软糖中辅酶Q10 含量检测方法研究

◎ 张敬锴，张 琪，赵英妮，陈 烁

（广东亿超生物科技有限公司，广东 汕头 515000）

辅酶Q10是一种醌环类化合物，又称泛醌10，是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物[1]，在人体呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用，可作为细胞代谢和细胞呼吸激活剂。同时，辅酶Q10是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂[2]，具有抗心肌缺血、抗心衰、抗心律失常、提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能[3-7]。根据相关的研究，辅酶Q10在碱性和光照条件下容易被破坏[8]。

2003 年，美国食品药品监督管理局（FDA）正式批准辅酶Q10作为食品添加剂广泛使用[9]。2021 年3 月1 日，我国实行的《保健品食品原料目录 辅酶Q10》允许辅酶Q10添加到膳食补充剂中[10]。目前，添加辅酶Q10的剂型大部分是片剂或软胶囊，我国已批准171 个辅酶Q10类保健食品[11]。然而，对于辅酶Q10添加到软糖中作为膳食补充剂的研究很少。因此，为检测软糖中辅酶Q10含量，本研究采用HPLC 法测定软糖基质中辅酶Q10含量。

1 试验部分

1.1 仪器与试药

1260 高效液相色谱仪（安捷伦）配紫外检测器；多管式涡旋混合器；辅酶Q10对照品（中国食品药品检定研究院）。

1.2 色谱条件

色谱柱：C18 柱，流动相；甲醇∶无水乙醇（1 ∶1）；柱温：35 ℃，进样体积：10 μL，检测波长：275 nm，进样量：10 μL。

1.3 前处理方法研究

1.3.1 选择不同的提取溶剂

辅酶Q10易溶于氯仿、苯、四氯化碳、石油醚、乙醚、丙酮、正己烷，微溶于乙醇，不溶于水、甲醇。但高比例的有机溶剂无法溶解软糖，软糖在检测时，需要先用水溶解，再选用合适的溶剂进行提取。对此，本研究分别选取石油醚、乙醚和正己烷3 种溶剂，以筛选适合的提取溶剂。

1.3.2 选择不同的用水量溶解软糖

分别加入5、10、15、20 mL 水，以筛选适合溶解软糖的用水量。

1.3.3 选择不同的溶剂提取次数

分别重复实验提取步骤1、2、3、4 次，以筛选适合的溶剂提取次数。

1.4 前处理方法研究结果分析

1.4.1 选择不同的提取溶剂

1.4.1.1 选择不同的提取溶剂结果（如表1）

表1 不同的提取溶剂结果表

1.4.1.2 检测结果分析

由表1 可见，①使用石油醚和乙醚提取检测结果，高于使用正己烷提取的结果。其原因在于正己烷和水层的提取效率没有石油醚、乙醚和水层的提取效率高。②石油醚和乙醚溶剂提取检测结果基本没有差别，但是考虑到乙醚是易制毒试剂，在日常的使用中受到严格的管控，而石油醚没有此限制，所以选用石油醚作为提取溶剂。

1.4.2 选择不同的用水量溶解软糖

1.4.2.1 选择不同的用水量结果（如表2）

表2 不同用水量结果表

1.4.2.2 检测结果分析

分别用5、10、15、20 mL 水溶解软糖后，按前处理方法处理，用10 mL 水溶解软糖检测结果最高。其原因在于用水量太少，导致软糖溶解后的水溶液太黏稠，影响提取效果；用水量太多，使用的多管式涡旋混合器无法使溶液充分涡旋混合。因此，选用10 mL水溶解软糖。

1.4.3 选择不同的溶剂提取次数

1.4.3.1 不同的溶剂提取次数结果（如表3）

表3 不同的溶剂提取次数结果表

1.4.3.2 检测结果分析

由表3 可见，重复提取步骤1、2、3 和4 次，随着提取次数增加，检测结果会相应提高，提取3 次后，检测结果基本没有变化，所以选取溶剂提取3 次。

1.5 方法学验证

根据前处理方法研究结果，确定前处理方法为取样品1 g 于离心管中，加入10 mL 水，在水浴中溶解样品，再加入石油醚15 mL，涡旋2 min，10 000 r/min 离心2 min，收集上层提取液于旋蒸瓶中，重复上述步骤共3 次，石油醚液减压旋蒸，蒸干后定量加入无水乙醇50 mL，溶解残渣，过滤后,即为供试品溶液。

1.5.1 检测限、定量限与线性范围的测定

配制辅酶Q10工作曲线，从检测结果获得回归方程：y=10.65x-8.461，R2=0.999 9， 在11.187～559.367 μg/mL 浓度范围内，有良好线性。在样品称样量为1 g、稀释倍数为50 mL 时，辅酶Q10检出限80 mg/kg，定量限267 mg/kg。

1.5.2 精密度与准确度的测定

取辅酶Q10阴性样品，分别加入一定量的辅酶Q10标准品溶液，使之成为理论浓度分别约为25、100、300 μg/mL 的样品，每个浓度平行操作6 份，照1.2的色谱条件上机测定，计算各组样品含量的RSD%，结果如表4。

表4 样品RSD 结果表

试验结果显示，辅酶Q10阴性样品3 个浓度水平加标精密度分别为1.7%、1.7%、2.5%，3 个浓度水平准确度在90.10%～104.5%之间，结果均在可接受标准范围内。

2 结论

本研究通过辅酶Q10含量测定的前处理方法进行研究，开展了针对检测限、定量限、线性、精密度和准确度的实验，检测结果均在可接受标准范围内。由此可见，本研究采用的方法可以用来测定软糖中辅酶Q10的含量。