新生儿溶血病106例检测结果分析

张辉　王仪含　丁梦圆　许学明

[摘   要]   目的：对苏州市医疗机构送检的新生儿溶血病标本检测结果进行分析，探讨建立产前抗体筛检的必要性。方法：新生儿溶血病标本106例进行ABO、Rh等血型鉴定及溶血三项检测，O细胞阳性患儿的血浆及放散液进行抗体鉴定。结果：新生儿溶血病标本106例中阴性33例，阴性率31.13%，其中A型10例，B型14例，O型9例。阳性73例，阳性率68.87%；阳性标本直抗强度<1+ 53例，1+ 6例，≥2+ 14例；抗-A 30例，抗-B 23例，抗-D 7例，抗-E、-c 6例，抗-E 3例，抗-c 1例，抗-M 3例。苏州市新生儿溶血病以ABO血型系统为主，患儿为A型或B型，溶血症状轻；其次为Rh血型系统，患儿均为二胎或二胎后，以抗-D，抗-E、-c，抗-E，抗-c等抗体为主，溶血症状严重；MN血型系统抗-M抗体引起溶血少见，症状不严重。结论：孕妇产检应建立合理的产前ABO和Rh等血型鉴定及意外抗体筛检，如检出意外抗体时应进行抗体鉴定，采取干预措施，预防新生儿溶血病导致的严重后果。

[关键词]   新生儿溶血病；溶血三项；抗体筛检；抗体鉴定

[中图分类号]   R722.18 [文献标志码]   B [DOI]   10.19767/j.cnki.32-1412.2023.04.022

胎儿与新生儿溶血病（hemolytic disease of the fetus and newborn，HDFN）是由于孕妇产生的与胎儿或新生儿红细胞上抗原所对应的意外抗体穿过胎盘屏障到达胎儿体内引发的胎儿和新生儿同种免疫性溶血[1]。红细胞破坏会引起新生儿胆红素水平升高，严重时会对新生儿大脑造成永久损害—核黄疸[2]。因此，孕妇在产前进行合理抗体筛检，对阳性标本作意外抗体鉴定，提前采取干预措施，对保证母婴健康尤为必要。本文对2021年1月—2022年9月苏州市各医疗机构送至本站实验室检测的新生儿溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）标本106例检测结果进行分析，探讨建立产前抗体筛检的必要性。

1   材料与方法

1.1   试剂与仪器   单克隆IgM型抗-A、抗-B、抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-M、抗-N、抗人球蛋白试剂（IgG+C3d）、反定型细胞、谱细胞、2-巯基乙醇（上海血液生物）；抗-A，B（法国DIAGAST）；低离子抗人球蛋白卡（瑞士DiaMed GmbH）。KA-2200台式离心机（日本KUBOTA），37 ℃水浴箱（苏州珀西瓦尔），微波爐（格兰仕，输出功率800 W），微柱凝胶卡用孵育箱、离心机（BIO-RAD）。

1.2   检测方法   （1）分离血浆及红细胞：患儿全血标本3 mL，1 000 g离心5 min，血浆吸至干净试管待用。（2）红细胞洗涤：取6 mL塑料试管1支，加1 mL压积红细胞，再加生理盐水4 mL，1 000 g离心1 min，去尽上清液，重复3次。（3）配置红细胞应用液：患儿3%红细胞悬液，取1支玻璃试管，加入3 mL生理盐水，再加入100 μL洗涤后压积红细胞，混匀；1%反定型细胞悬液，取3支13×75 mm玻璃试管，分别标注Ac、Bc、Oc，各试管加入200 μL生理盐水，再加入相应100 μL商品反定型细胞，混匀。（4）ABO血型、RhD血型及直抗检测：取4支13×75 mm玻璃试管，分别标注抗-A、抗-B、抗-D、直抗，相应加入IgM型抗-A、抗-B、抗-D、抗人球蛋白试剂（IgG+C3d）50 μL，再加入50 μL 3%红细胞悬液，1 000 g离心15 s，目视观察结果。（5）放散液制备：采用微波放散法[3]，于100 mL烧杯中盛入37 ℃蒸馏水60～80 mL，洗涤后压积红细胞试管中加入1 mL生理盐水，试管置于烧杯中，将烧杯放在微波炉特定位置，20%火力加热1 min，取出试管后立即1 000 g离心1 min，取上清液。（6）将血浆（游离试验）及放散液（放散试验）70 μL加入低离子抗人球蛋白卡各3孔，再分别加入1%A细胞、B细胞、O细胞各35 μL，37 ℃孵育15 min，85 g离心10 min，目视观察结果。对O细胞阳性者，血浆及放散液进行抗体鉴定，血浆及放散液70 μL分别加入低离子抗人球蛋白卡10孔，各孔加入1～10号谱细胞各35 μL，37 ℃孵育15 min，85 g离心10 min，目视观察结果，根据谱细胞反应格局判断意外抗体类型。

