一起牛场布鲁氏菌病的诊断和防治

李 鑫，王海燕，夏江涛，韩 荣，古丽孜亚·卡肯，吕双燕，阿依健·海拉提，舍卫俊，郑汝芸，舒 展*

（1.新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052；2.新疆阿勒泰地区动物疾病控制与诊断中心，新疆 阿勒泰 836500）

布鲁氏菌病（简称布病），是由布鲁氏菌病属细菌引起的一类人畜共患传染病。病原为布鲁氏菌，大小为0.5 ～0.7 μm 杆状或球形的革兰氏阴性胞内寄生菌，能够引发人畜睾丸炎、流产、早产、关节炎等症状[1]，目前研究报道的布鲁氏菌有15 个菌种[2]，世界动物卫生组织（WHO）将其列为必须通报的动物疫病[3]。我国将布病列为乙类法定报告传染病、职业病，《中华人民共和国动物防疫法》规定布病为二类动物疫病[4]，新疆是我国布病高发的地区之一[5，6]。

目前动物布病血清学检测方法主要有虎红平板凝集试验（RBT）做初步筛查、试管凝集试验（SAT）做确诊，但是这两种方法都是以光滑型脂多糖（S-LPS）抗原为基础，而动物接种疫苗后也能产生S-LPS 抗体，所以RBT 和SAT 均不能区分感染和免疫抗体[7]。而光滑型布鲁氏菌表面还有一种天然半抗原（Natiwa Hapten，NH），接种疫苗的动物检测不到此抗体，因此利用NH 琼脂扩散试验（Gel Diffusion，GD）可以很好地鉴别疫苗免疫和野毒感染抗体[8]。

阿勒泰地区某牛场有成年牛259头（48月龄母牛）、犊牛72头（8月龄母牛），2022年初32头牛发生流产，按“动物布鲁氏菌病诊断技术”标准进行检测SAT 呈阳性，该牛场免疫背景不详，根据“农业农村部《畜间布鲁氏菌病防控五年行动方案（2022-2026年）》”要求，向相关部门申请备案后，对该牛场进行了血清学检测，扑杀并无害化处理阳性牛，疫苗免疫阴性牛，严格消杀，以期有效控制此牛场布病传播，为本地区布病防控提供指导。

1 材料与方法

1.1 试验动物

阿勒泰地区某牛场，成年牛259 头（48 月龄母牛）、犊牛72 头（8 月龄母牛），2022 年初流产数为32头，流产牛RBT和SAT检测呈阳性。

1.2 主要试剂与仪器

布病虎红平板凝集试验抗原（批号：202019）、布病阳性血清（批号：201501）、布病试管凝集试验抗原（批号：202004）、布病阴性血清（批号：201901），均购自哈药集团生物疫苗有限公司；布鲁氏菌NH-GD 抗体琼脂扩散检测试剂盒（青岛瑞尔唯特生物技术有限公司，批号：21030041）；布氏杆菌活疫苗A19（天康生物股份有限公司，批号：2020009）；10～100 μm 移液器（艾本德）；恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司，LRH-70）。

1.3 试验方案

免疫前采集所有牛血清，进行RBT、SAT 检测，将SAT 阳性样品进行NH-GD 检测，经NH-GD 检测阳性的牛扑杀并无害化处理，对阴性牛进行整群布病疫苗（A19）免疫。整个试验期严格消毒。免疫后第180 d再次采集血清进行RBT、SAT检测，同时将SAT阳性样品进行NH-GD 检测，统计免疫前后阳性率和转阴率，以及免疫前后胎次的流产率。

1.4 样品采集

0 d、180 d颈静脉采集试验牛血液5 mL，将血液中血清分离到EP管中，标记后-20 ℃冷冻保存备检。

1.5 试验方法

血清学检测：RBT、SAT 按照国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646—2018）操作并判定结果；NH-GD 按试剂盒说明书操作并判定结果；布病免疫按照说明书进行，根据《OIE 陆生动物诊断试验与疫苗手册》牛种布鲁氏菌A19 株疫苗使用要求，成年牛干奶期以3×109CFU/头份剂量、犊牛以6×1010CFU/头份剂量进行皮下注射；试验开始后按《家畜养殖场所布鲁氏菌病消毒技术规范》（DB65/T 4123—2018）对场区严格消毒；最后对试验结果进行统计分析。

