河南省济源市规模化猪场猪圆环病毒2 型流行病学调查

栗卫东 许 军

（1 济源市农业综合行政执法支队，河南济源 459000；2 平顶山市农业综合行政执法支队，河南平顶山 467000））

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）属圆环病毒科、圆环病毒属，病毒基因组为单股负链环状DNA，病毒呈二十面体对称，无囊膜结构，是迄今为止发现的一种最小的动物病毒[1-3]。猪圆环病毒2 型（PCV2）是4个PCV 基因型中的一个[4]，也是引起猪圆环病毒病和猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）的主要致病原，通常造成猪皮炎肾病综合征（PDNS）、断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸道综合征（PRDC）、猪繁殖障碍、猪增生性坏死性肺炎（PNP） 和新生仔猪先天性震颤（PCT）等多系统功能性障碍疾病[5]。病猪表现为渐进性消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、贫血等多种症状。目前已有研究报道PCV 单独感染动物不会导致明显的PCVAD[6]，但是，PCV2 主要破坏猪免疫系统，导致感染猪产生免疫抑制，容易继发感染猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍病、猪瘟等病毒性疾病和链球菌、大肠杆菌、副猪嗜血杆菌等细菌性疾病[7-9]，使猪病诊断和防治复杂化，严重危害养猪业健康发展。1997 年，PCV2 首先在加拿大被分离鉴定出来，2001 年，郎洪武等[10]首次从我国猪体内分离到PCV2，目前该病广泛分布于我国各地养猪场，成为重点关注和防控的临床常见疫病。

为了解济源市规模化养猪场PCV2 流行情况，本研究选取5 家规模化未免疫PCV2 的养猪场中不同生长阶段的猪1 332 头，采用ELISA 法检测血清PCV2 抗体，旨在为PCV2 防治提供基础性参考资料。

1 试验材料与方法

1.1 样品来源

2021 年2—8 月，从河南省济源市5 家未接种免疫PCV2 的规模化养猪场，按5%比例选取健康仔猪、育肥猪、母猪、种公猪，进行前腔静脉或耳静脉采血5 mL，室温静置2 h，3 500 rpm 离心3 min，取上清血清，-20℃下保存备用。试验共采集血清样本1 332 份，按猪场来源、猪群不同生长阶段进行编号。

1.2 试剂和仪器

猪PCV2 酶联免疫吸附抗体检测（ELISA）试剂盒为武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，Varioskan LUX 多功能酶标仪为赛默飞世尔科技（中国）有限公司生产。实验室备有离心机、微量振荡器、37℃恒温箱、自动洗板机等。

1.3 试验方法

PCV2 血清抗体ELISA 检测方法按照试剂盒说明书操作。取预包被抗原的微孔酶标板，室温平衡20 min后，设置样本孔和标准孔，将10 μL 待检血清和40 μL样本稀释液加入样本孔，标准孔加入50 μL 不同浓度的标准品，设空白孔，加稀释液100 μL。将辣根过氧化酶（HRP）标记过的检测抗体分别加入样本孔和标准品孔，100 μL/孔，用封板膜密封板孔。37℃恒温箱温育1 h，弃封板膜，吸水纸拍干液体，再加入用去离子水20 倍稀释的20×洗涤缓冲液，静置3 min，用吸水纸拍干液体，反复5 次，每孔加入底物A、B 液各50 mL，混匀，37℃避光孵育显色15 min。每孔内加50 μL 终止液终止反应。以空白对照孔调零，在酶标仪上10 min 内以630 nm 波长测定各孔的吸光度OD630nm值。结果判定：试验成立条件为阴性对照孔平均OD630nm值＜0.25，阳性对照孔平均OD630nm值≥1.0。待检血清孔OD630nm值＞0.42 时，结果判定为阳性，待检血清孔OD630nm值＜0.38 时，结果判定为阴性，待检血清孔OD630nm值为0.38～0.42，结果判为可疑，需再检测。

2 结果与分析

2.1 5 家规模化猪场PCV2 血清抗体检测结果

由表1 可知，1 332 份血清中有444 份抗体阳性血清，平均阳性率为33.33%，阳性率介于28.25%～41.67%。在5 家规模化猪场均检测到阳性血清，表明猪场阳性率为100%。

