蒙药清心沉香八味散对急性抑郁模型小鼠行为学及单胺类神经递质的影响*

王艳芳,宋 宽,宋昭赫,张红丽,马 勇,魏思萌

(1.内蒙古科技大学包头医学院药学院,内蒙古 包头 014040;2.内蒙古科技大学包头医学院计算机科学与技术学院;3.内蒙古包钢医院老年病科)

抑郁症(Depression)是一种临床上常见的心理障碍或情感障碍的精神类疾病,主要表现为认知功能损伤、兴趣减退、睡眠障碍、情绪紊乱等,患者心理上常有自卑、自责和自罪感,严重者则会出现自杀行为。抑郁症的病因病机较为复杂,涉及多种生理、生化及社会生活环境等因素,经常单独发病或与其他疾病伴随发生,严重困扰着人们正常的学习、工作和生活,并因其较低的治愈率,较高的复发率,极高的自杀风险,已成为全世界关注的重要精神疾病[1]。

目前,抑郁症的发病机制仍不甚明确,现有抗抑郁药的缓解率和预后率均不高,且起效缓慢,具有不同程度的副作用。因此,开发可以显著改善治疗效果、不良反应少的抗抑郁新药将具有重要的学术价值和社会经济意义[2]。传统或天然药物是新型抗抑郁药物的最重要来源之一,具有安全可靠、不良反应少、可长期服用、易被患者接受等特点[3-4]。蒙医药学是蒙古族人民在长期的医疗用药实践中不断总结完善的理论和方法,对抑郁症的认识与治疗有着自己的特色和优势[5]。蒙医学认为,构成机体的主要物质基础是希拉、赫依和巴达干。正常生理状态下,它们相互依存、相互制约,处于相对平衡的协调状态,维持机体功能的正常运行。其中赫依与心、脑及精神情志的关系最为紧密,抑郁症是由于体内赫依旺盛,并与西拉、八达干功能相抗衡而导致功能紊乱,阻塞白脉的生理性传导,影响正常的精神活动所致[6]。

本研究药物为蒙医心赫依热专用方清心沉香八味散,能宁心安神,改善气血运行,促进白脉传导,为治疗失眠、胸闷不舒,心慌气短等疾病的常用方药。本研究在蒙医药理论为指导的前提下,首次探讨了蒙药清心沉香八味散的抗抑郁作用及可能机制,为其在精神领域的开发与应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1动物 SPF级雄性昆明种小鼠,50只,采购于中国医学科学院医学实验动物研究所,初始体重18～20克,许可证号为SCXK(京)2019-0008。实验期间保持饮水和摄食自由,饲养时环境温度为(24 ± 1)℃,湿度为(55 ± 5)%,适应性喂养7 d 后进行实验研究。本实验中,动物及相关处置过程,符合动物福利要求,并通过了包头医学院实验动物管理与动物伦理委员会的审查批准。

1.2实验药品及试剂 清心沉香八味散(内蒙古库伦蒙药有限公司,批号:180830004,规格3 g/袋);盐酸氟西汀胶囊(礼来苏州制药有限公司,批号:190903,规格 20 mg/片);小鼠5-HT,DA,NE ELISA试剂盒(江苏酶免实业有限公司,批号:202009)。

1.3主要仪器 酶标仪[赛默飞世尔科技(中国)有限责任公司]; MULTISKAN GO全波长酶标仪(美国/Thermo);TG16WS高速离心机(湘仪实验室仪器开发有限公司);小鼠强迫游泳实验装置:由透明有机玻璃制成,高25 cm,内径10 cm。小鼠悬尾实验装置:为实验室自制,悬尾横杆距离地面约 30 cm。

1.4动物分组与给药方法 将实验动物按体重随机分为5组,分别为空白对照组(蒸馏水) 、阳性药对照组(盐酸氟西汀 0.02 g/kg) 及(受试蒙药清心沉香八味散高、中、低剂量组27、9、3 g/kg)。各组小鼠每日灌胃给药1次,给药容积均按10 mL/kg体重,连续7 d。

