 h 尿蛋白以及胰岛素抵抗相关指标比较与对照组相比，子痫前期组孕妇24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平升高（P＜0.05），且重度子痫前期孕妇24 h 尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR 水平高于轻度子痫前期孕妇（P＜0.05），见表2。

表2 体检健康孕妇97例与子痫前期孕妇105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比较∕ ± s

表2 体检健康孕妇97例与子痫前期孕妇105例的24 h尿蛋白、FBG、FINS、HOMI-IR水平比较∕ ± s

注：FBG 为空腹血糖，FINS为空腹胰岛素，HOMI-IR 为稳态模型的IR指数。①为子痫前期组与对照组比较。②为重度与轻度比较。

例数97 67 38 24 h尿蛋白∕mg 90.46±19.65 359.55±14.35 341.41±13.43 391.55±15.52 111.74，＜0.001 17.37，＜0.001 FBG∕（mmol∕L）4.22±0.70 5.84±0.97 5.24±0.85 6.90±1.15 13.52，＜0.001 8.44，＜0.001分组对照组子痫前期组轻度重度t，P值①t，P值②FINS∕（mU∕L）7.52±1.25 13.37±2.23 13.05±2.17 13.97±2.32 22.74，＜0.001 2.04，0.044 HOMI-IR 1.41±0.23 3.47±0.57 3.03±0.50 4.27±0.71 33.18，＜0.001 10.45，＜0.001

2.3 对照组与子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19 与LncRNA HAND2-AS1 水平比较与对照组相比，子痫前期组孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19 与LncRNA HAND2-AS1 水平升高（P＜0.05），且重度子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19 与LncRNA HAND2-AS1 水平高于轻度子痫前期孕妇（P＜0.05），见表3。

表3 体检健康孕妇97例与子痫前期孕妇105例的血清、胎盘组织lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比较∕ ± s

表3 体检健康孕妇97例与子痫前期孕妇105例的血清、胎盘组织lncRNA H19、lncRNA HAND2-AS1水平比较∕ ± s

注：LncRNA H19为长链非编码RNA H19，LncRNA HAND2-AS1为长链非编码RNA HAND2-AS1。①为子痫前期组与对照组比较。②为重度组与轻度组比较。

分组对照组子痫前期组轻度重度t，P值①例数97 LncRNA HAND2-AS1血清1.01±0.15 1.98±0.33 1.63±0.27 2.59±0.43 26.53，＜0.001 14.05，＜0.001 LncRNA H19血清1.01±0.15 2.52±1.42 2.34±0.39 2.84±0.47 10.42，＜0.001 5.86，＜0.001胎盘组织1.02±0.17 2.87±0.47 2.49±0.41 3.56±0.59 36.61，＜0.001 10.92，＜0.001 67 38 t，P值②胎盘组织1.02±0.17 3.75±0.62 3.45±0.57 4.28±0.71 41.93，＜0.001 6.55，＜0.001

2.4 子痫前期病人血清、胎盘组织间LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水平相关性相关性分析结果显示，子痫前期病人血清与胎盘组织间LncRNA H19 水平呈正相关（r=0.55，P＜0.001），血清与胎盘组织间LncRNA HAND2-AS1 水平呈正相关性（r=0.65，P＜0.001）。

2.5 子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 水 平 与HOMI-IR 相 关 性子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19 水平分别与HOMI-IR 呈正相关（r=0.53、0.59，P＜0.001）；血清、胎盘组织LncRNA HAND2-AS1 水平分别与HOMI-IR呈正相关（r=0.60、0.61，P＜0.001）。

3 讨论

子痫前期可造成严重的母婴不良结局，其发病机制仍未完全清晰。其中IR 在子痫前期临床表现出现之前就可被检测到，参与子痫前期的发展［15］。IR 是一种代谢综合征，孕妇的高营养需求会促使胰岛素储备功能发生改变，胎盘分泌一系列拮抗胰岛素激素，是孕妇的生理适应性反应，但IR 也会引发子痫前期等妊娠期代谢综合征［16］。研究显示，子痫前期病人IR 水平高于正常孕妇［17］。IR 的变化与子痫前期的发展存在必要联系，因此探求子痫前期病人IR 相关指标有助于及时确定子痫前期并行预防性治疗。

血管内皮细胞损伤是子痫前期的重要发病机制，细胞毒性物质可引起血管内皮损伤，导致血压升高，从而引发一系列病理变化。LncRNA 在表观遗传调控、细胞周期调控等生命活动中发挥重要作用，是遗传学研究热点。多种LncRNA 在子痫前期的血管内皮损伤中发挥调控作用。LncRNA H19 可调控ox-LDL 诱导的血管内皮细胞损伤，参与对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的调控［18］，促进血管新生［19］。刘明嫦［10］研究显示，LncRNA H19 可通过介导miR-Let7e-5p 靶向MMP9 抑制滋养细胞侵袭力与迁移力，导致病人发生妊娠期高血压疾病。本研究中，子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19 水平显著高于正常妊娠孕妇，且重度子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA H19 水平高于轻度子痫前期病人，提示LncRNA H19 可能参与子痫前期进程。血管内皮损伤也是IR 的病理基础之一。胰岛素可诱导内皮细胞释放一氧化氮，胰岛素抵抗时，血管内皮功能下降，表现为一氧化氮含量下降，胰岛素抵抗时，血液中游离脂肪酸含量升高，抑制内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性，一氧化氮合成减少，血管内氧自由基增多，氧自由基灭活血液中一氧化氮，血管依赖性舒张下降，胰岛素信号通路异常也可导致内皮细胞损伤［20］。冯姗姗等［21］研究显示，LncRNA H19 在2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病人中与IR 密切相关，其可能成为判定病情的生物标志物。本研究中，子痫前期病人血清和胎盘组织LncRNA H19 均与HOMI-IR 呈正相关，即LncRNA H19 可能影响子痫前期病人的IR，LncRNA H19 可能通过影响血管内皮损伤参与子痫前期进展。

LncRNA HAND2-AS1 位于人染色体4q33-34上，与HAND2 为头对头方向，在癌细胞的增殖迁移中发挥重要作用［22］。滋养细胞具有癌细胞特质，滋养细胞侵袭不足是子痫前期的主要表现之一，导致滋养细胞侵入螺旋小动脉不全，导致其未发生重铸而异常狭窄，胎盘灌注减少与缺氧。吴莉莉等［12］研究显示，LncRNA HAND2-AS1 在子痫前期胎盘中表达升高，在血管内皮细胞中敲低LncRNA HAND2-AS1 表达可促进血管内皮细胞增殖、迁移以及血管形成，可能是造成子痫前期血管内皮损伤的因素。本研究中子痫前期病人血清LncRNA HAND2-AS1水平显著高于妊娠正常孕妇，提示LncRNA HAND2-AS1 与子痫前期的发生相关，重度子痫前期病人与轻度子痫前期病人血清LncRNA HAND2-AS1 存在差异，进一步说明LncRNA HAND2-AS1 与子痫前期的发生发展相关。子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA HAND2-AS1 均与HOMI-IR 呈正相关，LncRNA HAND2-AS1 可能影响血管内皮细胞、IR 与子痫前期建立联系，血管内皮损伤可能是三者间相关性的内在联系。

综上所述，子痫前期病人LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1 高表达，二者与IR 密切相关，可能通过影响IR参与子痫前期发生发展。