阳性率=阳性数/检测数×100%

转阴率=（检测数-阳性数）/检测数×100%

流产率=流产数/妊娠牛数×100%

2 结 果

2.1 流产牛群布病血清学检测结果

RBT、SAT、NH-GD 检测成年牛阳性数分别为95 头、73 头、39 头，阳性率分别为36.56%、28.18%和15.06%；犊牛阳性数均为0，见表1。

表1 流产牛群布病血清学检测结果

2.2 布病疫苗免疫后180 d抗体检测结果

布病疫苗免疫后180 d，RBT、SAT 检测成年牛阳性数分别为78 头和71 头，转阴率分别为64.55%和67.73%；犊牛阳性数分别为22 头和19 头，转阴率分别为67.73%和73.61%。NH-GD 检测阳性数均为0，见表2。

表2 布病苗免疫后180 d抗体检测结果

2.3 流产情况统计

免疫前后胎次流产情况结果显示，免疫前210 头怀孕牛流产数为32 头、流产率为15.23%，免疫后176头怀孕牛流产数为2头、流产率为1.13%，见表3。

表3 免疫前后妊娠牛流产情况统计

3 讨 论

目前阿勒泰地区布病防控遵循“检疫-扑杀阳性畜-免疫”的原则[9]。检疫用RBT 检测做初筛，SAT 检测做确诊[10]。而RBT 和SAT 检测方法无法区别感染抗体和免疫抗体，根据当前布病防控政策，动物免疫后产生抗体被SAT检测确诊为阳性动物，会导致“误诊-误杀”，造成严重的经济损失，同时“误诊”也会影响布病阳性动物数量的统计，从而干扰布病防控工作的效果评估。本试验利用NH-GD检测出34头SAT阳性牛为免疫抗体动物，从而避免了34头牛扑杀造成的经济损失。

试验中免疫前成年牛RBT检测阳性率为36.56%，SAT检测阳性率为28.18%，相同样品RBT检测阳性率高于SAT检测，此情况可能与刘坤洋等[11]研究报道的RBT检测很容易受到特异性抗体的影响呈假阳性的情况有关，因此在检测中应当保证样品新鲜，避免样品反复冻融和溶血等因素的干扰。免疫前NH-GD 检测阳性成年牛为39头，而免疫前流产头数为32头，7头牛未出现流产症状，或与王冰清[12]报导的动物感染布病后可能不发病，在无症状的情况下不断排菌的现象相关。免疫前成年牛NH-GD 检测阳性率为15.06%的，而犊牛检出率为0.00%，此结果可能与唐义国[13]研究报导的幼畜对布鲁氏菌具有抵抗力有关，虽然犊牛血清检测均为阴性，但仍可通过粪便传播布病。180 d 后，SAT检测，成年牛转阴率为67.73%，犊牛转阴率为73.61%，此结果与董浩等[14]研究报导的以600 亿CFU/头剂量布病A19 疫苗免疫3 月龄奶牛，90 d 抗体转阴率大于90%，以及高洪霞[15]研究报导的以200 亿CFU/头剂量布病A19疫苗免疫12月龄奶牛，180 d转阴率为84%的结果均不同，这可能与免疫剂量、动物品种以及免疫操作等因素有关。排除饲养管理、天气、应急等因素造成的流产外，试验将该牛场流产率从15.23%降低到1.13%，可以判定该牛场布病得到了有效防控。

4 结 论

本试验对阿勒泰地区某牛场母牛流产进行RBT初筛、SAT诊断、NH-GD辨别免疫和野毒感染后，扑杀并无害化处理阳性牛，免疫阴性牛，饲养环境严格消毒，有效降低了流产率，该流程不仅减少了布病“误杀”，而且有效控制了布病的流行和发生，为阿勒泰地区布病防控提供了可以借鉴的方法。