1.5小鼠悬尾实验 参照Steru等[7]报道的方法,雄性昆明种小鼠,初始体重(18±2) g,随机分为5组,每组10只。实验前60 min以灌胃方式进行给药。实验时将小鼠尾部(在距尾尖1 cm处)用胶布粘在距地面约30 cm的横杆上。小鼠在悬尾过程中会表现出行为绝望,不再用力挣扎,呈现出安静不动的状态。观察6 min,前2 min不计,只记录后4 min内小鼠停止挣扎,躯体呈现放松状态下的累积不动时间。

1.6小鼠强迫游泳实验 实验参考Porsolt等[8]报道的方法,雄性昆明种小鼠,初始体重(18±2)g,随机分为5组,每组10只。实验前60 min以灌胃方式给药。游泳装置高25 cm,内径10 cm,水深10 cm,由透明有机玻璃制成。实验中保证小鼠后爪可能触及水底同时又不足以支撑身体,水温为(25±1)℃。实验时观察6 min,前2 min不计,仅累积计算后4 min内的不动时间。实验时将小鼠放入游泳装置内,小鼠在水中出现绝望行为,表现为微蜷躯体,鼻孔露出水面,呈漂浮状态不再挣扎,可以判断为小鼠的不动行为。每只小鼠游泳完毕后,更换游泳装置内的水。

1.7样本制备 小鼠强迫游泳实验结束后采用摘除眼球方法取血,在抗凝管中静置30 min后,以3 000 r/min离心15 min,分离血浆,-80 ℃冰箱保存备用。随后迅速脱颈处死,立即取脑、冰台上分离海马组织,用磷酸缓冲液(4 ℃,pH 7.8,50 mmol/L)制成质量分数10 % 组织匀浆液,于4 ℃以3 500 r/min转速离心15 min,取上清液用于检测5-HT、DA、NE含量。

2 结果

2.1悬尾实验 与空白组相比,阳性药组(盐酸氟西汀 0.02 g/kg)、受试蒙药中剂量组(9 g/kg)对小鼠悬尾实验(TST)的不动时间明显减少(P<0.05),高剂量组(27 g/kg)、低剂量组(3 g/kg)与空白组小鼠相比虽然有缩短趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 对小鼠TST和FST不动时间的影响

2.2强迫游泳实验 与空白组相比,阳性药组、受试蒙药中剂量组、低剂量组均可显著缩短小鼠强迫游泳实验(FST)的不动时间(P<0.05),高剂量组与空白组小鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3对小鼠血浆 5-HT、DA和NE的影响 与空白组相比,阳性药组能显著升高血浆5-HT 、DA的水平,差异具有统计学意义(P<0.05),低剂量组能显著升高血浆DA的水平,差异具有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 对小鼠血浆单胺类神经递质的影响

2.4对小鼠海马 5-HT、DA和NE的影响 与空白组相比,阳性药组能显著升高海马5-HT、DA和NE水平,差异具有统计学意义(P<0.05),受试蒙药中剂量组、低剂量组能显著升高海马组织中5-HT的水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),蒙药高剂量组、中剂量组、低剂量组能显著升高海马组织中DA的水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),蒙药高剂量组能显著升高海马组织中NA的水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 对小鼠海马组织单胺类神经递质的影响

3 讨论

3.1蒙药清心沉香八味散复方分析 蒙药大多来自天然动植物以及矿物等,常以植物药为主,将各种药物研成粉末而成。其历史悠久,疗效确切 ,资源丰富,应用广泛,具有多成分、多途径、多靶位的作用特点。其治疗疾病方面重视整体调节,在抑郁症治疗领域具有极大的潜力和可开发空间。蒙医认为抑郁症是由赫依偏盛引起的,治疗以镇赫依药为主,配伍祛巴达干药物、清热药物等。清心沉香八味散是蒙医治疗由“三根”失调引起心“赫依”病症的传统经典方药,由沉香、广枣、肉豆蔻、红花、檀香、天竺黄、紫檀香、北沙参组成。沉香、广枣能调节赫依功能,有安神、镇静、清热、祛心火作用,为主药;肉豆蔻、红花、檀香、紫檀香有行气、活血、温中的功效,能有效调节心“赫依”功能,平衡“三根”,为辅药;天竺黄、北沙参则作为滋阴清热的助药[9]。八味药物合用能行气活血,补心镇静,可用于治疗失眠、焦虑、胸闷、胸痛、心慌气短、心神不安等病症,而这些病症的表现恰好与抑郁症的临床症状相一致,因此其具有治疗抑郁症的潜力,但目前尚未有其在治疗抑郁症方面的相关研究报道。