1.3   结果判断

1.3.1   ABO血型不合新生儿溶血三项试验结果判断：见表1、2。

1.3.2   其他血型系统新生儿溶血三项试验结果及临床意义：根据抗体鉴定结果，用相应的50 μL抗血清+50 μL 3%红细胞悬液加入玻璃试管中，1 000 g离心15 s，检测红细胞是否存在对应抗原。试验结果及临床意义参考1.3.1。

2   结      果

2.1   阳性标本血型鉴定   106例患儿中溶血三项检测为阳性共73例，阳性率68.87%；阳性标本的血型及其在阳性标本的占比，见表3。

2.2   阳性标本直抗强度   73例阳性标本直抗强度<1+ 53例，1+ 6例，≥2+ 14例，见表4。

2.3   阴性标本情况   106例患儿中溶血三项检测为阴性共33例，阴性率31.13%；阴性标本的血型及其在阴性标本中占比：A型10例（30.30%），B型14例（42.42%），O型9例（27.27%）。

3   讨      论

母婴血型不相合导致新生儿溶血病发生，其中母婴ABO血型不符最常见，大多母亲为O型，患儿为A型或B型。O型母亲血浆中往往存在较高效价的IgG型抗-A、抗-B或抗-A，B抗体，抗体通过胎盘进入胎儿血液循环，与胎儿红细胞发生免疫反应。这些抗体天然产生，在第一胎就能发生新生儿溶血病，由于胎儿出生时ABO血型发育不全以及补体量很少，临床症状通常较轻[2，4]。

本文检测结果显示，ABO血型系统阳性标本直抗强度均≤1+，间接证实ABO血型不合导致的新生儿溶血症状较轻。73例阳性标本中有53例（72.60%）为ABO血型不合导致的新生儿溶血病，其中A型30例（41.10%），B型23例（31.51%），与人群中A、B血型分布有关。33例阴性标本中A型10例（30.30%），B型14例（42.42%），O型9例（27.27%），新生儿出生后临床有溶血症状，医疗机构送检目的为确认是否存在新生儿溶血病，检测后排除。A型患儿与B型患儿比较，A型阳性率75.00%（30/40），高于B型阳性率62.16%（23/37），原因是同一个体抗-A效价大多高于抗-B[5]。

