结肠癌组织THBS1表达与临床病理特征及远期生存的关系*

陈运财 王捷鹏 朱伟

(1.广东医科大学,广东 湛江 523808; 2.广东医科大学附属惠东县人民医院,广东 惠州 516300)

结肠癌是消化系统中常见的恶性肿瘤之一,据统计[1],结肠癌的发病率和死亡率在全部恶性肿瘤中占第3位和第5位,且随着饮食结构、生活方式等的改变,其发病率逐年上升。根治性手术联合术后放化疗是临床治疗结肠癌的有效手段,但结肠癌手术治疗后易复发转移,患者远期生存率低[2]。既往调查显示[3],结肠癌患者术后5年生存率仅有60%左右,故寻找能够影响结肠癌复发转移的相关因素,对提高患者的远期生存率具有重要意义。血小板凝血酶蛋白1(Thrombospondin-1,THBS1)是钙结合糖蛋白,在肿瘤发生、血管生成及血小板凝集中均发挥作用[4]。已有研究发现[5-6],THBS1可促进癌组织的侵袭和迁移能力,在一定程度上影响患者预后。但目前关于THBS1在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌患者临床病理特征和根治性手术后患者远期生存关系的相关研究较少。基于此,本研究通过免疫组化法检测结肠癌组织中THBS1的表达,探讨THBS1表达与结肠癌临床病理特征及根治性手术后远期生存的关系,以期为临床治疗结肠癌补充理论依据,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年5月—2019年4月广东医科大学附属惠东县人民医院消化科收治的行根治手术治疗的108例结肠癌患者作为研究对象,其中男64例,女44例;年龄38～73岁,平均(55.67±10.13)岁;肿瘤≤5 cm 69例,肿瘤>5 cm 39例;TNM分期[7]:Ⅰ期13例;Ⅱ期42例;Ⅲ期53例;癌组织低分化31例、中分化38例、高分化39例;肿瘤浸润至黏膜及黏膜下层42例,浸润至肌层及脏层腹膜66例;肿瘤位于左半结肠59例,位于右半结肠49例;溃疡型肿瘤57例,隆起型肿瘤37例,浸润型肿瘤14例。纳入标准:①经影像学及病理学活检确诊为结肠癌[8]。②患者均为初诊,无相关治疗史。③均行根治性手术治疗。④患者均知情并签署知情同意书。排除标准:①合并有肠道感染性疾病。②合并有严重器官功能障碍。③肿瘤发生远处转移或合并其他恶性肿瘤。④妊娠或哺乳期妇女。⑤免疫系统存在功能性障碍。⑥存在凝血功能障碍。⑦存在放、化疗禁忌者。本研究经医院伦理委员会审批。

1.2 方法

1.2.1 采用免疫组化法检测术中所取组织的THBS1表达 用10%浓度的中性甲醛缓冲液固定手术切除的结肠癌组织及癌旁正常组织,固定24 h行石蜡包埋后做连续切片,厚度4 μm;将石蜡切片于60 ℃烤箱中烘烤3～5 h后脱蜡,行梯度乙醇水化后用磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗3次,5 min/次;将切片置于PH 6.0柠檬酸钠工作液中,并于100 ℃下加热25 min,室温下自然冷却;将切片于3%的过氧化氢溶液中浸泡10 min后冲洗;滴加一抗、二抗工作液,再滴加二氨基联苯胺显色液,室温下孵育后用苏木素复染1 min,脱水并行透明处理后封片,镜下观察实验结果并拍照。每张切片根据阳性表达及染色强度综合评分,染色强度评分:细胞无染色为0分,弱染色为1分,中等强度染色为2分,强染色为3分;阳性表达评分:无阳性表达为0分,阳性表达细胞数≤25%为1分,25%<阳性表达细胞数≤50%为2分,阳性表达细胞数>50%为3分,最终得分=染色强度得分×阳性表达得分,将最终得分≥3分者定为THBS1阳性表达。