3.2动物模型的选择及对小鼠行为学的影响 抑郁症的发生是各种因素相互作用的结果。目前的各种抑郁动物模型,或多或少都存在一定的局限性,一方面,不能表现出抑郁的多种核心症状;另一方面,各种抑郁模型发生的病理生理机制不同,对已知的抗抑郁药作用程度有不同的选择性。强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)是经典的通过急性应激诱导的行为绝望模型,其基本原理相似,都是通过对实验动物施加无法逃离的应激刺激,模拟抑郁状态[10]。起初它们试图逃脱,之后产生绝望行为,保持不动姿势,实验过程中动物处在挣扎和绝望交替状态。抗抑郁剂可以减少动物的绝望行为,缩短不动时间,提高动物对应激的耐受性。这两种方法简单易行,方便有效,适用性强,对多种抗抑郁剂敏感,广泛应用于各种新型抗抑郁药物的活性筛选与评价研究中[11-13]。本研究首次使用小鼠悬尾实验和强迫游泳实验制作小鼠急性抑郁模型评价蒙药清心沉香八味散的抗抑郁功效。结果显示,蒙药清心沉香八味散可以显著减少小鼠TST和FST中的不动时间,提示其在小鼠行为绝望抑郁模型上具有一定的抗抑郁样作用。

3.3对单胺类神经递质的影响 抑郁症发病机制的研究甚多,主要涉及的有单胺类神经递质假说、受体假说、脑源性神经营养因子假说等,其中脑内单胺类神经递质假说是一种经典假说,在业内受到普遍认可[14-15]。相关研究表明,单胺类神经递质在精神类疾病中的作用极其重要,参与调节机体精神活动、情绪反应以及行为状态等,是调节大脑抑郁和焦虑情绪中不可或缺的重要物质[16]。既往研究也充分证明,其含量的降低可引起情绪抑郁、焦虑紧张、行为绝望、精神萎靡等。5-HT作为精神活动的关键神经递质,广泛参与调节情感、睡眠、记忆等多种生理活动,由于中枢神经系统内的5-HT能使神经系统功能发生紊乱,诸如焦虑、抑郁、惊恐等一系列不良情绪就会产生;DA是中枢神经系统中重要的兴奋递质,参与机体情绪调节、认知、思维等精神活动,多项研究证明抑郁症的发生与脑内 DA 含量的降低密切相关;NE作为一种重要的单胺类神经递质,具有调节注意力、学习记忆力、应激反应的功能,NE 不足会导致注意力难以集中,并且伴有不同程度记忆障碍、抑郁焦虑情绪、疲乏等。单胺类神经递质5-HT、DA、NE 的减少与抑郁症的发生密切相关,因此通过调节脑内突触间隙单胺类神经递质的含量,增强其生理功能收到很好的抗抑郁效果[17-19]。海马是大脑组织中情感反应的高级中枢,也是含有大量神经递质的关键部位,同时也是抑郁症研究中最重要的脑区,因此本实验采用ELISA 法测定行为绝望模型抑郁小鼠血浆及海马组织中5-HT、DA、 NE的水平,探讨其抗抑郁作用可能涉及的神经递质机制。结果表明,蒙药清心沉香八味散各剂量组能不同程度地升高抑郁小鼠血浆及海马组织中单胺类神经递质的含量,提示其抗抑郁作用的产生可能与其调节单胺类神经递质的含量有关。

综上所述,本研究采用科学合理的实验药理学方法,初步探讨了蒙药清心沉香八味散的抗抑郁作用与可能机制,为其在神经精神领域的开发与应用提供参考。但因抑郁症的发生是一个极其复杂的过程,其更全面的抗抑郁作用与机制评价仍有待于进一步研究阐明。