IL-33、IL-37、NLRP3 及NK/DC 比值与慢性乙型肝炎患者病情相关性研究

于雅丽

郑州市第七人民医院消化内科（河南郑州 450000）

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）是由于乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所造成的传染性疾病［1］。由于各种因素的影响，我国是CHB的高发区，CHB已成为一种公共卫生问题。CHB的早期症状不明显，但是随着病情的进展，很有可能会演变为肝硬化、肝癌等，具有一定的致残率与死亡率［2-3］。CHB患者的早期预测与病情判断对合理选择治疗方法与提高改善预后具有重要价值，特别是CHB在临床上具有一定的可逆性，临床医师正确及时采取合理有效的治疗措施，可逆转肝功能损害，还可在一定程度上实现治愈。在感染状态下，CHB患者白介素-33（interleukin-33，IL-33）分泌量增加，进一步加重炎症反应，导致患者出现免疫抑制，降低患者的免疫功能［4］。白细胞介素-37（interleukin-37，IL-37）属于IL-1家族，是近年发现的一种细胞因子，与IL-18具有相似的分子构造［5］。IL-37能够抑制肥大细胞产生前炎症因子，也可促使辅助性T细胞（helper T cell，Th细胞）的平衡移动到Th1和Th17，进而促进患者的炎症反应［6］。亮氨酸富集的核苷酸结合寡聚结构域蛋白-3（Nod-like receptor protein-3，NLRP3）是当前比较常见的模式识别受体，研究也比较多，可通过下调抑炎因子的表达，导致组织损伤，并促进炎症性疾病的发生［7］。肝脏固有免疫涉及了多种肝脏疾病，固有免疫细胞包括自然杀伤（natural killer，NK）细胞、树突状细胞（dendritic cell，DC）等，机体的免疫功能可由自然杀伤细胞/树突状细胞比值反映并调节［8］。本文探讨与分析了IL-33、IL-37、NLRP3及NK/DC比值与CHB患者病情相关性，以明确促进CHB发生、发展的机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象

研究时间为2020年2月—2022年9月，选择在本医院诊治的86例CHB患者作为肝炎组，同期选择86名体格检查健康者作为对照组。2组的一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。本研究已获我院伦理委员会批准。

表1 2组一般资料对比 n=86

纳入标准：肝炎组确诊为CHB；对照组无肝损害表现；无饮酒史；本次研究得到了所有入选者的同意；年龄30~75岁。排除标准：免疫系统障碍者；患有肝外胆道梗阻疾病者；合并有代谢性疾病患者；依从性不佳者；其他肝炎病毒感染患者；合并感染性疾病者；临床资料不全者；合并心脏、脑部疾病患者；合并有肺部、肾脏等器质性疾病患者。

1.2 血清IL-33、IL-37、NLRP3检测与NK/DC比值计算

采集所有入选者的空腹静脉血样本约5 mL，分为两管。第一管促凝静置30分钟后，4 ℃下3 000 r/min离心15分钟（离心半径15 cm），选择上层的血清标本在-80.0 ℃储存，采用酶联免疫吸附法对血清IL-33、IL-37、NLRP3含量进行检测，检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司，在检测中严格室内与室间质控。第二管采用枸橼酸钠抗凝30分钟，4 ℃下3 000 r/min离心15分钟（离心半径15 cm），提取单个核细胞，采用FACSCalibur流式细胞仪（购自美国BD公司）及配套试剂检测树突状细胞与自然杀伤细胞的相对含量，计算NK/DC比值。

1.3 调查资料

统计所有受试者的一般资料（年龄、性别、空腹血糖等）。同时记录与检测所有受试者的血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）含量，上述指标也反映了CHB患者的病情状况。

1.4 统计方法

选择SPSS 19.00软件进行数据分析，血清ALT含量等计量资料表示为“均数±标准差”，性别等计数资料采用率表示。计量数据的对比采用t检验分析，计数数据的对比使用四格表的χ2检验，相关性分析采用Pearson分析，预测价值分析采用受试者特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC曲线），检验水准为α=0.05。

2 结 果

2.1 血清ALT、TBIL、AST含量对比

肝炎组的血清ALT、TBIL、AST含量比对照组高（P＜0.05）。见表2。

表2 2组ALT、TBIL、AST含量对比 （n=86，）

表2 2组ALT、TBIL、AST含量对比 （n=86，）

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2.2 血清IL-33、IL-37、NLRP3含量与NK/DC比值对比

肝炎组的血清IL-33、IL-37、NLRP3含量与对照组相比提高（P＜0.05），NK/DC比值与对照组相比降低（P＜0.05）。见表3。

表3 2组血清IL-33、IL-37、NLRP3含量与NK/DC比值对比 （n=86，）

表3 2组血清IL-33、IL-37、NLRP3含量与NK/DC比值对比 （n=86，）

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2.3 相关性分析

在肝炎组中，Pearson分析显示IL-33、IL-37、NLRP3、NK/DC比值与ALT、TBIL、AST都存在相关性（P＜0.05）。见表4。

表4 IL-33、IL-37、NLRP3及NK/DC比值与CHB患者病情的相关性 （n=86）

2.4 预测价值分析

在肝炎组中，ROC曲线分析显示IL-33、IL-37、NLRP3、NK/DC比值预测肝功能的最大曲线下面积为0.705（95%CI：0.404~1.123）、0.690（95%CI：0.372~1.057）、0.670（95%CI：0.378~1.043）、0.685（95%CI：0.415~1.107），联合检测预测病情的最大曲线下面积为0.895（95%CI：0.532~1.216），联合检测的灵敏度和特异度也高于单独检测，见表5、图1。