1.2.2 术后辅助化疗 对肿瘤侵犯脏层腹膜、侵犯或粘连临近器官及结构、标本检出淋巴结不足(少于12枚)、血管淋巴管浸润、神经侵犯、术前肠梗阻或穿孔的Ⅱ期及所有Ⅲ期结肠癌患者于术后1个月左右开始辅助化疗,根据患者自身情况化疗3～6个月。

1.2.3 术后随访 术后通过电话及门诊随访3年,每3个月复查1次胸片、腹部超声并行血常规、大便潜血、肿瘤标志物等实验室检查,每年复查1次腹盆部CT和结肠镜观察是否出现复发或转移,将患者因肿瘤复发转移造成的死亡作为随访终止事件,将随访期内存活及因其他事件死亡的患者数据记为截尾数据,记录并分析3年内患者的生存情况。

1.3 观察指标 ①比较结肠癌组织与癌旁正常组织中THBS1表达。②对比不同临床病理特征患者的结肠癌组织THBS1表达。③结肠癌患者术后3年的生存情况及结肠癌组织THBS1不同表达患者生存情况比较。④分析结肠癌组织中THBS1表达与结肠癌患者远期生存的关系。

2 结果

2.1 结肠癌组织与癌旁正常组织中THBS1表达比较 结肠癌组织中THBS1的阳性表达率为62.04%(67/108),癌旁正常组织中THBS1的阳性表达率为19.44%(21/108),THBS1在结肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织(2=40.577,P<0.05)。见图1。

图1 结肠癌组织与癌旁正常组织中THBS1表达(400×)

2.2 不同临床病理特征患者的结肠癌组织THBS1表达对比 不同年龄、性别、肿瘤位置、大体类型、肿瘤大小的结肠癌患者的癌组织THBS1阳性表达率无明显差异(P>0.05),TNM分期Ⅲ期、低分化、肿瘤浸润至肌层及脏层腹膜的结肠癌患者的癌组织THBS1阳性表达率均高于TNM分期Ⅰ/Ⅱ期、中/高分化、肿瘤浸润至黏膜及黏膜下层的结肠癌患者(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征患者的结肠癌组织THBS1表达比较[n(×10-2) ]

2.3 结肠癌术后3年的生存情况及结肠癌组织THBS1不同表达患者生存情况比较 108例结肠癌根治术后3年随访期间无失访患者,共有22例因肿瘤复发转移死亡,3年生存率为79.63%(86/108)。其中67例结肠癌组织THBS1阳性表达患者中19例死亡,41例结肠癌组织THBS1阴性表达患者中3例死亡,经Log-rank检验,结肠癌THBS1阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(2=6.941,P=0.008)。见图2。

图2 结肠癌组织 THBS1阳性和阴性表达患者的远期生存情况比较

2.4 结肠癌组织中THBS1表达与结肠癌患者远期生存的关系 死亡组与生存组的性别、肿瘤位置、大体类型、肿瘤大小、手术方式对比差异无统计学意义(P>0.05),死亡组中年龄>60岁、TNM分期Ⅲ期、低分化、肿瘤浸润至肌层及脏层腹膜和结肠癌组织THBS1阳性表达占比均高于生存组(P<0.05)(表2)。将上述死亡组和生存组临床资料比较中P<0.05的项目作为自变量、结肠癌患者术后3年内生存情况设为因变量进行Cox回归分析,结果显示年龄>60岁、TNM分期Ⅲ期、低分化、肿瘤浸润至肌层及脏层腹膜以及结肠癌组织THBS1阳性表达均是结肠癌患者远期生存的危险因素(P<0.05)。见表3。

表2 死亡组与生存组临床资料比较[n(×10-2) ]