Rh血型是除ABO血型外最容易出现新生儿溶血病的血型系统，一般在第二胎后引起新生儿溶血病。本文73例阳性标本中17例（23.29%）为Rh血型新生儿溶血病，均为二胎及二胎后，临床症状严重。原因是Rh抗体对补体依赖性低，可同时引起血管内和血管外溶血。Rh血型系统中D抗原免疫原性最强，其次为E、c[6]。由于临床上对RhD阴性孕妇血清中检出抗-D抗体比较重视，加之采用静脉注射免疫球蛋白进行预防，抗-D抗体引起的严重新生儿溶血病在减少[7-8]。本文17例Rh血型系统新生儿溶血病，抗-D抗体7例（9.59%），抗-E、-c抗体6例（8.22%），抗-E抗体3例（4.11%），抗-c抗体1例（1.37%），说明在妊娠、输血等免疫刺激下，产生抗-E、-c抗体概率最高，这与抗原分布有关[9]，中国人群中CCDee表型（缺E、c抗原）在Rh血型系统中比例最高[10]。溶血三项检测显示，Rh系统导致的新生儿溶血病中82.35%（14/17）患儿标本直抗强度≥2+，佐证了严重临床溶血症状。实际工作中，大多数医疗机构会对RhD阴性孕妇进行意外抗体筛查及鉴定，一般不考虑对孕妇进行常规抗体筛查，因此Rh血型系统中抗-D抗体之外的意外抗体存在漏检的可能。

其他血型系统导致的新生儿溶血病较少见，本文检测到3例为MN血型系统，其中2例孕妇为第一胎，另1例为第二胎，均在产检时发现ABO血型正反不符，实验室检测发现反定型O细胞阳性，怀疑存在意外抗体，经谱细胞抗体鉴定，盐水法检出IgM型抗-M抗体；将孕妇血浆用2-巯基乙醇破坏后进行抗体鉴定，低离子抗人球蛋白卡法检出IgG型抗-M抗体，孕妇MN血型表型为NN型。大多数抗-M是IgM+IgG，其中以IgM为多，IgG较少，78%以这种混合形式存在[11]。这3例孕婦产下的新生儿有溶血症状，症状不严重，溶血三项检测确认为MN血型系统新生儿溶血病，患儿MN血型表型为MN型。

自2016年以来，国家实施“二孩”“三孩”政策，在带来人口增长的同时，也给孕产妇的孕期安全和临床输血带来挑战，非ABO血型系统导致的新生儿溶血病发生率明显增加[12]。因此，建议在孕妇妊娠8～12周建档时进行ABO和Rh血型鉴定及红细胞意外抗体筛查[13]，如筛查出意外抗体，应鉴定抗体类型及特异性。意外抗体为IgG型时需检测其抗体效价，分析引起新生儿溶血病的可能性及其危险程度，并定期做好抗体监测。重点关注二胎及二胎后孕妇Rh系统意外抗体，提前做好相关预案，以保障孕产妇及新生儿的生命安全。如抗体筛查阴性，需在妊娠28周再次复查，若未检出有意义的抗体，无需进一步做产前血型鉴定或抗体筛查；若抗体为弱阳性或效价<64时，在妊娠28周后进行复查，若为阴性或效价无变化则正常分娩；若抗体检测为弱阳性或检出具有临床意义的抗体或抗体效价升高≥2个稀释度，建议每2周进行监测直至分娩[13]；如果抗体效价持续升高，可采用静脉注射免疫球蛋白进行预防或在保证孕妇及胎儿安全的前提下提前分娩。

[参考文献]

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[8] 肖冬英，谢家洪. 静脉输注免疫球蛋白治疗新生儿溶血症疗效观察［J］. 医学信息，2014，27（23）：191-192.

[9] 陈妙婵，李启欣，陈活强，等. ABO以外血型抗体引起的新生儿溶血病分析［J］. 广州医药，2011，42（4）：53-56.

[10] 张辉，丁梦圆，许学明，等. 苏州市D抗原阳性无偿献血者C和e抗原阴性率及其筛血策略［J］. 交通医学，2022（2）：188-189，195.

[11] 李树中，李凌波. 血型概论［M］. 上海：上海科学技术出版社，2021：152.

[12] 李志强. 应高度重视孕产妇免疫血液学异常结果与处置对策［J］. 临床输血与检验，2021，23（4）：409-411.

[13] 中国输血协会免疫血液学专业委员会. 胎儿新生儿溶血病实验室检测专家共识［J］. 临床输血与检验，2021，23（1）：20-23，28.

[收稿日期] 2022-10-20

（本文编辑   缪宏建）