表5 IL-33、IL-37、NLRP3、NK/DC比值单独检测和联合检测预测肝炎患者肝功能的效能

3 讨 论

CHB为临床上比较常见的传染性疾病，CHB患者发生肝硬化的概率高于非CHB患者。现代研究表明CHB的发生涉及多种因素，以多种生化指标异常为特点，其预后与遗传、环境、肝细胞再生速度、肝细胞坏死程度、治疗程度等有关［9］。CHB患者的早期预测与病情判断对合理选择治疗方法与提高改善预后具有重要价值，因此本研究具体探讨了IL-33、IL-37、NLRP3及NK/DC比值与CHB患者病情相关性。

ALT、TBIL、AST为肝功能的常用指标，其水平升高表明患者肝功能异常。本研究也显示肝炎组的血清ALT、TBIL、AST含量与健康人群相比明显增高（P＜0.05）。但ALT、TBIL、AST其特异性不强。本研究进一步显示肝炎组的血清IL-33、IL-37、NLRP3含量与对照组相比均明显提高（P＜0.05），NK/DC比值与对照组相比降低（P＜0.05），表明CHB患者多伴随有血清IL-33、IL-37、NLRP3的高表达，同时NK/DC比值会显著降低。从机制上分析，IL-33在多种类型的肝病中均有参与，相关研究认为，IL-33作用于NK细胞与T淋巴细胞，从而加速肝纤维化的过程［10］。李劲等［11］分析了105例CHB病毒感染者与健康体检者血清IL-33水平后发现，CHB组的IL-33明显高于对照组（P＜0.05）；刘琼等［12］的研究也表明，CHB患者血清IL-33水平也明显高于健康人群［（64.42±16.52）pg/mLvs（22.16±9.96）pg/mL，P＜0.05］，与本研究一致。IL-37是固有免疫反应的天然抑制因子，其可抑制炎症因子的表达，还可对固有免疫产生抑制作用，其机制可能在于通过DC抑制CD8+T细胞的产生，促进调节性T细胞的表达，从而抑制机体固有免疫，产生免疫耐受。吴苏君等［13］的研究显示，与正常对照者比较，乙肝患者及乙肝相关肝硬化患者IL-37水平升高［（292.61±59.84）pg/mLvs.（378.67±61.02）pg/mLvs（102.48±14.87）pg/mL，P＜0.05］，与本研究结果一致。HBV感染患者IL-37水平升高的原因可能在于其促进了调节性T细胞的生成，抑制CD8+T细胞表达，从而加重患者肝脏损伤。作为炎症反应的重要途径之一，NLRP3介导的炎症反应可能对CHB发生有双重影响，其中NLRP3的初级活化可导致炎症级联反应，可为组织损伤及CHB发生提供一定的基础条件，可加重患者的病情［12］。研究显示［13］，乙肝患者及乙肝相关肝硬化患者NLRP3相对表达量升高（P＜0.05），且随肝硬化患者Child-Pugh分级的升高而升高（P＜0.05），与本研究结果一致。

在HBV感染患者中，NK细胞的可抗病毒作用是通过非溶细胞或溶细胞途径发挥的，而DC主要通过分泌细胞因子、Ⅰ型干扰素在固有免疫中发挥作用，释放大量炎症因子，从而诱导炎症级联反应的发生［14］。特别是当NK细胞与DC的比例在内外各种因素刺激下降低时，NK细胞可促进DC成熟，进而增强T淋巴细胞的杀伤功能，导致机体出现肝损伤。刘斌等［15］的研究显示，CHB患者NK/DC比值降低（2.77±1.67vs10.11±4.24），与本研究结果一致。

本研究Pearson分析显示，HBV感染患者的IL-33、IL-37、NLRP3、NK/DC比值与ALT、TBIL、AST均存在相关性（P＜0.05）；在肝炎组中，ROC曲线分析显示IL-33、IL-37、NLRP3、NK/DC比值联合检测诊断价值高于单一检测。表明IL-33、IL-37、NLRP3及NK/DC比值与CHB患者病情存在密切相关性，可作为评估CHB患者病情的检验指标。当前研究对于单一指标诊断CHB的研究较多，如高海丽等［16］探讨了血清IL-33水平与CHB患者肝纤维化病情严重程度的相关性，钟权涛等［17］探讨了乙型肝炎患者血清中IL-37水平变化，另有研究报道了NLRP3［18］及NK/DC比值［15］与CHB患者病情的相关性，但对于以上指标联合诊断CHB的研究报道并不多，因而本研究可提供一定的指导价值。但本研究由于没有对不同程度CHB患者进行分层分析，因此在后续的研究中仍需深入探讨。

综上所述，CHB患者多伴随有血清IL-33、IL-37、NLRP3的高表达，并且NK/DC比值会降低，IL-33、IL-37、NLRP3及NK/DC比值与CHB患者病情存在相关性，联合检测也可预测患者的病情。