表3 结肠癌患者远期生存的Cox回归分析

3 讨论

结肠癌的具体病因尚不明确,现阶段多数结肠癌为腺瘤癌变所致,且与慢性结肠炎、结肠性吸血虫病、遗传易感性有关[9]。近年来,结肠癌在治疗上已取得显著进步,临床对于未发生远端转移的结肠癌患者行根治性手术治疗及术后辅助化疗,可有效延长患者的生存时间,但结肠癌患者的远期生存率整体仍处于较低水平且个体差异大[10]。本研究随访结果显示,结肠癌患者3年内生存率为79.63%,与陆欢等[11]报道的77.78%相近,提示结肠癌患者远期生存率低,证实探讨其影响因素十分必要。

THBS1是由白细胞、血小板及内皮细胞等多种细胞分泌的一种多功能钙合糖蛋白,可在多个人体器官中表达,能调控机体内的肿瘤发生发展、血管生成、创伤修复等[12-13]。已有研究发现[14],THBS1可以作为TGF-β的生理激活因子,调控TGF-β参与肿瘤上皮-间充质转化的过程并同时促进VEGF的增加,进而加快了癌症的进展。此次研究中,THBS1在结肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织,且THBS1表达与结肠癌的TNM分期、组织分化程度、浸润深度有关,提示THBS1参与结肠癌的发生和发展。与石慧等[15]报道相符。Her等[16]研究发现,CB-5083可在癌细胞中诱导蛋白毒性且对抗结肠癌细胞p97有抑制作用,而THBS1能上调机体内的CB-5083促进结肠组织的癌变和癌组织的增殖;殷茜等[17]通过细胞实验发现THBS1表达与结肠癌恶性程度相关,上调THBS1表达可进一步促进淋巴结转移;另有研究报道[18-19],THBS1能通过吸附miR-125-5p、调节波形蛋白、N-钙粘蛋白、SOX4等表达来促进癌组织的增殖和转移、上皮间质转化,上述报道从不同方向研究了THBS1对癌症的作用机制,均说明THBS1对结肠癌的病情进展起促进作用,本研究结果与上述相关报道及分析相符。此外,本研究绘制Kaplan-Meier曲线分析结肠癌组织THBS1不同表达患者生存情况,发现结肠癌组织中THBS1阳性表达患者3年内死亡率高于阴性表达患者,且经进一步Cox回归分析发现THBS1阳性表达是结肠癌患者远期生存的危险因素。THBS1的高表达能促进正常组织癌变及癌组织的增殖、转移并抑制癌组织的凋亡,是造成多种癌症患者预后不良的危险因素[20]。既往研究显示[21],通过上调癌细胞中THBS1的表达,能促进癌细胞的增殖并抑制其凋亡,使得行手术治疗后的癌症患者易复发和死亡;Bonnet-Magnaval等[22]通过降解THBS1 mRNA使得肺癌患者癌组织中的THBS1阳性表达减少,从而延长了肺癌患者的无复发生存期,以上研究均提示了结肠癌组织THBS1阳性表达影响结肠癌患者远期生存。

此外,本研究在分析结肠癌患者远期生存的影响因素时发现,年龄、组织分化程度、TNM分期、浸润深度均是结肠癌患者远期生存的影响因素。其中年龄是所有进展性疾病预后的基线因素,随着年龄的上升,患者体内器官的生理功能下降,自我修复能力降低,后续治疗效果及预后较差,既往有研究发现结直肠癌患者年龄与部分自噬基因表达水平具有相关性,是评估预后的常规因素[23]。大量研究证实,分化程度和TNM分期是临床评价肿瘤预后的重要指标[24-25],肿瘤分化越低,其侵袭及远端转移能力越强,导致预后越差,而TNM分期越晚,提示肿瘤浸润程度越深,且往往存在淋巴结转移,术后复发及发生远端转移的可能性更高。

4 结论

结肠癌患者癌组织THBS1阳性表达率高,不同TNM分期、组织分化程度、浸润深度患者的癌组织THBS1阳性表达率差异显著,且影响行根治性手术治疗后结肠癌患者的远期生存。结肠癌组织THBS1表达可为指导临床及时干预治疗结肠癌患者提供参考与新思路,改善结肠癌患者预后。