表1 5 家规模化猪场PCV2 血清抗体检测结果

2.2 5 家规模化猪场不同生长阶段猪PCV2 血清抗体检测结果

由表2 可知，按照不同生产阶段PCV2 抗体检测结果统计分析，种公猪、母猪、仔猪、育肥猪平均阳性率分别为21.57%、36.78%、18.01%、42.62%，种公猪阳性率以1 号猪场最高，为28.57%；母猪阳性率以2 号猪场最高，为44.44%；仔猪阳性率以2 号猪场最高，为26.53%；育肥猪阳性率以1 号猪场最高，为50.00%。每个猪场的不同生长阶段猪群都有血清阳性样品。

表2 不同生长阶段猪PCV2 血清抗体检测结果

3 讨论

本次调查选择5 家未免疫PCV2 的规模化猪场中外观健康的猪群，对1 332 份血样采用ELISA 方法进行PCV2 抗体检测，共检出阳性血清样本444 份，总平均阳性率为33.33%，猪场阳性率为100%。虽然抽样个体数较少，但是具有一定代表性，表明河南济源市规模化猪场广泛存在PCV2，有的猪场相当严重，比如1 号猪场阳性率达到41.67%，高于平均值8.34 个百分点，应引起畜牧兽医部门和养殖场注意。胡慧等[11]对来自河南12 个地区的226 份猪血清样品PCV2 抗体检测，结果显示总抗体的阳性率为53.10%。刘琨等[12]报道，河南信阳地区猪PCV2 总体阳性率为48.9%。尽管本次研究的总体阳性率低于上述地区检测结果，但是PCV2 感染猪群是潜在的带毒者，病毒可以通过分泌物、鼻液和粪尿等排出，是威胁其他猪群健康的主要传染源，一旦这些携带病毒的猪群受到外界应激，机体免疫机能会下降，很容易转化为明显症状的发病猪，且继发其他致病性微生物感染。

从生猪不同生长阶段的PCV2 抗体检测结果看，种公猪、母猪、仔猪、育肥猪均存在PCV2 感染情况，仔猪阳性率最低，为18.01%，这与仔猪受母源抗体的保护有关。种公猪阳性率为21.57%，表明由于种公猪价值较高，在猪场生产中的具有重要作用，5 家猪场比较重视种公猪的饲养管理和疫苗接种。母猪、育肥猪平均阳性率分别为36.78%、42.62%，均高于平均阳性率，可能与母猪饲养周期长增加PCV2 感染机会和育肥猪后期临近出栏饲养管理不严格等因素有关，需要进一步具体检测。连慧香等[13]报道，在河南部分地区的非疫苗免疫猪群中，种用公、母猪的PCV2 抗体阳性率最低，育肥猪和断奶仔猪抗体阳性率较高。施德兰[14]等对15 家规模化猪场PCV2 抗体检测，发现哺乳仔猪总阳性率为7.20%，商品猪总阳性率为11.00%，育成猪总阳性率为40.00%，种公猪总阳性率为38.57%，种母猪总阳性率为40.76%。上述学者报道与本研究在不同阶段猪群PCV2 结果有所差异，这与受检猪场饲养管理、抽样设计等不同有关，但是在不同生长阶段的猪群均有PCV2感染方面的研究结果一致。

根据本次研究检测结果，建议济源市规模化猪场应强化商品化PCV2 疫苗接种，定期开展检测，加强饲养管理，降低或避免应激因素，提高猪群营养水平，严格消毒防疫，提高猪体免疫力，重点采取药物预防方案控制如副猪嗜血杆菌等病原菌的继发感染[15]，最大限度地降低猪群的死亡率，减少经济损失。

4 小结

本研究对2021 年济源市5 家未接种免疫PCV2 的规模化养猪场采用ELISA 进行PCV2 抗体检测，结果发现猪场感染PCV2 比较严重，猪场阳性率为100%，不同生长阶段猪群均有PCV2 感染。研究为开展PCV2 疾病的诊断与防控奠定了基础。