PAI-1、VEGF 及其受体flk-1 与IgAN 患者肾小管间质损害程度相关性分析

张俪缘

（南昌大学第一附属医院高新医院检验科，江西 南昌330000 ）

IgA 肾病（IgAN）是最为常见的一种原发性肾小球疾病，以肾小球系膜区以IgA 或IgA 沉积为特点[1]。肾小管间质损害（Tubulointerstitial lesions，TIL）为间质性肾炎，研究表明，TIL 程度已成为决定肾脏疾病的预后的重要指标[2]。早期判断TIL 程度尤为重要，可以避免不必要的或过度的治疗。近年来国内分子诊断技术飞速发展，纤溶酶原激活物抑制物-1（Plasminogen activator Inhibitor-1，PAI-1）是组织型纤溶酶原激活物和尿激酶型纤溶酶原激活物的主要抑制剂，可抑制组织和血浆纤维蛋白溶解[3]。血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelium growth factor，VEGF）是一种对血管生长有强诱导作用并且能促进内皮细胞的增生、迁移的生长因子[4]。本研究就PAI-1、VEGF 及其受体VEGF-R2（flk-1）与IgAN 患者TIL 程度相关性进行分析，旨在为临床诊治提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年8 月至2021 年9 月我院收治的IgAN 患者86 例，作为IgAN 组。其中男48 例，女38 例，年龄为38～64 岁，平均年龄（51.28±5.67）岁；根据Katafuchi 半定量积分[5]评估TIL 损伤程度，轻度损伤者31 例，中度损伤者25例，重度损伤者30 例。纳入标准：满足IgAN 诊断标准[6]；入组前未接受规范性治疗；临床资料完整无缺失。排除标准：伴有缺血性肾损伤；合并急性或慢性感染者；合并糖尿病、冠心病或（和）恶性肿瘤疾病者；继发性IgAN 者。

同时以同期于我院疑似肾脏恶性肿瘤而进行病理活检且结果正常的85 例对象作为对照组，男46 例，女39 例，年龄为36～63 岁，平均年龄（52.87±5.43）岁。IgAN 组与健康对照组性别、年龄比较无差异，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法 采用免疫组化染色法检测两组VEGF及其受体flk-1 的表达情况。详细步骤为：取肾活检组织制成的石蜡，按2 μm 切片、脱蜡。蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5 分钟。5%～10%正常山羊血清封闭，孵育。倾去血清后滴加稀释的兔抗人VEGF 多抗（购自北京义翘神州科技股份有限公司）、鼠抗人flk-1 单抗（购自杭州联科生物技术股份有限公司），37 ℃孵育1 h 或4 ℃过夜。PBS 冲洗，加稀释的生物素标记二抗，37 ℃孵育30 mim；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育30分钟。PBS 冲洗，滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37 ℃孵育30 min。PBS 冲洗，显色剂显色，冲洗、复染、封片。于400 倍视野下每例随机选取10 个肾小球，分别计算VEGF、flk-1 阳性面积占肾小球面积的百分比，取其均值为最终表达量。

PAI-1：抽取所有研究对象肘静脉血5 mL，离心提取血浆，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定，人ELISA PAI-1 试剂盒购自北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)，按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学方法 本研究数据均采用SPSS 18.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）描述，两组间比较行t 检验，多组间比较行F 检验；相关性采用Pearson 相关性分析；P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组别PAI-1、VEGF 及flk-1 表达的对比IgAN 患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表达均高于对照组，比较有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同组别PAI-1、VEGF 及flk-1 表达的对比

2.2 不同TIL 损伤患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表达的比较 在IgAN 患者中，以重度TIL 损伤组PAI-1、VEGF 及flk-1 最高，轻度TIL 损伤组PAI-1、VEGF 及flk-1 最低，各组间PAI-1、VEGF 及flk-1表达比较有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同TIL 损伤患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表达对比

2.3 PAI-1、VEGF 及flk-1 与肾小管间质损害程度的相关性分析 PAI-1、VEGF 及flk-1 均与肾小管间质损害程度呈正相关性（P＜0.05），见表3、图1-3。

图1 PAI-1 与肾小管间质损害程度的相关性分析散点图

图2 VEGF 与肾小管间质损害程度的相关性分析散点图

图3 flk-1 与肾小管间质损害程度的相关性分析散点图

表3 PAI-1、VEGF 及flk-1 与肾小管间质损害程度的相关性分析

3 讨论

IgAN 常伴无症状性血尿及不同程度蛋白尿，随着病情的发展最终可诱发终末期肾病（Endstage renal disease，ESRD）[7]。肾小管间质病变程度与IgAN 患者肾功能密切相关，是影响预后的病理组织学改变的因素之一。因此，准确判断肾小管间质损伤程度有利于了解临床诊治疗效及预测疾病发展。

PAI-1 即内皮细胞型纤溶酶原激活物抑制因子，属于丝氨酸蛋白酶抑制物。肾小管间质损害与细胞外基质降解受到抑制有关，而在这一过程中，PAI-1 则其重要作用[8]。马燕等[9]研究发现，血清PAI-1 水平在原发性IgA 肾病患者中随病情程度加剧持续增高，血清PAI-1 水平有利于评估原发性IgA 肾病病情程度。本研究结果显示，IgAN 患者PAI-1 表达高于对照组，随着肾小管间质损害程度的加重，PAI-1 水平明显升高。其原因是PAI-1 在高水平状态下不仅可导致肾内肾小球血管硬化，同时还可促进肾小管间质纤维化，加速病变发展[10]。

VEGF 是一种选择性的内皮有丝分裂原，其受体则属于络氨酸激酶c-fms 中的一种。本研究结果显示，VEGF 及flk-1 均与肾小管间质损害程度呈正相关性，表明VEGF 及其受体参与IgAN 患者肾小管间质损害的进展。进一步分析其原因，VEGF对肾小球功能的影响基于刺激新生血管生成、刺激内皮细胞增殖与转移以及免疫抑制作用等生物学功能[11]。此外，安丽丽等[12]研究指出，VEGF 与受体flk-1 结合后可促使下游炎性介质聚集，诱发炎性反应综合征；而炎症反应的爆发继而可破坏肾小管上皮细胞完整性，刺激系膜细胞增生，改变细胞外基质。基于上述研究，我们认为PAI-1、VEGF及其受体flk-1 在IgAN 肾损伤发生发展中扮演重要角色，临床可单独或联合检测三者水平变化，及时评估临床诊治的进展。

综上所述，PAI-1、VEGF 及其受体flk-1 与IgAN 患者肾小管间质损害程度显著相关，监测各指标水平有利于判断肾小管病理损害程度。